2 курс / Нормальная физиология / Ликвор_как_гуморальная_среда_организма_Пикалюк_В_С_,_Бессалова_Е

«стержень», основа существования организма, его адаптационных возможностей.

Большой интерес представляет функциональная асимметрия нейроиммуноэндокринной системы, которая, в свою очередь,

обусловливает структурную и функциональную асимметрию ликворной системы. Вопросы симметрии и асимметрии в науке анализируются часто. Общеизвестно, что асимметрия головного мозга проявляется в том, что полушария играют разную роль в модулировании эмоционального поведения, формировании памяти, при адаптации; левое полушарие ответственно за аналитическое решение задачКаф, правое – за образноеедр. Нобелевскийалауреат Л. Сперри доказал, что «К ждое полушарие обладает собственными памятью и опытом познания, которые недоступны для воспроизведения другим полушари м». В контр латеральных

участках ЦНС установлено неодинаковое содержание медиаторов, нейрогормонормальнойв, ней опептидов, также рецепторов к ним [188]. Описана роль наследственных, внутренних (половые г рмоны) и

внешних (пог дных, гео агнитных, гравитацио ых) факторов, а также цветовых гамм, латерализованных зрительных раздражителейанатв воз икновенииофункциональноймииасимметрии головного мозга. Половой диморфизм межполушарной асимметрии связан с пре- и пост атальным влиянием половых гормонов [241]. Таким образом, факторы функци нальной ас мметрии мозга можно подразделить на нейрофизиологические, генетические, возрастные (онтогенетическиеКГМУ), гормональные, средовые, эволюционные, социальные. При этом воздействие и взаимодействие их очень сложно, в связи с чем, неверно говорить о примате влияния одних факторов над другими [69]. Проблема функциональной асимметрии является комплексным объектом для исследования ряда нейронаук – нейроанатомии, физиологии, психологии, лингвистики [1, 244]. Создание теории стало возможным лишь при междисциплинарном подходе. Анатомия и гистология изучают морфологическую основу асимметрии, являющуюся структурным базисом функциональных отличий, на изучении которых сконцентрированы другие науки. Было сформулировано определение индивидуального профиля функциональной асимметрии, под которым понимается присущее каждому конкретному субъекту определенное сочетание

функциональных асимметрий тех или иных структур регуляторной системы и органов-мишеней. Электрофизиологическую и нейрохимическую асимметрию мозга поддерживает афферентная информация от периферических органов, например воздействия со стороны иммунной системы, локализация плаценты с правой или левой стороны способны изменить параметры функционирования асимметрии головного мозга.

Поскольку нервная, иммунная и эндокринная системы функционируют в виде единого блока, было высказано и доказано предположение об асимметрии иммунной и эндокринной систем. Так, клеткиКафедкрасного костного мозга из рлевойабедренной кости и клетки левой доли тимуса пролиферативно более активны, чем аналогичные элементы противоположной стороны. При введении клеток разных долей тимуса, обладающих азличной активностью

в регуляции гуморального иммунного ответа, эта активность зависитнормальнойот д минантности полушария голов ого м зга доноров, от которых были получены клетки, а также от того, в рганизм каких

реципие т в ни попали – левоибо правополушарных [244]. Получены данные также о функциональной асимметрии всех

звеньев эндокрианаой системыт:омиине только правые левые парные эндокринные железы симметричны, но оппозитные доли непарных желез внутренней секреции обладают различной функциональной активнос ью [244]. Так, масса левых надпочечников у крыс несколько больше массы правых, однако, правые надпочечникиКГМУболее активно секретируют кортикостерон.

Известно множество данных, свидетельствующих не только о временной, но и о пространственной согласованности предгестационных и гестационных процессов, каждый из которых детерминирован генетически и может быть реализован только в континууме индивидуального латерального фенотипа [28, 34, 130, 138, 206, 243]. Координатором этих процессов становится нервная система, важнейшим принципом текущей функциональной организации которой является доминанта. Принцип доминанты и смены функциональных систем отчетливо проявляется, например, в периодичности рефлекторных нейрогуморальных процессов в репродуктивной системе самок млекопитающих. Морфологическая основа сложной рефлекторной дуги постоянна: на периферии – яичники и матка, в центре – структуры лимбической системы,

гипоталамус, гипофиз. На всех уровнях у млекопитающих они продублированы и функционально полярны (2 яичника, 2 функционально неоднородные половины матки, 2 полушария мозга). Гестационная доминанта человека является однополушарной, однако у многоплодных животных асимметрия выявляется при существенном градиенте числа лево-и праволокализованных плодов, что является эволюционным предвестником односторонней доминанты человека.

