Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Методы микроскопического анализа в ботанике. Учебно-методическое пособие для студентов биологического факультета, обучающихся по направлению подготовк.pdf
1) на чешуйке луковицы с внутренней стороны бритвой делают
несколько поперечных надрезов, после чего чешую несколько раз
инфильтруют;
2) полоску внутреннего эпидермиса снимают пинцетом и переносят
на предметное стекло в каплю водопроводной воды;
3) препаровальной иглой расправляют тонкую кожицу;
4) закрывают покровным стеклом.
Анализируют препарат с помощью светового микроскопа.
2.1.5. Приготовление прижизненных препаратов
тычиночных нитей традесканции
На молодых волосках тычиночных нитей традесканции виргинской
(Tradeskantia virginiana L.) можно изучать стадии митотического деления.
Приготовление препарата включает следующие этапы:
1) на сухом предметном стекле из бутона длиной 2–4 мм с помощью
препаровальных игл выделяют тычинки;
2) отделяют от пыльников тычиночные нити и пинцетом или препаровальной иглой переносят их на другое предметное стекло в каплю
водопроводной воды;
3) закрывают покровным стеклом.
Анализ препаратов живых растительных клеток проводят с помощью
светового или фазово-контрастного микроскопа.
2.1.6. Приготовление прижизненных препаратов микроспор и пыльцевых
зерен покрытосеменных растений
У традесканции, снежноягодника (Symphoricarpus albus (L.) Blake.)
и ряда других покрытосеменных растений в живом состоянии можно изучать микроспоры и пыльцевые зерна:
1) на сухом предметном стекле с помощью пинцета или препаровальных игл из свежесобранных цветков выделяют пыльники;
2) переносят пыльники на другое предметное стекло в каплю сахарозы
(5–10%);
3) лезвием бритвы делают поперечный разрез пыльника, разделяя его
на две половинки;
4) выдавливают иглой из пыльника в раствор пыльцевые зерна;
5) с помощью препаровальной иглы или пинцета удаляют из капли
остатки стенок пыльника;
6) закрывают каплю с пыльцой покровным стеклом.
Анализ препаратов живых растительных клеток проводят с помощью
светового или фазово-контрастного микроскопа.
21
2.2. Микроскопирование живых объектов в течение продолжительного времени
Для решения некоторых исследовательских задач требуется микроскопирование живых растительных объектов на протяжении нескольких часов
или дней. Например, продолжительное время занимают такие процессы,
как рост мицелия грибов, прорастание спор грибов и пыльцевых зерен
цветковых растений, рост пыльцевых трубок, культур клеток и тканей
в условиях in vitro и т. д. Для того чтобы сделать возможными подобные наблюдения, при микроскопировании необходимо сохранить или воссоздать
объектам оптимальные для их жизни условия (температуру, влажность,
аэрацию и др.). При анализе роста эксплантов, каллусов или регенерантов
растений в культуре in vitro обязательным является сохранение стерильных условий их выращивания. Такие объекты нельзя вынимать из культивационных сосудов (пробирок, чашек Петри и др.), поэтому их анализ
проводят с использованием стереомикроскопов, непосредственно размещая
культивационный сосуд на предметный столик.
В других случаях микроскопирование объекта проводят в так называемых влажных камерах. Размеры таких камер должны позволять использовать их на предметном столике микроскопа и при необходимости обеспечивать возможность видеть объект с разных сторон. Световые прямые
микроскопы имеют небольшую величину рабочего расстояния (расстояния
от фронтальной линзы объектива до покровного стекла) особенно на больших увеличениях, поэтому при использовании объективов с увеличением
выше 20 нужно, чтобы одна из стенок камеры была сделана из покровного
стекла. Этому условию наиболее полно отвечают камеры Ранвье и кольца
Ван-Тигема.
Камера Ранвье представляет собой предметное стекло с лункой (сферическое углубление на поверхности), которая закрывается покровным стеклом. Предварительно предметное стекло на расстоянии около 1 см от краев
лунки смазывается вазелином с помощью стерильной стеклянной палочки.
На покровное стекло наносят каплю жидкости с объектом, стекло переворачивают и закрывают им лунку предметного стекла. Для предотвращения
испарения влаги покровное стекло можно окантовать с помощью кисточки
смесью расплавленного парафина с канадским бальзамом в соотношении
10 : 1.
