merged(1)

6

-контроле над обеззараживанием сточных вод;

-обнаружении санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов по эпидемическим показаниям для выявления возможного пути передачи инфекционных заболеваний.

Отбор проб. Для отбора проб питьевой воды используют стерильные флаконы ёмкостью 500 мл. Предварительно проводят обжигание водопроводных кранов пламенем и пропускают воду в течение 10-15 минут при полностью открытом кране.

Пробы воды из бассейнов в ходе их эксплуатации отбирают не менее чем в двух точках с 25-30 см от поверхности в количестве одного литра.

Показатели бактериального загрязнения питьевой воды

Показатели загрязнения:

-E. coli – свежее фекальное загрязнение;

-Citrobacter, Enterobacter – давнее фекальное загрязнение;

-Cl. perfringens (sporogenes) – как свежее, так и давнее фекальное загрязнение;

-термофильные бактерии – загрязнение разлагающимися отбросами;

-протей – гнилостный распад.

Микрофлора воздуха

Воздух – неблагоприятная среда для размножения микроорганизмов (отсутствие питательных веществ, солнечные лучи, высушивание). Состав микрофлоры воздуха – это пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), актиномицеты, плесневые, дрожжевые грибы и др.

Наибольшее количество микроорганизмов содержит воздух крупных промышленных городов. Воздух же полей, лесов, лугов, а также над водными пространствами, в удалении от населенных пунктов отличается сравнительной чистотой. Значительные изменения претерпевает микрофлора воздуха в

7

зависимости от времени года. Максимальное количество микробов обнаруживают в летнее время, а минимальное – в зимнее время.

Микрофлора воздуха закрытых помещений более разнообразна и относительна стабильна. Среди микроорганизмов доминируют обитатели носоглотки человека, в том числе и патогенные виды. Основной источник загрязнения воздуха патогенными видами – бактерионосители.

Микроорганизмы в воздухе находятся в состоянии аэрозоля. Аэрозоль – коллоидная система, состоящая из воздуха, капелек жидкости или твердых частиц, и включающая различные микроорганизмы. Размер аэрозольных частиц варьируется от 10 до 2000 нм. При чихании может образовываться до 40000 капель.

Выделяют три основные фазы бактериального аэрозоля:

1.Капельная фаза состоит из бактериальных клеток, окруженных водносолевой оболочкой. Диаметр частиц около 0,1 мм. Длительность пребывания в воздухе составляет несколько секунд.

2.Мелкоядерная фаза образуется при высыхании частиц первой фазы. В этой фазе частицы имеют наименьшие размеры, легко перемещаются потоками воздуха, длительно находятся во взвешенном состоянии. Именно так распространяются большинство возбудителей воздушно-капельных инфекций.

3.Фаза “бактериальной пыли” состоит из крупных, быстро оседающих частиц, образующие пыль, способную подниматься в воздух.

Патогенные и условно-патогенные микроорганизмы в воздух попадают с каплями слюны человека при разговоре, кашле, при слущивании клеток эпителия кожи. Через воздух передаются:

- бактерии – возбудители туберкулеза, дифтерии, коклюша, споровые формы бактерий и др.;

- вирусы – возбудители острых респираторных инфекций (ветряной оспы, гриппа, парагриппа и др.);

- грибы из рода Aspergillus, Mucor, Penicillium и др.

Микробиологическое исследование воздуха проводится с помощью седиментационного или фильтрационного методов.

Седиментационный метод Коха - спонтанное оседание бактериальных частиц и капель под действием силы тяжести на поверхность питательной среды открытой чашки Петри. При этом читается, что в соответствии с формулой В.Л.

Омелянского на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри площадью 100 см2 за 5 минут оседает такое количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха.

Для определения чистоты воздуха при седиментационном методе чашки выдерживают открытыми в течение 60 минут, а затем инкубируют при 37ОС. Результаты оценивают следующим образом:

- менее 250 колоний – чистый воздух; - 250-500 колоний – средняя степень загрязненности;

- более 500 колоний – загрязненный воздух.

При фильтрационных методах отбор проб воздуха осуществляется с помощью различных приборов и аппаратов. В частности при использовании

аппарата Кротова отбор проб воздуха (по 100 л ) производится над двумя чашками Петри с мясо-пептонным агаром. Посевы культивируют 48 часов при 37оС. После

8

инкубирования подсчитывают число колоний на питательной среде и вычисляют количество бактерий в исследуемом воздухе.

Подсчет микробного числа для определения чистоты воздуха при использовании аспирационного метода (прибора Кротова) проводится по формуле:

Х = 1000а / V, где а – количество колоний на чашке; V – объем прокаченного воздуха.