Нейроанатомические и нейрофизиологические особенности асимметрии полушарий головного мозга имеют большое значение и в условияхКафпатологии, чтоеопредраеляет полиморфизм и гетерогенность синдромов при лат рализованном церебральном поражении, а также обуславлива т появление в СМЖ фактора позиционной асимметрии. При вв дении СМЖ больного с

двигательными нарушениями у здорового реципиента возникают нарушенормальнойия аналогичные таковым у живот ого донора с совпаде ием ст р ны асстройств. [173, 49]. С то ким химическим

составом СМЖ связан также феномен «спиналь ой памяти» – это

перенос обученного состояния доноров необученным реципиентам

СМЖ, где действующиманатомииначал м оказывал сь регуляторные пептиды, с их помощью м жно перенести локальные

функциональные перестройки, состоян е аналгезии, импритинговое обуче ие, условные пищевые рефлексы [45-48, 208]. В этих работах за основу функциональной асимметрии принята химическая КГМУасимметрия мозга. При одностороннем инсульте в области коры мозга в С Ж содержится информация о месте поражения и если от такого животного перелить ликвор здоровой особи, у последней на той же стороне разовьется инсульт. Нейропептиды – носители этой информации обладают высокой специфичностью: одни сообщают о поражении правой стороны, другие – левой. Большинство авторов согласны с физической теорией индуцирования асимметрии организмов всех уровней развития, объясняя аппадато ческое и филогенетическое развитие асимметрии взаимодействием биологических объектов с электромагнитным излучением, первоосновой в данном случае является поляризация молекул воды, формирование третичной структуры регуляторных белков в составе жидких сред организма, в частности ликвора. При повышении уровня организации живых

54 ЛИКВОР КАК ГУМОРАЛЬНАЯ СРЕДА ОРГАНИЗМА

организмов все большее значение в формировании асимметрии принадлежит внутренним факторам, но во взаимодействии с факторами окружающей среды. У взрослых млекопитающих и человека функциональная асимметрия приобретает относительно стабильный характер.

В опытах при хроническом раздражении седалищного нерва кроликов наблюдали асимметричные изменения веса парных эндокринных желез. По мнению авторов, механизм возникновения этой асимметрии состоит в неравномерном прямом нейрогенном влиянии на структуру органов или их частей, приводящим к

неодинаковойКафих чувствительностиедк гормонамраи медиаторам и к

неодинаковой утилизации ими питательных веществ, а также к

асимметричным изменениям сосу истого тонуса желез и их

кровоснабжения [236]. Введение СМЖ п актически не оказывало

влияния на возникающую после перерезки нерва асимметрию показателей веса па ных эндокринных орга ов и не препятствовало

отдельностиан», так аи тв сомииставе единого блока. Явление функцион льной асимметрии выявлено в норме, патологии и при эксперимент ль ых воздейс виях. Учет морфо-функциональной асимметрии – классический подход к изучению регуляторных систем, получившийКГМУмощное развитие в настоящее время. Впервые асимметричные эффекты СМЖ припаренетральном ее введении, на органы нейроэндокринной системы описал в своих работах В.Г. Топало., ученик профессора Ткача В.В [236]. Данное направление весьма перспективно.

1.4.Технология получения и обработки ликвора как исходного сырья для произвоства биогенных препаратов

По данным литературы нам известны два способа получения препарата путем обработки прижизненно полученной ксеногенной спинномозговой жидкости крупного рогатого скота. Первый способ

заключался в стерилизации ликвора путем проведения через бактерицидные фильтры Шамберлана, а полученный фильтрат запаивался в стеклянные ампулы и хранился в холодильнике при t +2ºC; +4ºC. Такой способ обработки позволил сохранять биопрепарат из ликвора от одной недели до шести месяцев и более

(1-1,5 года) [242].

Другой способ получения препарата состоял в том, что прижизненно полученная ксеногенная спинномозговая жидкость от стельных и нестельных коров-доноров подвергалась термической обработке путем автоклавирования или кипячения в течение 1520 минут. ГодностьКафедрапрепарата, расфасованного в стеклянные ампулы, сохранялась около двух л т [10]. Описанные препараты не нашли широкого применения в связи с тем, что технология их

приготовления была несовершенной, так как, проведение через фильтрынормальнойне обеспечивало надежной стерильности, а автоклавирование и кипячении приводило к потере лечебных

свойств ликв ра; с оки хранения по ученных препаратов были ограничены.