Кольца Ван-Тигема – это невысокие стеклянные цилиндрики, изготовленные из стеклянной трубки или пробирки диаметром до 1,5 см и толщиной стенок 1,2–2 мм. Кольца приклеивают вазелином или расплавленным
парафином к чистому предметному стеклу. Как и при работе с камерами
Ранвье, объект размещают в каплю среды, которую наносят на покровное стекло. Верхний край кольца смазывают вазелином, покровное стекло
22
переворачивают и закрывают им кольцо так, чтобы объект располагался
в центре в висячей капле.
Влажную камеру также можно изготовить из прямоугольного кусочка
оргстекла толщиной около 1 см, просверлив в нем отверстия диаметром
около 1 см. Нижнюю сторону такой пластинки смазывают вазелином или
расплавленным парафином и наклеивают на чистое обезжиренное предметное стекло.
2.2.1. Методы проращивания пыльцы
на искусственной питательной среде
Проращивание пыльцы на искусственной питательной среде проводят
с целью определения ее фертильности, а также для исследования процесса
спермиогенеза у растений с двухклеточной пыльцой и изучения влияния
различных факторов на рост пыльцевых трубок. В качестве питательной
среды для проращивания пыльцы используют раствор сахарозы (2–50%).
Концентрацию раствора подбирают эмпирически для каждого объекта. Для
улучшения роста пыльцевых трубок в среду можно добавить небольшое
количество борной кислоты (0,01%). Среда может быть как жидкой, так
и твердой, содержащей агар-агар. Пыльцевые зерна прорастают только
на свежеприготовленной среде. Для проращивания пыльцы на жидкой среде используют предметные стекла с лунками (камеры Ранвье):
1) на сухом предметном стекле с помощью препаровальных игл из
свежесобранного цветка выделяют пыльники. Иглой делают разрез
вдоль пыльника и собирают на ее кончик небольшое количество
пыльцы;
2) на покровное стекло наносят каплю среды, в которую опускают
кончик иглы с прилипшими к нему пыльцевыми зернами;
3) у предметного стекла с лункой смазывают вазелином края лунки;
4) аккуратно переворачивают покровное стекло так, чтобы капля
с пыльцой не растеклась, а осталась компактной и висячей.
Закрывают покровным стеклом лунку на предметном стекле таким
образом, чтобы капля располагалась в центре лунки.
Во влажной камере Ранвье пыльца, как правило, начинает прорастать
через 15–30 мин.
Вместо стекол с лунками можно использовать кольца Ван-Тигема или
пластинки из оргстекла. При этом для увлажнения воздуха на дно камер
помещают небольшой кусочек фильтровальной бумаги, смоченный дистиллированной водой. Верхний край кольца или верхнюю поверхность пластинки из оргстекла вокруг отверстия смазывают вазелином. На покровное стекло капают 1–2 капли среды, в которую сеют пыльцу. Покровное
стекло с каплей, в которой находится пыльца, аккуратно переворачивают
и закрывают им влажную камеру так, чтобы капля с пыльцой оказалась
внутри камеры.
23
Анализ роста пыльцевых трубок осуществляют с помощью бинокулярного стереомикроскопа (МБС-9 и др.) или прямого светового микроскопа
при малом увеличении (4×, 5×, 10×). Для исследования пыльцевых трубок
при увеличении более 20
на чистое предметное стекло. Анализ неокрашенных пыльцевых трубок
проводят с помощью фазово-контрастного микроскопа. Для детального анализа их с помощью светового микроскопа можно приготовить тотальный
окрашенный препарата. Для этого на чистое предметное стекло наносят
каплю ацетокармина. Покровное стекло с проросшей пыльцой снимают
с кольца и закрывают им каплю кармина на предметном стекле.
×
покровные стекла снимают с камер и переносят
3. МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ
ТОТАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК
Приготовление тотальных препаратов растительных клеток включает
следующие основные этапы: 1) сбор материала; 2) фиксацию; 3) окраску объекта; 4) получение монослоя клеток на предметном стекле путем
раздавливания ткани, приготовления среза, выделения отдельных клеток
или других манипуляций. В некоторых случаях последние два этапа могут
меняться местами.
