Задание 14. Колориметрическое определение витамина в2.
Витамин В2 (рибофлавин) широко распространен в природе, содержится в значительных количествах в дрожжах, пшенице, картофеле и других растительных продуктах. При недостатке этого витамина в пище возникают серьезные физиологические нарушения: падение веса, нарушение аппетита, резь в глазах, воспаление слизистых оболочек и т.д. Рибофлавин представляет собой метиллированный изоаллоксазин, соединенный с пятичленным спиртом рибитолом
Рибофлавин – кристаллическое вещество желтого цвета, горького вкуса. В витаминизированных пищевых продуктах (в драже) с высоким содержанием витамина В2 определение его производят колориметрическим методом. В основу метода положено изменение интенсивности окраски р-ра рибофлавина в зависимости от его концентрации.
Оборудование и реактивы: стандартный р-р рибофлавина. В мерную колбу емкостью 250 мл вносят 10 мг чистого кристаллического рибофлавина, растворяют в 0,01 н соляной кислоты и доводят до метки этим же р-ром кислоты. В 1 мл такого р-ра содержится 40 мкг витамина В2. Р-р сохраняют в темноте и на холоде до месяца. Перед анализом 1 мл исходного раствора, содержащего 40 мкг рибофлавина, разводят водой до 10 мл. Мерные колбы на 100 мл, конические колбы, фильтры.
Ход работы. Навеску 1-2 г тонко измельченной средней пробы концентрата (30-50 шт. драже) переносят в мерную колбу емкостью 100 мл с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось 4-8 мкг рибофлавина. Навеску растворяют в воде и доводят р-р водой до метки. Смесь фильтруют и прозрачный фильтрат колориметрируют на ФЭКе. Содержание рибофлавина вычисляют по формуле
Х=
Где Х – содержание рибофлавина в 1 г исследуемого концентрата, мг;
С – концентрация стандартного р-ра, мкг/мл;
ОД1 – оптическая плотность контрольного образца;
ОД2 - оптическая плотность опытного образца;
V – объем раствора, мл;
а – навеска концентрата;
1000 – коэффициент пересчета в миллиграммы.
Нуклеиновые кислоты Задание 15. Получение нуклеопротеидов
Молекулярная масса нуклеопротеидов достигает 10000000. Небелковый компонент нуклеопротеидов – нуклеиновые кислоты – высокомолекулярные соединения с молекулярной массой до нескольких миллионов. Нуклеиновые кислоты – полинуклеотиды, полимеры, состоящие из большого количества мононуклеотидов. В состав мононуклеотидов входят пуриновые и пиримидиновые основания, рибоза, дезоксирибоза и связанная с ними фосфорная кислота.
Нуклеопротеидами богаты дрожжи, бактериальные клетки, клетки растений и животных, ткани, находящиеся в состоянии роста.
Оборудование и реактивы: серный эфир, 0,4 % р-р NaОН, 5 % р-р уксусной кислоты, промытый и прокаленный песок, 5 % р-р Н2SО4, прессованные дрожжи.
Ход работы. 10 г дрожжей помещают в небольшую фарфоровую ступку, добавляют 15 капель эфира (чтобы убить дрожжевые клетки). К дрожжам добавляют 10 мл воды и щепотку песка, тщательно растирают. К растертой массе приливают 50 мл 0,4 % NaОН и снова растирают в течение 15 мин. Затем содержимое ступки переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют (или фильтруют). Центрифугат (фильтрат) переносят в стаканчик, куда добавляют 5 % р-р уксусной кислоты до полного осаждения нуклеопротеида. Обычно для осаждения идет 15 мл уксуснойкислоты. Осадок собирают при помощи центрифугирования. Полученный осадок нуклеопротеидов подвергают гидролизу.
Частичный гидролиз проводят путем кипячения препарата с 5 % Н2SО4 в течение 1 ч. В начале гидролиза отщепляется белок от небелкового компонента (нуклеиновой кислоты). Затем белок подвергают частичному расщеплению, нуклеиновая кислота далее распадается на мононуклеотиды, а от них отщепляются пуриновые основания (аденин и гуанин), фосфорная кислота и частично пентоза.
Продукты гидролиза обнаруживают при помощи специальных реакций.