Предложеннанатя ами техноломгия получения биологического препарата предусматрив ет многоступенчатый процесс обработки ликвора, который включ ет в себя: эколог ческую экспертизу сырья, криоконсервацию с неодн кратным замораж ванием и размораживанием ликвора, γ-стерилизацию и проведение препарата через бактериальные КГМУфильтры « илипор», центрифугирование. Данные методы обработки ксеногенной спинномозговой жидкости, с нашей точки зрения, являются наиболее обоснованными, так как предусматривают надежный контроль поступающего исходного сырья, обеспечивают снижение антигенности и удаление балластных белков ликвора, полную стерильность и сохранение биологических свойств препарата.

В качестве исходного сырья в своих исследованиях для получения препарата мы использовали ликвор коров, что связано с определенными анатомическими особенностями животных, относительно несложной методикой забора жидкости, возможностью получать ликвор в практически неограниченном количестве, а также значительным сходством состава ликвора коров с цереброспинальной жидкостью человека [242].

Очень важным является то, что мы использовали для производства биопрепарата только прижизненно полученную ксеногенную спинномозговую жидкость. Для лечения больных ранее получали спинномозговую жидкость от крупного рогатого скота после оглушения животного электрическим током или молотом [181]. При оглушении животных доноров электрическим током она приобретает свойства антигенности и анафилактогенности. Непригодность постмортального ликвора для ликворотрансфузий объясняется значительными сдвигами в его

составе, когда многие БАВ вследствие процессов нейтрализации и распада либоКафедра– н ходятся в н м в незких концентрациях, либо не определяются вообще, а наруш ния целостности ГЭБ приводит к

появлению в нем большого колич ства веществ белковой природы

состоя ии и ликвор человека пос е смерти, было установлено, что чем дольше п одолжается гония, тем больше увеличивается

и форменных элементов крови [87]. нормальнойИсследуя спинно озговую жидкость животных в агональном

содержание в спинномозговой жидкости сахара и молочной

кислоты. анатомииВ к чественно ином с стоянии наход тся ликвор уже через несколько минут после смерти. Вследств е ослабления и

разрушения гематоэнцефалическ го барьера в спинномозговой жидкости происходит сдвиг ионного состава, в ней начинают появляться поступающие из крови и тканей белки, повышается общее количество белкаКГ, меняетсяМсоставУбелковых фракций, резко увеличивается количество клеток, меняется их состав.

Такой способ получения С Ж рекомендован быть не может ввиду того, что постмортально, в агональном или шоковом состоянии животного-донора состав и свойства спинномозговой жидкости резко меняются, приобретая токсические и аллергизирующие свойства. Все это делает спинномозговую жидкость непригодной для дальнейших исследований [242]. Несомненный интерес представляет то, что прижизненно взятая спинномозговая жидкость крупного рогатого скота не обладает групповыми и видовыми особенностями, что дает возможность проводить ликворотрансфузии от одного вида к другому [172].

Способ консервирования прижизненно полученной ксеногенной спинномозговой жидкости крупного рогатого скота при различных режимах низких температур впервые был разработан в Крымском государственном медицинском университете имени С.И. Георгиевского и использован при выполнении научных работ и кандидатскихдиссертаций[39, 207, 234].

Прижизненное взятие исходного лекарственного сырья производили на донорских госплемхоза «Широкое» Симферопольского района и в научно-производственном объединении «Элита» Красногвардейского района АР Крым, где ветеринарно-санитарный надзор и зоотехническиеКафедраусловия соде жания животных

нахо ились на должном уровне. Спинно-моговую

жидкость получали от нормальнойактирующих к ров крас-

ной молоч ой п р ды. Был ск нструирован

специальнй станок для

анатомиприжизненногоиполучения ликвора коров индивидуальной ф ксации животного в положен , удобном

для него и безопасном для КГМУоператора.

Рисунок 1.4.1

Станок для прижизненного получения спинномозговой жидкости

Станок предназначался для индивидуальной фиксации крупного рогатого скота старше 13-месячного возраста и взрослых коров с

массой тела от 350 до 800 кг с целью прижизненного получения СМЖ, которая использовалась для дальнейших

ксеноликворологических исследований. Основу станка составляет рама, представляющая собой сварную конструкцию из стального уголка и вертикальных стоек, служащих для крепления механических деталей и узлов, обеспечивающих усиление прочности станка. В исходном положении фиксационный станок представляет собой коридор, открытый с торцов, что дает возможность животному-донору свободно входить в него.