3.1. Сбор и фиксация материала
Сбор материала может производиться как в условиях эксперимента,
так и в природных популяциях. Для получения качественного препарата
при сборе материала необходимо учитывать ряд факторов: особенности
объекта, цели и задачи исследования, температуру и влажность окружающей среды и т. д. Например, для исследования мейоза и митоза сбор
материала рекомендуется проводить в утренние часы, когда клетки делятся
наиболее интенсивно, а сбор пыльцы для проращивания на искусственной
питательной среде нельзя вести в дождь или при высокой температуре.
В природных популяциях довольно трудно определить стадию развития
женского гаметофита. В таком случае следует ориентироваться на корреляционные связи между стадиями развития женской и мужской генеративной сферы. Стадию развития последней достаточно просто установить
в полевых условиях с использованием портативных переносных микроскопов. Важно также и количество собранного материала, которое должно
быть достаточным для получения достоверных результатов. Например, при
морфологических исследованиях способа репродукции популяции выборка
должна состоять не менее, чем из 10–15 растений.
24
Непосредственно за сбором материала следует его фиксация – мгно-
венное умерщвление живого объекта без изменения прижизненной структуры его клеток. Фиксацию можно проводить фиксирующими жидкостями
(фиксаторами), мгновенным замораживанием в жидком азоте (криофиксацией) или замораживанием с последующим высушиванием в вакууме
(лиофилизацией).
Некоторые фиксаторы также протравливают материал, делая его более
восприимчивым к красителям. Необходимо соблюдать следующие правила
фиксации:
1) фиксатор необходимо готовить непосредственно перед его использованием;
2) нельзя использовать теплый раствор;
3) в сосуде, в котором производят фиксацию, объект должен занимать
не более 1/3 объема, а фиксирующая жидкость не менее 2/3 объема.
Избыток фиксатора необходим для его равномерного проникновения в объект;
4) фиксировать можно только свежий материал без признаков подсыхания или увядания: они нарушают его структуру и негативно влияют
на качество препарата;
5) крупный объект, если это не противоречит целям исследования, разделяют на небольшие кусочки для лучшего проникновения в него
фиксирующей жидкости;
6) в сосуд с зафиксированным объектом должна быть вложена этикетка, на которой указывают фиксационный номер, место и дату сбора.
Более подробные сведения о зафиксированном материале приводят
в ведомости для фиксации, которую заполняют по нижеприведенному образцу (табл. 1).
Срок хранения материала в фиксаторе сильно варьирует в зависимости
от его химического состава. В одних фиксаторах материал можно хранить
годами, в других лишь несколько часов. После истечения срока хранения
объекта в фиксирующей жидкости его помещают в 70% этиловый спирт
(приготовление этилового спирта требуемой концентрации изложено в параграфе 3.4). В зависимости от вещества, составляющего основу фиксатора,
Таблица 1
Фиксационная ведомость
Фиксацион-
ный номер
Дата сбора Место
сбора
1 25.05.2010 Окрестности
Саратов
(с. Пристан-
ное,
51.600660,
46.206823)
Объект Материал Фиксатор Примечание
Poa
pratensis
Соцветия Фиксатор
Кларка
(3:1)
Разгар
цветения
25
их разделяют на несколько групп, наиболее распространенными являются
спиртовые и формалиновые.
В цитоэмбриологических исследованиях растений широко используют
фиксаторы Карнуа, Кларка, Навашина и Чемберлена.
Фиксатор Карнуа
ледяная (100%) уксусная кислота
хлороформ
спирт этиловый (96–100%)
Фиксатор Карнуа очень быстро проникает в ткани, поэтому удобен для фиксации объемного материала (завязей, семяпочек и т. п.), однако время хранения в нем
не должно превышать 6–12 ч.
Фиксатор Кларка
(уксусно-кислый спирт, фиксатор 3 : 1)
спирт этиловый (96%)
ледяная (100%) уксусная кислота
Фиксатор Кларка наиболее прост по своему химическому составу, он достаточно быстро проникает в небольшие объекты и имеет довольно большой срок хранения
в нем материала (до нескольких суток). Это позволяет использовать его в экспедиционных условиях, поскольку исключаются дополнительные работы по переводу
зафиксированного материала в 70% спирт. Фиксатор Кларка также наиболее удобен
при проведении практических работ на большом и малом практикуме.
