5. Определить dlm бактерий (по результату опыта).

Для опред Dlm культуры бак с плот пит сред смывают изотонич р-ром натрия хлорида. Полученную маточную суспензию разводят этим же р-ром до таких пределов, чтобы ее мутность соответствовала производственному стандарту мутности, содержащему строго опред концентрацию микробных тел. Культуру на жид средах разводят в пептонной воде. Для этого ее наливают по 1,8 мл в ряд пробирок. В 1ую из них вносят 0,2 мл исходной бульон взвеси бак и методом последовательного переноса этого объема из пробирки в пробирку получают 10кратно уменьшающиеся концентрации. Полученные взвеси разведения по 0,2 мл вводят внутрибрюшинно 2 - 3 белым мышам массой 18-20 г. S. pneumoniae относят к вирулентным, если мыши погибают через 36 - 48 ч. Минимал смерт доза резко варьирует в зависимости от вида и штамма возбуд, места его введения, а также от массы животного. Как показатель вирулентности LD50 более информативный, т к в очень малой степени зависит от индивидуальной чувствит животных. Его определяют, вводя 5-6 животным серийные десятикратные разведения бактерий или вирусов.

Поскольку трудно подобрать точную дозу, кот бы вызвала гибель 50 % взятых в опыт животных, применяют метод статистического учета и вычисления LD50. При исслед культуры, разведенной от 10-1 до 10-8, требуется 8 гр животных. Прекратив наблюдения, отмечают кол-во погибших животных в каждой гр и при помощи спец табл опред LD50. Вирулентность бак в большой мере обусловливается выработкой ими экзо- и эндотокс, сила кот опред теми же Dlm и LD50.

Единицы измерения вирулентности: Dlm – Dosis letalis minima, LD50, Dcl – Dosis certa letalis (100%),

ID – инфицирующая доза (кол-во возбуд, способное вызвать инфекц процесс в его явной форме, т.е. инфекц заб).

6. Определить LD₅₀ бактерий (по результату опыта).

Для опред LD50, н, для исслед вируса, готовят 10-кратные разведения вируссодержащего материала от 10-1 до 10-8, так как летальность животных прямо пропорциональна логарифму разведения.

После приготовления соответств разведений вируссодержащий материал вводят животным, н, белым мышам. Число животных м б большим, но обычно каждым разведением заражают 4-6 мышей.

Срок наблюдения за животными после их заражения д б равен сумме 2х средних инкубац периодов. Учитывается гибель животных, наступающая в сроки, кот соответст инкубационному периоду.

Н, при заражении животных различными развед вируссодержащего материала получены результаты

Статистическая обработка по методу Рида и Менча результатов заражения животных производится с использованием кумулятивных, т.е. суммарных данных опыта.

Для опред LD 50 учитываются дозы, распол ближе всего к той, кот дает 50 % летальности. Ближайшая доза, дающая более 50% летальности, явл высшей критической дозой (в нашем примере ей соответствует разведение вируса 10-4 ). Ближайшая доза, кот дает летальность менее 50 %, явл низшей критической дозой (в нашем примере ей соответствует разведение 10-5 ).

Отношение разницы между летальностью, обусловленной высшей критической дозой и 50, к разнице между летальностями, обусловленными высшей и низшей критическими дозами, называется коэффициентом пропорциональности.

Определение LD50 для исследуемого вируса Примечание: Если животное погибает раньше инкубац периода, их искл из опыта. Если последнее разведение вируса вызывает еще гибель животных, то его следует еще развести, так чтобы получить разведение, кот не вызывает гибель животных.

Рассчитываем коэффициент пропорциональности для нашего примера.

Коэффициент пропорциональности =

LD50 соответствует сумме логарифма высшей критической дозы и коэффициенту пропорциональности. Для нашего примера LD50 =10-4,5