Пример тестовых заданий по теме занятия:

1. Какому препарату соответствует данная структура? Дайте его русское, латинское и химическое названия.

2. Производные эргокальциферолов ……. в воде:

а) практически нерастворимы

в) мало растворимы

с) легко растворимы

3. Реактивом для обнаружения эргокальциферола служит раствор:

а) хлорид свинца

в) хлорид сурьмы

с) хлорид серебра

Литература для студента:

1. Лекционный материал

2. «Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии»: Учеб. пособие/ под ред. А.П. Арзамасцева, -М.: Медицина, 2001, с. 8-12

3. Фармацевтическая химия. В 2 ч.: 4.1. Общая фармацевтическая химия. Учеб.для вузов. /Беликов В.Г., -Пятигорск, 2003 г, с. 114

4. Анализ лекарственных смесей. Учебное пособие. А.П. Арзамасцев, В.М. Печенников, Г.М. Родионова, В.Л. Дорофеев, Э.Н. Аксенова, - Москва, 2000, с. 203-206.

5. Фармацевтическая химия: учебник / под ред. Ф24 Г.В. Раменской. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2015. – 467 с.

Научно-исследовательская работа.

Задания к практической работе.

Каждый студент проводит анализ предложенной лекарственной формы. Делает вывод о практической значимости предложенных методов анализа. Результаты анализа оформляет в дневнике и делает вывод о качестве ЛФ.

Задание № 1: Выполнить качественные реакции и количественное определение ретинола ацетата.

Retinoli acetas

Ретинола ацетат

Axerophtholum aceticum

Аксерофтола ацетат

Vitaminum A aceticum

Витамин А ацетат

Транс-9,13-диметил-7-(1,1,5-триметилциклогексен-5-ил-6)' -нонатетраен-7,9,11,13-ола-15 ацетат

С₂₂Н₃₂O₂ М. в. 328,50

Описание. Белые или бледно-желтые кристаллы со слабым запахом. Чрезвычайно неустойчивы к кислороду воздуха и свету.

Растворимость. Практически нерастворим в воде, растворим в 95% спирте, хлороформе, эфире и жирных маслах.

Подлинность. 1 мг препарата растворяют в мл хлороформа. К полученному раствору добавляют 5 мл раствора хлорида сурьмы; развивается синее окрашивание.

Температура плавления 53-57°. При определении температуры плав­ления предварительной сушки и измельчения препарата не проводят.

Поглощающие примеси. Измеряют оптическую плотность раствора препарата, приготовленного для количественного определения, при дли­нах волн 300 нм, 311,5 нм, 326 нм, 337 нм и 360 нм. Отношения значения оптической плотности при 300 нм, 311,5 нм, 337 нм и 360 нм к оптической плотности при 326 нм не должны отличаться от представленных ниже более чем на ±0,03.

Длина волн в нм	D /D326
300	0,573
311,5	0,857
326	1,000
337	0,857
360	0,292

Количественное определение. Около 0,03 г препарата (точная навеска) растворяют в абсолютном спирте в мерной колбе емкостью 100 мл, доводят объем раствора таким же спиртом до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора переносят в другую мерную колбу емкостью 100 мл и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 326 нм.

Содержание ретинола ацетата в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = (D*100*100)/a*1550

где D-оптическая плотность раствора препарата при 326 нм;

100, 100-разведения в миллилитрах;

а- навеска препарата в граммах;

1550- удельный показатель поглощения Е^%_см при длине волны 326 нм для 100% ретинола ацетата в абсолютном спирте.

Содержание С₂₂Н₃₂O₂ в препарате должно быть не менее 97,0%, 1 г 100% ретинола ацетата соответствует 2 907 000 ME витамина А.

Хранение. В запаянных в токе азота ампулах, предохраняющих от действия света, при температуре не выше +5°.

Задание № 2: Выполнить качественные реакции и количественное определение ретинола ацетата.

Solutio Retinoli acetatis oleosa 3,44%, 6,88% aut 8,60%

Раствор ретинола ацетата в масле 3,44%, 6,88% или 8,60%

Solutio Axerophtholi acetici oleosa

Раствор аксерофтола ацетата в масле

Solutio Vitarnini A acetici oleosa

Раствор витамина А ацетата в масле

Состав. Ретинола ацетата .... 34,4 г, или 68,6 г, или 86,0 г

Масла соевого рафинирован­ного, полученного путем прес­сования, или гидратированного, первого сорта (ГОСТ 7825-55) до 1 л

Примечание. Допускается стабилизация бутилоксианизолом или бутилокситолуолом или смесью того и другого (1:1) в количестве 0,015% от веса масла.

Описание. Прозрачная маслянистая жидкость от светло-желтого до темно-желтого цвета, без прогорклого запаха и вкуса.

Подлинность. 1 каплю препарата растворяют в 1 мл хлороформа. К полученному раствору прибавляют 5 мл раствора хлорида сурьмы; появляется нестойкое синее окрашивание.

