5.8. Принципы лабораторной диагностики дефицита отдельных факторов свертывания (диагностика гемофилии)

• Диагностируют по удлинению времени свертывания цельной крови и активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ); время кровотечения и протромбиновое время не изменены.

• Тип и тяжесть гемофилии определяют по снижению коагулянтной активности антигемофильных глобулинов в плазме (факторы VIII и IX).

• Поскольку активность фактора VIII может быть снижена и при болезни Виллебранда, у пациентов с впервые обнаруженной гемофилией А следует определить содержание антигена фактора Виллебранда (при гемофилии А содержание антигена остаётся нормальным).

• Скрининг пациентов на наличие ингибиторов к факторам VIII и/или IX особенно необходим перед плановыми хирургическими вмешательствами.

• Пренатальная диагностика и выявление носителей (генетические исследования).

План обследования при подозрении на гемофилию

• анализ крови: количество эритроцитов, ретикулоцитов и гемоглобина; цветовой показатель, лейкоцитарная формула, СОЭ; диаметр эритроцитов (на окрашенном мазке);

• коагулограмма: количество тромбоцитов; время кровотечения и время свертывания крови; активированное частичное тромбопластиновое и протромбиновое время; содержание IX и VIII фактора и антител к VIII фактору;

• биохимия крови: билирубин прямой и непрямой; трансаминазы АЛТ и ACT; мочевина; креатинин; электролиты (К, Na, Ca, P);

• общий анализ мочи (исключение гематурии);

• анализ кала на скрытую кровь (проба Грегерсена);

• маркеры гепатитов (А, В, С, Д, Е);

• группа крови и Rh-фактор.

5.9. Основные лабораторные тесты для характеристики конечных этапов системы свертывания (тромбиновое время, фибриноген)

• Определение тромбинового времени (ТВ) характеризует конечный этап процесса свертывания – превращение фибриногена в фибрин под действием тромбина, на него влияют концентрация фибриногена в плазме и наличие продуктов деградации фибрина.

• Ключевым реагентом является тромбин, который должен быть максимально очищенным и сохранять свою активность при лиофилизации.

• При исследовании используют тромбин с активностью 3 МЕ/мл и 6 Ме/мл. Для исследования плазмы, не содержащей гепарин, используют тромбин 3 МЕ/мл (норма должна быть 16-21±5 сек), при работе с гепаринизированной плазмой – тромбин 6 МЕ/мл (норма 9-13±2 сек).

Принцип метода

• Состав набора: стабилизатор (этиленгликоль), тромбин человека (лиофильно высушенный)

• При добавлении тромбина к исследуемой цитратной плазме время образования сгустка фибрина зависит только от количества и активности фибриногена в образце плазмы, активности тромбина и наличия ингибиторов.

• Реакция проходит в одну стадию – определяется продолжительность времени образования фибринового сгустка (тромбиновое время) после добавления к плазме крови арствора тромбина

Фибриноген

• Количественный анализ фибриногена по методу Клаусса.

• Метод основан на особенностях кинетики реакции фибриноген-тромбин, когда исследуемую плазму крови разбавляют в 10 раз с целью снижения влияния ингибиторов тромбина (антитромбина IIIи др.).

• В этих условиях при высоких концентрациях тромбина и низких концентрациях фибриногена время образования сгустка зависит только от количества фибриногена.

• Регистрируют время появления сгустка.

• Сгусток невозможно визуализировать глазом – только на оптическом коагулометре.

• Концентрацию фибриногена определяют по калибровочной прямой, используя плазму с известным содержанием фибриногена.