Основные показатели санитарного состояния воздуха:

-ОМЧ воздуха – количество колониеобразующих единиц в 1 м3 воздуха;

-присутствие золотистого стафилококка, α- и β- гемолитических стрептококков;

-присутствие дрожжеподобных и плесневых грибов;

-присутствие патогенных микроорганизмов.

В воздухе особо чистых помещений лечебных учреждений (операционных, родильных залов, боксов для ожоговых больных и недоношенных детей и т. п.) общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха не должно превышать 200 КОЕ. Золотистый стафилококк, α- и β- гемолитический стрептококк, дрожжеподобные и плесневые грибы должны отсутствовать.

Обеззараживание воздуха закрытых помещений проводят разными способами: УФЛ-аэроионизаторами, вентиляцией.

Основные характеристики санитарно-показательных микроорганизмов:

-СПМ должен постоянно обитать в организме человека или животных и постоянно выделяться во внешнюю среду;

-СПМ не должен размножаться на объектах окружающей среды;

-длительность выживания СПМ во внешней среде должна соответствовать длительности выживания патогенных микроорганизмов;

-методы идентификации и дифференциации СПМ должны быть просты и надежны.

Количество СПМ выражают в титрах и индексах:

-титр СПМ – наименьший объём исследуемого материала (в мл) или весовое количество (в г), в котором еще присутствует хотя бы одна особь СПМ;

-индекс СПМ – количество СПМ, обнаруженное в определённом объёме или весовом количестве исследуемого объекта.

После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет порядок выполнения самостоятельной работы.

Самостоятельная работа - посев воздуха седиментационным методом Коха на чашки Петри с МПА. Для этого открытую чашку на 5 минут оставляют в помещении на уровне рабочего стола, после чего помещают в термостат при 37ОС на 24 часа. Расчет микробного числа проводится по эмпирической формуле Омелянского: на поверхности среды в чашке Петри площадью 100 см2 в течение 5 минут оседает такое же количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха.

Расчет микробного загрязнения воздуха проводят с использованием демонстрационных чашек Петри.

7. Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия:

9

Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.

8. Литература для подготовки:

8.1.Основная:

1.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.

2.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 1 : учеб. по дисциплине “Микробиология, вирусология и иммунология” для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 “Лечеб. дело”, 060103.65 “Педиатрия”, 060104.65 “Медико-профилакт. дело” / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 448 с.: ил.

3.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 2 : учеб. по дисциплине “Микробиология, вирусология и иммунология” для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 “Лечеб. дело”, 060103.65 “Педиатрия”, 060104.65 “Медико-профилакт. дело” / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 480 с.: ил.

8.2.Дополнительная:

1.Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и

доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.

2.Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.

3.Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.

Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В.

Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.

ГБОУ ВПО “Уральский государственный медицинский университет” Министерства здравоохранения Российской Федерации Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Методические указания №9 к практическим занятиям для студентов

ООП специальности 060101.65 Лечебное дело Дисциплина С2.Б.10 Микробиология, вирусология

1.Тема: Нормальная микрофлора тела человека, ее физиологическое значение

и роль в патологии.

2.Цели занятия: Изучить со студентами нормальную микрофлору тела человека и ее значение для организма.

3.Задачи занятия:

3.1.Изучение нормальной микрофлоры различных областей тела человека.

3.2.Изучение физиологического значения нормальной микрофлоры тела человека.

3.3.Изучение роли дисбиотических состояний в развитии заболеваний.

3.4.Выполнение самостоятельной работы.

2

4.Продолжительность занятия в академических часах: 3 часа.

5.Контрольные вопросы по теме:

5.1.Нормальная микрофлора различных областей тела человека.

5.2.Физиологическое значение нормальной микрофлоры тела человека.

5.3.Роль нормальной микрофлоры тела человека в патологии.

5.4.Понятие о дисбактериозе и методах его коррекции.

6.Задания и методические указания к их выполнению.

На занятии студенту необходимо выполнить:

6.1.Ответить на вопросы преподавателя.

6.2.Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.

6.3.Выполнить самостоятельную работу.

Теоретическая справка

Ворганизме человека обитают примерно 500 видов микроорганизмов, составляющих его нормальную микрофлору. Макроорганизм и его микрофлора в нормальных условиях находятся в состоянии динамического равновесия (эубиоза), которое сложилось в процессе эволюции.

Открытыми биологическими системами (биотопами), которые сообщаются

свнешней средой, являются кожа, респираторный тракт, желудочно-кишечный тракт, наружные половые органы. Они заселяются микроорганизмами, среди которых доминируют бактерии. Простейшие и вирусы представлены значительно меньшим числом видов.