Фиксатор Навашина
ледяная (100%) уксусная кислота
формалин (40% от продажного)
хромовая кислота (1%)
Фиксатор обеспечивает консервирование и протраву материала. Фиксирующие
жидкости, содержащие хромовую кислоту, медленно проникают в объект, поэтому
фиксацию смесью Навашина следует проводить не менее 12 ч. В то же время следует
помнить, что срок хранения объекта в фиксаторе Навашина не должен превышать
12–24 ч. После истечения этого срока материал следует перевести для длительного
хранения в 70% этиловый спирт.
Фиксатор Чемберлена
спирт этиловый (50–70%)
ледяная (100%) уксусная кислота
формалин (40% от продажного)
В данном фиксаторе объект можно хранить несколько лет. Он наиболее удобен
при фиксации материала в полевых (экспедиционных) условиях, поскольку не требуется проводить дополнительную процедуру замены фиксатора на 70% этиловый
спирт. Необходимо помнить, что формалин в смесь Чемберлена и другие формалиновые фиксаторы следует добавлять непосредственно перед их применением.
Смесь ЕРА
спирт этиловый (70%)
ледяная (100%) уксусная кислота
формалин (40% от продажного)
1 часть
3 части
6 частей
3 части
1 часть
1 часть
4 части
10 частей
90 частей
5 частей
5 частей
100 мл
7 мл
7 мл
26
В зависимости от размера объекта фиксацию в смеси ЕРА проводят в течение
недели и более, после чего материал переводят в 70% этиловый спирт. Фиксатор
удобен при полевых и массовых фиксациях.
сулема
двухромовокислый калий
сернокислый натрий
дистиллированная вода
ледяная (100%) уксусная кислота
Уксусную кислоту в смесь необходимо добавлять непосредственно перед использованием фиксатора. Время фиксации может варьировать от 1 до 24 ч. После
чего объект необходимо промыть в течение суток водопроводной водой до обесцвечивания воды. Материал обесцвечивают в 70% спирте, где его можно хранить. Цвет
фиксатора – насыщенно красно-бордовый. Как только сулема будет удалена, раствор
перестанет обесцвечиваться.
спирт этиловый (100 или 96%)
хлороформ
ледяная (100%) уксусная кислота
формалин (40% от продажного)
Время фиксации от 5 мин и более. Фиксатор, как правило, используют при
приготовлении временных давленных препаратов.
Фиксатор Ценкера
5 г
2,5 г
1 г
100 мл
5 мл
Фиксатор Батталья
10 мл
2 мл
2 мл
2 мл
3.2. Окраска материала
В состав большинства фиксаторов входят токсичные вещества, которые могут повлиять на структуру объекта, вызвать его мацерацию или
излишнее утолщение тканей. В связи с этим перед окраской материал
необходимо тщательно промыть водой или спиртом в зависимости от типа
использованного фиксатора и дальнейшего способа окраски. Как правило,
промывку осуществляют той жидкостью, которая составляет основу используемого далее красителя. Промывку материала водопроводной водой
проводят следующим образом: зафиксированный объект вместе с этикеткой помещают в марлевые узелки, перевязывают их ниткой и переносят
в стакан с водой. Сверху в стакан кладут воронку и ставят его под кран
с проточной водой. Оставляют под струей воды на время, указанное в конкретной методике (в среднем около 24 ч).
Окрашивание материала – сложный физико-химический процесс.
Окрашивание усиливает световой контраст клеточных структур и делает
их более доступными для наблюдения. Все красители по своему химическому составу представляют собой сложные органические соединения –
производные бензола с различными красящими группами. Объекты кислой природы окрашиваются основными красителями, проявляя базофилию,
а объекты, имеющие основный характер, окрашиваются кислыми красителями, проявляя оксифилию. Красители делят на:
27
1) кислые (анионные) красители – эозин, кислый фуксин, пикриновая
кислота, флоксин, ацетокармин, индигокармин и др. Окрашивают
белковые компоненты цитоплазмы, неклеточные структуры, некоторые секреторные гранулы;
2) основные (катионные) красители – гематоксилин, азур, янус зеленый, бисмарк коричневый, сафронин, пиронин, тионин, альциановый синий и др Окрашивают мукополисахариды, слизь и структуры,
богатые нуклеиновыми и другими кислотами (ядра, рибосомы);
3) нейтральные – азур-эозин (смесь основного и кислого красителей),
эозиновый кислый, метиленовый синий. Окрашивают ядра клеток
4) индифферентные – судан III, судан IV, осмиевая кислота, шарлах
красный. Окрашивают жиры и жироподобные вещества.