Приготовленный для количественного определения раствор препарата в абсолютном спирте для спектрофотометрии имеет максимум поглоще­ния при 326±1 нм, а раствор в циклогексане - при 327,5±1 нм.

Кислотное число не более 1,0.

Поглощающие примеси. Измеряют оптическую плотность раствора препарата в абсолютном спирте, приготовленного для количественного определения, при длинах волн 311,5 нм, 326 нм и 337 нм.

Отношения значений оптической плотности при 311,5 нм и 337 нм к оптической плотности при 326 нм должны быть равны 0,857±0,03.

Количественное определение. Около 0,1 г препарата (точная навеска) растворяют в абсолютном спирте для спектрофотометрии в мерной кол­бе емкостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Отбирают точное количество полученного раствора и разводят тем же спиртом до получения концентрации ретинола ацетата около 3 мкг (8-10 ME) в 1 мл. Измеряют оптическую плотность полу­ченного раствора на спектрофотометре при длине волны 326 нм в кю­вете с толщиной слоя 1 см. В качестве контрольного раствора приме­няют абсолютный спирт для спектрофотометрии.

Содержание ретинола ацетата в 1 мл препарата в граммах  (X)  вы­числяют по формуле:

где    d- оптическая плотность испытуемого раствора;

V- объем раствора первого разведения, взятого для приготовле­ния раствора второго разведения, в миллилитрах;

V1-объем раствора второго разведения в миллилитрах;

d- плотность препарата; а- навеска препарата в граммах;

1550-удельный показатель    поглощения Е^%_см    при    длине   волны 326 нм для раствора 100%  ретинола ацетата в абсолютном спирте.

Содержание С₂₂Н₃₂O₂ в 1 мл препарата соответственно должно быть 0,0310-0,0378   г    (90 000-110 000   ME),    0,0619-0,0757  г    (180 000- 220 000 ME), 0,0774-0,0946 г (225 000-275 000 ME).

Примечание. Определение может быть проведено с использо­ванием циклогексана вместо абсолютного спирта; в этом случае го­товят раствор препарата в циклогексане для спектрофотометрии с содержанием в 1 мл около 3 мкг ретинола ацетата и измеряют опти­ческую плотность этого раствора при длине волны 327,5 нм. В рас* четную формулу вместо 1550 подставляют 1515 (Е^%_см при длине волны 327,5 нм для раствора 100% ретинола ацетата в цикло­гексане) .

Хранение. Список Б. В доверху заполненных, хорошо укупоренных склянках оранжевого стекла, в защищенном от света месте, при темпе­ратуре не выше +10°.

Задание № 3: Выполнить качественные реакции и количественное определение ретинола пальмитата.

Ретинола пальмитат ФС

Витамин А

Retinoli palmitas Взамен ФС 42-2229-94

[(2E,4E,6E,8E)-3,7-Диметил-9-(2,6,6-триметилциклогекс-1-ен-1-ил)нона-2,4,6,8-тетраен-1-ил]гексадеканоат

C36H60O2

М.м. 524,9

Cодержит не менее 95,0 % и не более 110,0 % ретинола пальмитата от заявленного количества.

Для выражения активности витамина А используют Международные Единицы (МЕ). 1 МЕ ретинола пальмитата соответствует активности 0,3 мкг неэтерифицированного ретинола. 1 МЕ ретинола соответствует активности 0,550 мкг ретинола пальмитата.

Описание. Жироподобное светло-жёлтое твёрдое вещество или жёлтая масляная жидкость в расплавленном состоянии.

Растворимость. Легко растворим в 2-пропаноле, мало растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

Подлинность. 1. УФ-спектр. Ультрафиолетовый спектр 0,0004 % раствора субстанции в 2-пропаноле в области длин волн от 280 до 350 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 326 ± 1 нм.

2. Тонкослойная хроматография.

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Эфир – циклогексан 20:80.

Растворитель. 0,1 г бутилгидрокситолуола растворяют в циклогексане и доводят объём циклогексаном до 100,0 мл.

Испытуемый раствор. 3300 МЕ субстанции в 1,0 мл растворителя.

Раствор сравнения. Раствор стандартного образца, содержащий по 3300 МЕ ретинола пальмитата и ретинола ацетата в 1,0 мл растворителя.

На линию старта пластинки наносят по 3 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и опрыскивают 4% раствором фосфорномолибденовой кислоты.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения должны наблюдаться две чётко разделённые зоны адсорбции сине-зелёного цвета. Порядок расположения снизу вверх: ретинола ацетат, ретинола пальмитат.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности поглощения должна соответствовать зоне адсорбции ретинола пальмитата на хроматограмме раствора сравнения.

Родственные примеси. Определение проводят спектрофотометрически.

Около 100 мг (точная навеска) субстанции растворяют в 5,0 мл пентана и разбавляют 2-пропанолом так, чтобы получить концентрацию от 10 до 15 МЕ/мл. Измеряют оптические плотности полученного раствора при 300 нм, 326 нм, 350 нм и 370 нм.

Рассчитывают отношения А₃₀₀/А₃₂₆, А₃₅₀/А₃₂₆, А₃₇₀/А₃₂₆.