Внорме от микроорганизмов свободны кровь, ликвор, синовиальная жидкость, костный мозг, брюшная полость, плевральная полость, матка.

Естественную микрофлору любых биотопов подразделяют на резидентную (или постоянную) и транзиторную (или случайную). Если постоянная микрофлора содержит представителей, специфичных для данного биотопа, то случайная состоит из особей, занесенных извне. Так, в желудочно-кишечном тракте могут оказаться посторонние микроорганизмы, попавшие с пищей. Кожные покровы наиболее часто контаминируются случайной микрофлорой из окружающей среды. В трахее, бронхах, легких, пищеводе также может обнаруживаться транзиторная микрофлора.

Постоянная микрофлора конкретного биотопа относительно стабильна по составу. Вместе с тем состав и физиологическая роль составляющих ее микроорганизмов далеко не равнозначны. Поэтому в постоянной микрофлоре различают две фракции: облигатную и факультативную.

3

Облигатная микрофлора является главной составляющей любого микробиоценоза, она противодействует заселению биотопа случайными микроорганизмами, участвует в процессах ферментации, иммуностимуляции, то есть выполняет защитную функцию.

Факультативная микрофлора составляет меньшую часть постоянных обитателей биотопа. Если постоянная микрофлора проявляет себя преимущественно бродильной активностью (то есть расщеплением углеводов с образованием кислых продуктов), то факультативная фракция весьма активно участвует в гнилостных процессах (распаде белковых веществ с образованием щелочных продуктов).

Микрофлора кожи

Кожный покров является наиболее обширной областью человеческого тела, доступной для постоянных контактов с микроорганизмами окружающей среды.

В состав резидентной микрофлоры кожи входят, в основном, грамположительные сапрофитные бактерии - непатогенные коринебактерии, стафилококки, микрококки.

К транзиторной микрофлоре относятся грамположительные сарцины, золотистый стафилококк, грибы рода Candida, плесневые грибы. По типу дыхания микроорганизмы, заселяющие кожу, относятся к факультативным анаэробам. Основные зоны колонизации – поверхность ороговевших клеток эпидермиса, устья волосяных фолликулов, протоки сальных желез. На 1 см2 кожи может находиться от 10 тыс. до 1 млн. бактериальных клеток. Бактерии расщепляют секреты сальных желез до ненасыщенных жирных кислот, при этом происходит сдвиг рН в кислую сторону. Кислая реакция среды и продукты метаболизма представителей нормальной микрофлоры являются неблагоприятными факторами для патогенных бактерий, которые на поверхности здоровой кожи быстро погибают (в течение 5 минут). При ослаблении защитных реакций макроорганизма на коже возрастает количество грамотрицательных бактерий.

Микрофлора верхних дыхательных путей

Наиболее колонизированы верхние отделы дыхательных путей, которые анатомически приспособлены для осаждения бактерий из вдыхаемого воздуха. Резидентная микрофлора полости носа и носоглотки представлена грамположительными зеленящими и негемолитическими стрептококками, пептострептококками, микрококками, стафилококками, лактобактериями. Из грамотрицательных микроорганизмов здесь обитают непатогенные нейссерии и анаэробные неспорообразующие палочки - бактероиды.

Микрофлора желудочно-кишечного тракта Полость рта – один из наиболее заселенных участков тела человека – там

обнаруживается около 300 видов микроорганизмов. В полости рта обитают представители всех морфологических форм бактерий: кокки, палочки, извитые формы, а также простейшие, грибы, вирусы. Высокой обсемененности полости рта способствуют ее анатомические особенности (наличие десневых карманов, складок слизистой, межзубных промежутков), обилие питательных веществ, щелочная реакция среды, достаточное снабжение кислородом. Более 90% всей микрофлоры составляют облигатные анаэробы (лактобактерии, фузобактерии, пептострептококки). Анаэробные условия создаются в зубодесневых карманах, зубном налете. В большом количестве обнаруживаются кокки, как

4

грамположительные (стрептококки, стафилококки), так и грамотрицательные (нейссерии, вейлонеллы). В состав транзиторной микрофлоры входят грамотрицательные палочки (протей, клебсиелла, кишечная палочка, бактероиды), а также грамположительные спорообразующие палочки (бациллы и клостридии). Зеленящие стрептококки, обитающие в полости рта, вызывают развитие кариеса (S. mutans, S.mitis).

Пищевод и желудок у здоровых людей не имеет постоянной микрофлоры. Бактерии, которые обнаруживаются в пищеводе, соответствуют микробному пейзажу полости рта. В желудке, благодаря кислой среде, подавляющая часть бактерий погибает. Из транзиторной микрофлоры желудка следует отметить лактобактерии, сарцины, дрожжеподобные грибы.