При проведении прижизненного анализа клеток для окрашивания препаратов используют витальные красители. К ним относятся: трипановый
синий, литиевый кармин, нейтральный красный и метиленовый синий.
Для того чтобы минимизировать негативное влияние красителя на жизнедеятельность клетки, их применяют при очень большом разведении
(1 : 200000) При окрашивании живых клеток краситель собирается в цитоплазме в виде гранул, а в поврежденных или мертвых клетках происходит
диффузное окрашивание цитоплазмы и ядра.
В ботанике часто используют такие естественные красители, как кармин и гематоксилин. Кармин – кислый краситель животного происхождения, получаемый из самок насекомого Dactilopus coccus (Coccus cacti L.)
или кошенили, культивируемого на кактусах родов Опунция и Нопалея,
произрастающих в Перу, Боливии, Чили, Мексике и на Канарских островах.
Кармин считается одним из лучших ядерных красителей.
Гематоксилин – краситель кислотно-основного характера, растительного происхождения. Он содержится в форме гликозида в соке кампешевого дерева (Haematoxylum campechianum L.) – представителя семейства
Бобовые.
Выделяют прогрессивный и регрессивный методы окрашивания. Прогрессивную окраску проводят красителями слабой концентрации, контролируя степень окрашивания под микроскопом. В случае регрессивной
окраски препарат сначала преднамеренно перекрашивают, а затем удаляют
с него избыток красителя растворителем (например, железоаммонийными
квасцами для гематоксилина или 45% уксусной кислотой для кармина).
Степень обесцвечивания объекта контролируют под микроскопом. Во многих случаях регрессивная окраска оказывается более удобной по сравнению с прогрессивной. Обесцвечивание происходит обычно медленнее
окрашивания, и под микроскопом исследователю легче определить нужную
степень окраски. Ниже приводятся рецептуры красителей, которые часто
используются в ботанических исследованиях.
28
100 мг красителя растворяют в 100 мл 3% уксусной кислоты. Раствор готов
к применению непосредственно после приготовления. Хорошо окрашивает клеточные
стенки и практически не окрашивает ядерные структуры, поэтому обычно используется в сочетании с другими красителями.
В 100 мл 45% уксусной кислоты растворяют 4 г гематоксилина и 1 г железоаммонийных квасцов. Все тщательно перемешивают и оставляют для созревания
на 7 суток в термостате при температуре 36°С. Готовый краситель хранят в холодильнике в сосуде с притертой крышкой.
В жаростойкую колбу наливают 55 мл дистиллированной воды и 45 мл ледяной
уксусной кислоты. Добавляют 2–4 г порошка кармина. Размешивают и доводят до кипения. Колбу закрывают пробкой с обратным холодильником. Смесь подогревают
на асбестовой пластинке, меняя холодную воду в холодильнике. Кипятят 30–60 мин.
Через сутки краситель фильтруют.
2 г лакмоида растворяют в 100 мл 45% уксусной кислоты и кипятят 2 ч в колбе
с обратным холодильником. Уксусной кислотой доводят объем раствора до первоначального. Раствор используют после фильтрации.
1 г орсеина растворяют в 45 мл горячей уксусной кислоты, добавляют 55 мл
дистиллированной воды. Смесь кипятят на водяной бане 3 ч, после чего остужают
и фильтруют. Раствор готов к применению непосредственно после фильтрации.
1 г гематоксилина растворяют в 10 мл 96% этилового спирта, добавляют 90 мл
дистиллированной воды. Через сутки добавляют в раствор еще 100 мл дистиллированной воды и оставляют для созревания при комнатной температуре в условиях
естественного освещения на 2 недели. Гематоксилин по Гейденгайну окрашивает
главным образом ядерные структуры. Для исследования других клеточных компонентов используют так называемую подкраску, дополнительно окрашивая цитоплазматические структуры эозином, оранжем или светлым зеленым в виде слабых (0,5 или
1%) водных или спиртовых растворов.
К 100 мл насыщенного раствора алюмоаммонийных квасцов добавляют раствор
гематоксилина в абсолютном спирте (1 г гематоксилина, растворенный в 60 мл абсолютного 100% спирта). Полученный раствор оставляют стоять на свету на 7 суток.