Допустимые пределы:

- А₃₀₀/А₃₂₆ не более 0,60;

- А₃₅₀/А₃₂₆ не более 0,54;

- А₃₇₀/А₃₂₆ не более 0,14.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Активность. Определение проводят спектрофотометрически.

Готовят раствор, как описано в «Родственные примеси». Измеряют оптическую плотность при 326 нм.

Активность ретинола пальмитата C₃₆H₆₀O₂ в МЕ/г вычисляют по формуле:

где – оптическая плотность при 326 нм;

– навеска субстанции, г;

– объём раствора, мл.

Хранение. В плотно закрытой упаковке, заполненной инертным газом, в защищённом от света месте при температуре не выше 15 ^оС.

Задание № 4: Выполнить качественные реакции и количественное определение эргокальциферола.

Solutio Ergocalciferoli oleosa 0,125%

Раствор эргокальциферола в масле 0,125%

Solutio Vitamini D₂ oleosa

Раствор витамина D₂ в масле

Состав. Эргокальциферола кристаллического ....    1,25 г Масла рафинированного, полученного путем прессования, соевого (ГОСТ 7825-55) или подсолнечного (ГОСТ 1129-55) до 1 л

Описание. Прозрачная маслянистая жидкость от светло-желтого до темно-желтого цвета, без прогорклого запаха.

Подлинность. 0,1 мл препарата растворяют в 1 мл хлороформа, при­бавляют 6 мл раствора хлорида сурьмы, содержащего 2% ацетил хло­рида, появляется оранжево-розовое окрашивание.

На стартовую линию пластинки с закрепленным слоем окиси алюми­ния наносят 0,02 мл раствора стандартного образца эргокальциферола в хлороформе для наркоза, содержащего в 1 мл 1,25 мг (50 000 ME) эр­гокальциферола и 0,04 мл раствора препарата в хлороформе для нарко­за (1 : 1, по объему). Пластинку немедленно помещают в хроматографическую камеру с хлороформом для наркоза, к которому добавлено не­сколько капель диметилформамида (4-5 капель на 100 мл). Когда фронт растворителя пройдет на 10-12 см, пластинку вынимают И опрыс­кивают раствором хлорида сурьмы в хлороформе, содержащим 2% аце­тил хлорида. На хроматограмме проявляется основное пятно эргокаль­циферола, окрашенное в оранжевый цвет. Между этим пятном и стар­товой линией допускается появление только одного дополнительного пятна.

Количественное определение. К точной навеске препарата (около 1 г) добавляют 0,1 г гидрохинона, 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора ед­кого кали и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 минут. Содержимое колбы охлаждают, затем добавляют 50 мл воды и извлекают неомыляемую фракцию (эргокальциферол) в делительной воронке эфиром для наркоза при осторожном перемешива­нии, используя 1 раз 50 мл и 2 раза по 30 мл эфира. Соединенные эфир­ные извлечения промывают водой по 30 мл до отрицательной реакции по фенолфталеину. К промытому эфирному извлечению добавляют около 8 г безводного сульфата натрия и оставляют на 30 минут в темном месте, периодически встряхивая. Затем фильтруют через бумажный фильтр в колбу для перегонки. Сульфат натрия и фильтр промывают несколько раз эфиром по 10 мл, собирая эфир в ту же колбу. Эфир от­гоняют в токе инертного газа. Остаток растворяют в хлороформе, коли­чественно переносят в мерную колбу емкостью 25 мл, доводят объем раствора хлороформом до метки и перемешивают. К 1 мл этого раствора в пробирке с притертой пробкой прибавляют 6 мл раствора хлорида сурьмы, содержащего 2% ацетил хлорида. По истечении 2 минут рас­твор переносят в кювету фотоэлектроколориметра с толщиной слоя 1 см и точно через 3 минуты с момента добавления раствора хлорида сурьмы измеряют оптическую плотность раствора, используя светофильтр с мак­симумом пропускания 500 нм. Установку прибора на нуль производят по хлороформу.

Параллельно проводят реакцию с хлороформным раствором стандарт­ного образца, содержащим в 1 мл 0,05 мг (2000 ME) эргокальциферола.

Содержание эргокальциферола в 1 мл препарата в миллиграммах (X) вычисляют по формуле:

X = (D₁*0,05*25*d)/(D₀*a)

где  D₁ - оптическая плотность хлороформного раствора  неомыляемой фракции препарата;

D₀ - оптическая  плотность раствора    стандартного образца эрго­кальциферола;

0,05 - содержание эргокальциферола в 1 мл раствора стандартного образца в миллиграммах;

а - навеска препарата в граммах;

d - плотность препарата. 1 г эргокальциферола соответствует 40 000 000 ME витамина D₂.

Содержание С₂₈Н₄₄О в 1 мл препарата должно быть 1,1-1,5 мг (44 000-60000 ME).

Хранение. В доверху заполненных, хорошо укупоренных склянках оранжевого стекла, в защищенном от света месте при температуре не выше 10°.

16