32. Назовите правила противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологической лаборатории

Соблюдение правил противоэпид режима. Бактериологич лаб при лечебно-проф учреждениях выполняют анализы, необход для постановки и уточнения диагноза инфекц заб, способствуя правильному выбору специфического лечения. Предметом для исслед явл выделения из орг чела, трупный материал и объекты внешней среды.

В соответствии с рекомендациями ВОЗ патогенные микроорг разделены на 4 гр по степени биологич опасности для сотрудников лабораторий и окружающего населения: -I - возбуд особо опасных инф (чумы, оспы, желтой лихорадки); -II – возбуд высококонтагиозных эпид заб (сибирской язвы, бруцеллеза, сыпного тифа); -III – возбуд инфекц болезней, выделяемые в самостоятельные нозологические группы ( брюшного тифа, шигеллезов); -IV – условно-патогенные микробы, возбудители оппортунистических инфекций.

Нумерация групп микробов, принятая в России, отличается обратным порядком от классификации ВОЗ, где к I группе относят микроорг самой низкой патогенности, а к IV - особо опасные. По номенклатуре ВОЗ выделяют 3 категории лабораторий: - базовые (основные или общего типа);

- режимные (изолированные); - лаборатории особого режима (максимально изолированные).

Основные правила поведения в бактериологич лаборатории 1.В помещении лаб нельзя входить без спец одежды: халата, сменной обуви. 2.В лаб нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу. 3.При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дез р-ром; переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дез раствор. 4.Если разбилась посуда, содержащая заразный материал (пробирки, чашка Петри и др.), немедленно производится обеззараживание предметов, одежды, стола и помещения. 5.После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола. 6.Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник, закрывают и опечатывают

7. Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбуд кот они работают. На кафедре микробиологии испол материалы, содержащие возбудителей III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Республиканской СЭС.

33. окраска метиленовой синью

Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю физ. Р-ра, в кот петлей вносят исслед материал (его берут из пробирки с чистой культурой, берут биолог петлей, предварительно открывая пробирку с культурой в пламени горелки и закрывают ее в пламени горелки) и распределяют его т о, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно увидеть изолированы бактериал клетки. Если исслед материал содержится в жид среде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не давая капле закипать. Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 р через пламя горелки. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим - это простой (3-5 мин ), промыть водой, высушить и микроскопировать. Посмотреть в микроскоп и определить форму микроорганизмов , в мазке окрасились микроорганизмы в синий цвет.

34.и 35. по граму

1. Приготовление мазка. На обезжиренное спиртом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое кол-во исслед материала как для препарата «раздавленная капля». Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1 - 2 см2 возможно более тонким слоем. Мазок д б настолько тонок, чтобы высыхал после приготовления. 2. Высушивание мазка. Лучше всего сушить готовый препарат при комнатной т на воздухе. Хорошо приготовл тонкий мазок высыхает быстро. Если высушивание мазка замедлено, то препарат можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию следует проводить осторожно, не перегревая мазка, иначе кл микроорг деформир. 3. Фиксация препарата преследует несколько целей: убить микроорг, т е сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обеспечить лучшее прилипание кл к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, т к мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распростр способом фиксации явл термическая обработка. Для этого препарат 3 проводят через наиб горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, т к при этом происходят грубые изменения клет структур, а иногда и внеш вида кл, н их сморщивание. Для исслед тонкого строения кл прибегают к фиксации различными хим в-вами. Фиксирующую жидкость наливают на мазок, либо препарат на опред вр погружают в стакан с фиксатором.

Методика окраски 1.Фиксированный мазок окрашивают через фильтр бумагу основным красителем – р-ром основного карболового кристаллического фиолетового. Прокрашивание длится 1-2 минуты.

2.Снимают бумагу, сливают избыток красителя и, не промывая препарата водой, наливают р-р Люголя на 1-2 минуты до почернения препарата. 3.Р-р Люголя сливают. Предметное стекло для обесцвечивания мазка погружают несколько раз в стаканчик со спитртом, процесс обесцвечивания считается завершенным, когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости. 4.Препарат тщательно промывают водопроводной водой.

5.Докрашивают спирто-водным раствором фуксина.

Результаты окраски Грам(+) микроорг окрашиваются основным красителем в темно-фиолет цвет, Грам(-), воспринимая дополнительную окраску, приобретают ярко-малиновый цвет.

36. по цилю-нильсену

1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый р-р фуксина и подогревают; при появл паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько мин (2—3 мин). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой. 2. Обесцвечивают препарат 5—10% вод р-ром серной к-ты в теч 3—5 сек (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной к-ты можно применить 5% р-р азотной или 3% р-р соляной кислоты.

3. Мазок тщательно промывают водой.

4. Споласкивают 96°спиртом.

5. Снова промывают водой.

6. Докрашивают в течение 3—5 мин леффлеровской метиленовой синью или вод р-ром 1: 1000 малахитовой зе­лени или метиловой зелени.

7. Краску смывают водой и препарат высу­шивают.

Микроскопич картина: туберкулезные палочки - рубиново красные, остальные, за искл возбуд паратуберкулеза, кислото - и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие. Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо р-ров к-т и спирта особо рекомендуется применение солянокислого алкоголя (соляной к-ты 3 мл+96° спирта 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой и т. д. по основной прописи. Указанным методом достигается одновр испытание бацилл на кислото - и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото - и спиртоустойчивы.