Станок оснащен подвижным сиденьем для оператора, производящего пункцию и столиком для размещения инструментов и материалов, необходимых для прижизненного забора ксеногеннойКафедраспинномозговой жидкости к упного рогатого скота (коров); станок осн щен приспособлением для смыва испражнений в канализационный сток пом щ ния. В комплект станка входит

прибор «электропастух» для подгона животных. нормальнойСтан к устанавливается ст ционарно в закрытых помещениях

(фермах, жив тноводческих хозяйствах, бой ях, мяс комбинатах, а также в лабо аториях-вив риях, науч о-исследовательских институтах), где параметры соответствуют нормам технологическогоанатомиипр ектирования ветеринарносельскохозяйстве ых предприятий. Станок предназначен для круглогодичного использования во всех кл мат ческих зонах Украины.

Из существующих способов получения ликвора (люмбального, цистернальногоКГМУи вентрикулярного) мы остановили свой выбор на цистернальном (субокципитальном). Предпочтительно производить забор ликвора путем субокципитальной пункции, так как наиболее высокая концентрация веществ, обладающихфизиологической активностью, определяется в цистернальном ликворе, по сравнению с люмбальным, где происходит снижение их содержания и наблюдается обменная инактивация определенного количества ценных, в терапевтическом отношении, веществ [242].

Между продолговатым мозгом и мозжечком образуется обширное подпаутинное пространство или, так называемая, большая цистерна мозга, наполненная ликвором. Длина, глубина и емкость цистерны у различных животных отличаются.

В зависимости от возраста и массы тела животного расстояние от кожи до большой цистерны мозга (а следовательно, и глубина вкола иглы)будет различным. У крупного рогатого скота это расстояние колеблется в пределах 7-12 см. Во избежание повреждений продолговатого и спинного мозга при пункции мы пользовались таблицей 1.4.1, по которой учитывалась глубина введения иглы в зависимости от окружности шеи животного [240].

Таблица 1.4.1

специально, обученнымКГМУэтой технике и 2-3 помощьниками. Коровудонора ставили в станок и фиксировали.

Шерсть на затылочной области в верхней части шеи коровы выбривали, кожу обрабатывали спиртом и 10% раствором йода, после чего иглу вводили по средней линии строго перпендикулярно поверхности кожи. При большом сопротивлении игла проходила последовательно кожу, подкожную клетчатку, мощный слой мышц, выйную связку, атланто-затылочную мембрану и проникала в большую (заднюю) цистерну мозга, что ощущалось как «провал» в свободную полость. Из иглы извлекался мандрен и при появлении СМЖ к канюле иглы подключали систему для прижизненного извлечения ликвора у млекопитающих животных.

Кафедра

Рисунорок 1.4.2 Полузакрытаямальнсистема для прижиз оенн гойизвлечения ликвора крупного рогатого скота.

Предложенная систе а отличается простот й устройства, надежностью в работе, удобностью и позволяет производить массовыйанатомииз бор спинномозгов й жидкости в достаточно больших количеств х от од ого и того же д нора в течен е нескольких лет без вредных последствий для жив тного. Перед забором ликвора проводили визуальный осмотр всей системы: проверяли герметичность вакуумногоКГМУрезервуара (2) и вакуумного шланга (4), а также стеклянного флакона (7). Открытую часть резиновой пробки флакона обрабатывали 10% раствором йода. Резиновую пробку флакона прокалывали иглами Дюфо (6, 9). Флакон – приемник СМЖ, с введенными в него иглами Дюфо, фиксировался на стойке вверх горловиной. Медицинские зажимы накладывали на шланги (5, 8). Вакуумным насосом (3), легко и очень медленно создавали отрицательное давление (0,1-0,2 атм.) (1), после чего снимали зажим с вакуумного шланга (5). Иглой Бира (10) производили субокципиталную пункцию, мандрен извлекали и при появлении СМЖ к канюле иглы присоединяли вакуумный шланг

(8) системы и снимали зажим. За поступлением и количеством ликвора наблюдали через стеклянное окно (11) и по градуировке флакона. Ксеногенная спинномозговая жидкость поступала в стерильные стеклянные флаконы емкостью 250 мл. ликвор