Затем раствор фильтруют и добавляют 25 мл глицерина и столько же метанола.
Полученную смесь оставляют стоять на свету при доступе воздуха до потемнения
раствора. Через 4–5 ч после добавления глицерина и метанола раствор фильтруют.
Краситель хранят в плотно закрытом сосуде.
Краситель получают путем смешивания двух растворов. Первый раствор: 1 г
гематоксилина растворяют в 100 мл 96% этилового спирта. Второй раствор: 4 мл
раствора полуторахлористого железа соединяют с 1 мл 25% соляной кислоты и 95 мл
дистиллированной воды (Внимание! Кислоту добавляют в воду, а не наоборот!).
Далее первый и второй растворы смешивают в одинаковой пропорции. Полученная
смесь имеет темно-фиолетовую окраску. Оба основных раствора могут храниться
Алциановый синий
Ацетогематоксилин
Ацетокармин
Ацетолакмоид
Ацетоорсеин
Гематоксилин по Гейденгайну
Гематоксилин по Делафильду
Гематоксилин Вейгерта
29
длительное время, тогда как смешанный раствор можно применять лишь несколько
дней. После окрашивания требуется промывка объекта водопроводной водой, дифференцировка 0,1% раствором солянокислого спирта с последующей тщательной
промывкой водопроводной водой.
1 г гематоксилина растворяют в 50 мл абсолютного или 96% этилового спирта.
Добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты, 50 мл глицерина, 50 мл дистиллированной воды и 1,5 г алюмокалиевых квасцов. На дне сосуда должен оставаться избыток
квасцов. Краситель созревает в течение одного месяца на свету в посуде, накрытой
марлей или тонкой тканью, до приобретения винно-красного цвета. Признаки готовности маточного раствора: появление запаха вишневой патоки и полное отсутствие
запаха уксусной кислоты. Для окраски используют маточный раствор, разбавленный
в три раза дистиллированной водой.
Реактив Шиффа (фуксин-сернистая кислота)
200 мл дистиллированной воды доводят до кипения, добавляют 1 г основного
фуксина и тщательно размешивают. Раствор охлаждают до 50°С, фильтруют и добавляют 20 мл 1N раствора НСl (82 мл НСl + 918 мл дистиллированной воды).
Охлаждают смесь до 25°С и растворяют в ней 1 г химически чистого безводного
метабисульфита натрия (Na2S2O5)
ный краситель выдерживают не менее 24 ч в сосуде с плотно притертой крышкой
в темном месте. Через сутки после приготовления, когда раствор станет бесцветным
или светло-желтым, он будет готов к применению. Краситель хранят в темноте при
температуре 0–4°С в сосуде с притертой крышкой. После окраски реактивом Шиффа
для промывки материала, как правило, используют сернистые воды, состав которых
приводится ниже.
90 мл дистиллированной воды доводят до кипения и растворяют в ней 0,5 г основного фуксина для фуксиносернистой кислоты. Остужают раствор до 50°С и добавляют 2 мл концентрированной соляной кислоты НСl. Полученный раствор остужают
до 25°С и добавляют к нему раствор безводного сернистокислого натрия (2 г Na2SO
+ 10 мл дистиллированной воды). Готовый реактив имеет бледно-желтый цвет. Кра-
ситель хранится в темноте при температуре 0–4°С в сосуде с притертой крышкой.
В 100 мл дистиллированной воды растворяют 2 г безводного сернистокислого
натрия (Na2SO3). Добавляют 2 мл концентрированной НСl. Для промывки материала
от реактива Шиффа используются только свежеприготовленные сернистые воды.
Гематоксилин по Эрлиху
1-й вариант
или бисульфита натрия (Na2HSO3). Приготовлен-
2-й вариант (по Пешкову)
Сернистые воды
3
3.3. Сроки хранения препаратов
Срок хранения и использования препаратов зависит от цели исследования и методики их приготовления. В зависимости от сроков годности
готовых препаратов их делят на временные, глицерин-желатиновые и постоянные. На временных препаратах объект обычно находится в капле
воды или водного раствора. С течением времени вода испаряется и препарат становится не пригодным для анализа. В связи с этим временные
препараты не подлежат хранению, и их анализ проводят непосредственно после приготовления. Срок хранения временного препарата можно
30