7. Описать принцип и метод окраски по Грамму.

Результат окраски по методу Грама опред особен строения и химич состава клет стенки бак и зависит от способности удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Фирмикутные (толстостенные) бак окрашиваются грам+, поскольку имеют многослойный пептидогликан, связанный с тейхоевыми к-тами. Последние обусловливают прочную фиксацию красителя и резистентность к обесцвечиванию спиртом. Грациликутные (тонкостенные) бактерии окрашиваются грам-. При окраске по граму в кл на ур клет оболочки идет образование комплекса генциановый фиолет + йод. Этот комплекс нерастворим в воде, раствор в спирте. При обработке этанолом он проходит через клет оболочку грам- микроорг и вымывается-кл становятся бесцветными, при докрашивании фуксином они приобретают красный цвет. Клет оболочка грам+ микроорг, благодаря присутствию большого кол-ва полисахаридов, не пропускает комплекса генциановый фиолет+ йод и они сохр сине-фиолет цвет. Способность окрашиваться по граму-достаточно постоянный видовой признак, иногда может зависеть от возрастка кл, проявл при окраске молодых культур (после 20-24 ч выращивания)

Техника окраска по Граму в модификации Синёва 1. На фиксированный препарат наносят 2-3 кап воды и кладут полоску фильтр бумаги, пропитанной краской генцианвиолет. Окрашивают 1-2 мин.

2. Снимают бумажку, сливают краску и, не промывая водой, наливают на препарат р-р Люголя на 1 м

3. Сливают раствор Люголя и наливают на препарат спирт с йодом на 30 секунд. Промывают водой.

4. После этого окрашивают мазок водным фуксином в течение 1 минуты.

5. Промывают водой, высушивают препарат фильтр бумагой, микроскопируют. B результате окраски грам+ микробы окрашиваются в фиолетовый цвет, грам- - в красный.

Отношение бак к окраске по Граму. Кокки окрашиваются по Граму +, за искл гонококков и менингок. Палочки, не образующие спор, грам-, за искл палочек дифтерии, туберкулёза и проказы. Палочки, образуюшие споры (бациллы и клостридии) – грам+. Извитые формы (вибрионы и спириллы) грам-.

8. Описать принцип и метод окраски по Цилю-Нильсону.

Этот метод примен для окрашивания кислотоустойчивых микроорг, кот не окрашиваются с помощью др методов, и для выявл спор. Устойчивость некот микроорг к к-там связана с наличием в их клет оболочке липидов и восков. По методу циля-нильсена кислотоустойчивые микроорг (н, микобактерии туберкулеза) окраш в красный цвет и не обесцвечиваются к-той.

1. на фиксированный препарат поместить полоску фильтр бумаги, наливают карболовый фуксин циля и осторожно нагреть на горелке для появл пара, не допуская кипения жидкости. Нагревание повторить 3 р. 2. снимают бумагу, промывают водой 3. погружают 3 р в 5 % р-р серной к-ты

4. промывают препарат водой и докрашивают метиленовой синью 5 мин

5. промыть водой и высушить препарат фильтр бумагой, микроскопировать.

9. Как простерилизовать стеклянную посуду?

Перед стерилизацией посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд надевают бумажный колпачок. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 2–4 шт.

Для стерилизации пипеток в верх часть каждой вкладывают кусочек ваты и затем заворачивают их в плотную, предварительно нарезанную полосками бумагу шириной 2–2,5 см и длиной 50–70 см, на которой пишут объем завернутой пипетки. Пипетки можно стерилизовать в специальных пеналах.

Существует несколько видов стерилизации. Стерилизация кипячением – наиболее простой и доступный способ. Режим стерилизации: т 100 °С, вр – 40 мин.

Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха, предст собой полый металлич цилиндр с двойным дном (это пространство заполнено водой) и крышкой конической формы. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта его с паром. Стерилизацию текучим паром проводят несколько раз, т к однократное подогревание до т 100 °С не обеспечивает полной стерильности. Такая стерилизация называется дробной. Она применяется для сред, разрушающихся при т выше 100 °С. Обработку стерилизуемого материала текучим паром проводят ежедневно по 30 мин в течение 3 дней.

Стерилизация горячим воздухом (сухим жаром) явл основным способом стерилизации стеклянной посуды. Она осущ в сушильных шкафах при т 160–175 °С в течение 1,5–2 ч. При этом погибают и вегетативные кл и споры микроорг. Сушильные шкафы изготовляются из термостойких материалов (обычно из металла и асбеста). Внутри шкафа имеются полки, а наверху – отверстие, в котором укрепляют термометр. Здесь же есть отверстие для вентиляции, кот при стерилизации закрывают. Поддержание необходимой температуры обеспечивается терморегулятором.

Стерилизацию посуды и инструментов можно также проводить в автоклавах. Мелкие металлические инструменты (петли, иглы, ножницы) стерилизуют прокаливанием в пламени непосредственно перед

использованием. Изделия из резины (резиновые пробки, перчатки, шланги) стерилизуют автоклавированием. Предметы, изготовленные из термостабильных пластмасс, например, центрифужные пробирки, стерилизуют УФ-лучами, окисью этилена.