Добавил:
Richie
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Лекции / Лекция 1
.pdf
Для определения концентрации и чистоты (наличие примеси белка)
раствора ДНК применяют аппарат NanoDrop. Необходимо обязательно
провести оценку качества экстрагированной ДНК путем измерения
оптической плотности раствора ДНК в области белкового и
нуклеинового спектров поглощения. В чистых образцах ДНК
соотношение А(260)/А(280)> 1,8; где А(260) и А(280) – оптическая
плотность раствора при длине волны 260 и 280 нм. В противном случае
процедуру очистки необходимо повторять.
МИКРОПИПЕТКА ДЛЯ РАСКАПЫВАНИЯ РЕАГЕНТОВ
Методы детекции мутаций
I. Поиск неизвестных мутаций
конформационный полиморфизм одноцепочечных
фрагментов -SSCP
электрофорез в денатурирующем гралиентом геле DGGE
химическое расщепление некомлементарных сайтов-CMC
анализ гетеродуплексов -HA
прямое секвенирование -DS
II. Идентификация известных мутаций
Рестрикционный анализ, ПДРФ
Блот - гибридизация по Саузерну (1975)
Полимеразная цепная реакция -ПЦР (1985)
ПЦР-ПДРФ
Диагностика с помощью биочипов ( 2 000)
• Идентификацию генов и генных сетей частых
мультифакториальных заболеваний;
• Диагностику заболеваний по экспрессионным профилям тысяч
генов;
• Диагностику наследственной предрасположенности по
тестированию аллельных вариантов "смысловых" SNPs;
• Внедрение предиктивного генетического тестирования семей
с высоким риском частых мультифакториальных болезней;
• Создание индивидуальных, семейных и специализированных
баз ДНК-данных (генетический паспорт беременной,
спортсмена, призывника и пр.);
• Создание новых лекарств направленного действия для
индивидуальной молекулярной терапии.
ЧТО ДАДУТ МЕДИЦИНЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЕНОМА В "ПОСТГЕНОМНУЮ" ЭРУ ?
Молекулярно-генетические методы
Для получения достаточного
количества фрагментов ДНК
используется полимеразная цепная
реакция (ПЦР) - метод селективной
амплификации отдельных локусов
ДНК посредством имитации in vitro
репликации ДНК.
Для проведения ПЦР необходимо
наличия праймеров (прямых «Forward» и обратных - «Revers»),
Taq-полимеразы,
смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов
(dATP, dTTP, dGTP, dCTP),
буфер и
определяемый образец ДНК.
Метод ПЦР
Методом ПЦР можно синтезировать фрагмент ДНК in
vitro и получить его как химически чистое вещество.
Для синтеза используются короткие синтетические
отрезки ДНК, называемые праймерами (затравка для
синтеза).
С 3’-конца праймера начинается синтез фрагмента ДНК
по матричной нити, на которую он отжигается
(прилипает при комплементарном взаимодействии
между нуклеотидами праймера и матрицы).
За один цикл достройки ДНК из двух нитей ДНК
получают 4.
В следующем цикле из 4 нитей получится уже 8 и т.д.
Каждый цикл занимает несколько минут.
За 30 циклов ПЦР нужный фрагмент размножится в 1
миллиард раз, что позволяет наблюдать фрагмент
(после окраски).
Метод ПЦР
Ламинарный бокс для
приготовления смесей для ПЦР
Эппендорфы (А) и стрипы (В)
Соседние файлы в папке Лекции