Втонкой кишке находится 105-108 микроорганизмов на 1 мл содержимого. Здесь обнаруживаются бифидобактерии, лактобактерии, клостридии, энтерококки.

Втолстой кишке наблюдается наибольшее количество микроорганизмов. В 1 г фекалий содержится до 1012 микробных клеток. Около 95% всех видов микроорганизмов составляют анаэробные неспорообразующие бактерии.

Всостав облигатной микрофлоры толстой кишки входят анаэробные грамположительные неспорообразующие палочки (бифидобактерии, лактобактерии); анаэробные грамположительные спорообразующие палочки (клостридии); анаэробные грамотрицательные палочки (бактероиды); факультативно-анаэробные грамотрицательные палочки (кишечная палочка); анаэробные грамположительные кокки (пептострептококки, пептококки).

По количественному составу в облигатной микрофлоре преобладают бифидобактерии, бактероиды, лактобактерии и кишечная палочка (1012, 1011, 108, 107 колониеобразующих единиц в одном грамме, сокращенно КОЕ/г, соответственно).

Всостав факультативной флоры входят фузобактерии, протей, вейлонеллы, стафилококки, синегнойная палочка, клебсиеллы, а также дрожжеподобные грибы.

Микрофлора мочеполового тракта. Почки, мочеточники, мочевой пузырь, матка, простата стерильны. Микрофлора наружных гениталий представлена эпидермальными стафилококками, зеленящими стрептококками, непатогенными микобактериями, дрожжеподобными грибами рода Candida.

На слизистой оболочке передней уретры в норме встречаются стафилококки, непатогенные нейссерии и спирохеты.

Микрофлора влагалища у женщин детородного возраста состоит в основном из лактобактерий, которые расщепляют гликоген с образованием молочной кислоты. Закисление среды подавляет рост и размножение патогенных бактерий и

Возрастные изменения в составе микрофлоры

Формирование микрофлоры осуществляется в результате контакта новорожденного с микроорганизмами окружающей среды и организма матери, а также определяется санитарным состоянием среды, в которой проходили роды и типом вскармливания. К 3 месяцам жизни нормальная микрофлора ребенка становится сходной с микрофлорой взрослого.

5

Полость рта новорожденного заселяют аэробы, которые после прорезывания зубов замещаются анаэробами.

При грудном вскармливании основой микрофлоры кишечника ребенка являются бифидобактерии и лактобактерии. При искусственном вскармливании у недоношенных и слабых детей нарушается размножение бифидобактерий, и увеличивается количество грамотрицательных бактерий (кишечной палочки), а также кокков. Такие дети часто болеют.

Значение нормальной микрофлоры организма человека

Нормальная микрофлора выполняет важные физиологические функции, она участвует:

-в обменных процессах – регуляции газового состава кишечника, в расщеплении белков, липидов, нуклеиновых, жирных и желчных кислот;

-в регуляции моторной функции кишечника;

-в синтезе витаминов группы В, К, никотиновой, фолиевой кислот;

-в детоксикации эндогенных и экзогенных токсических продуктов;

-в процессах стимуляции формирования иммунной системы у новорожденных и поддержания иммунного статуса у взрослых;

-в предотвращении колонизации слизистых оболочек транзиторными, в том числе патогенными или условно-патогенными микроорганизмами.

Антагонистическая активность нормальной микрофлоры реализуется с помощью следующих механизмов:

-Образование кислых продуктов, подавляющих рост микроорганизмовконкурентов (молочная кислота, уксусная кислоты). Кислая среда препятствует размножению гнилостной и патогенной микрофлоры, стимулирует перистальтику кишечника;

-Биосинтез веществ, обладающих активностью антибиотиков (бактериоцинов);

-Конкуренция бактерий за пищевые субстраты;

-Конкуренция за площадь адгезии на клетках эпителия.

Нарушение состава нормальной микрофлоры

При различных заболеваниях нарушается количественное и качественное соотношение представителей нормальной микрофлоры, что способствует размножению патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. В этом случае развивается дисбактериоз (дисбиоз).

Дисбактериоз – это количественное и качественное изменение состава нормальной микрофлоры, приводящее к развитию или усугублению патологического процесса.

Причины развития дисбактериоза:

-заболевания желудочно-кишечного тракта инфекционной или неинфекционной природы;

-нерациональное применение антибиотиков и химиопрепаратов;

-неполноценное (несбалансированное) питание (особенно у детей 1-го года

жизни);

-злокачественные новообразования;

-хирургические вмешательства;

-гормональные нарушения;