37. Посев материала на чашку с мпа для выделения чистой культуры

При посеве на чашку Петри: чашку берут в левую руку, большим пальцем левой руки слегка приподн крышку, обжигают на пламени горелки края чашки в зоне щели, вносят посевной материал на поверх пит среды, затем растирают его при помощи стеклянного шпателя или бактериологической петли

Выделение чистой культуры бак-аэробов из материала, содержащего смесь микробов, занимает, как правило, 3 дня и производится по следующей схеме: 1 день - микроскопия мазка из исслед материала, окрашенного по Грамму, для предварительного ознакомления с микрофлорой данной смеси. Посев материала петлей на чашку Петри с пит средой штриховым методом для получения изолированных колоний. Засеянные чашки помещают в термостат на сутки. 2 день - изучение колоний, выросших на чашках, отбор изолированных колоний, описание их и микроскопия мазков из изолированных колоний (окраска по Граму) для проверки однородности микробов в колонии. Пересев изолированной колонии на скошенный агар для получения чистой культуры. Посевы помещают в термостат на сутки.

3 День - проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре, путём микроскопии мазков, окрашенных по Граму. При однородности исслед бак выделение чистой культуры можно считать законченным.

При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологич материала, загрязненного посторонней микрофлорой, прибегают иногда к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроба, кот предполагается выделить из исслед материала. Биологич метод выделения чистой культуры применяется при исслед мокроты на содержание в ней пневмококков, микобактерий туберкулеза.

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). 3 пробирки, содерж по 15 мл мясопептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до т 43–45 °С. В пробирку вносят 1 бактериологич петлю исслед материала. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав между ладонями. После этого 1 петлю (прокаленную и остуженную) содержимого 1й пробирки переносят во 2-ю и т о из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок.

После застудневания среды с исслед материалом чашки помещают в термостат. Кол-во колоний в чашках с пит средой уменьшается по мере разведения материала.

Выделение чистой культуры по способу Дригальского. Расплавленную пит среду разливают в 3 чашки Петри. Застывшую среду обязательно подсушивают, т к влажная поверхность ее способствует образованию сливного роста. В 1ую чашку вносят 1 каплю исслед материала и стерильным шпателем втирают его в поверх пит среды. Далее, не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во 2-ю, а затем и 3-ю чашки, втирая в поверхность пит сред оставшийся на нем материал.

Метод рассева по поверхности, предложенный Дригальским, явл наиболее употребительным для получения чистой культуры микробов. Вместо шпателя можно пользоваться петлей. Материал на пит среде распределяют параллельными штрихами по всей чашке в 1ом направлении. Затем, повернув чашку на 90°, проводят штрихи в направлении, перпендикулярном 1ым штрихам. При таком способе посева материал, находящийся в петле, расходуется постепенно, и по линиям штрихов, нанесенных в конце посева, вырастают изолированные колонии микробов.

Для создания бескислородных условий испол физич, химич и биологич ф-ры.

Физич способы культивирования анаэробов: · • способ Виньяля – Вейона. Берут 4–5 пробирок с 0,5 % расплавленным и охлажденным до т 40–45 °С сахарным агаром. В содержимое 1ой из них вносят пипеткой небольшое кол-во исслед материала и тщательно размешивают. Для уменьш концентрации материала с целью получения изолированных колоний засеянную среду в кол-ве, соответств объему внесенного материала, переносят из 1-й пробирки во 2-ю, из 2-й в 3-ю. Затем содержимым каждой пробирки заполняют капилляры трех пастеровских пипеток.

Чтобы предупредить застывание пит среды в момент насасывания ее в пипетки, пока их кончик не обломлен, пипетки погружают на 3–5 мин в стерильную воду с т 45–50 °С. После заполнения вытянутый конец трубки запаивают и помещают в стеклянный цилиндр с ватой на дне. Через 2–3 сут в столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов. Выросшие колонии легко изолировать. Для этого капилляр надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию микроба, находящуюся в агаре, извлекают петлей и пересевают в свежую пит среду;

· • выращивание анаэробов в условиях вакуума. Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате или эксикаторе. Исслед материал или культуру микробов засевают в пробирки с жид средой или в чашки Петри с плот пит средой. Посевы помещают в анаэростат, затем присоед его к насосу и выкачивают воздух. Степень разреженности воздуха опред по показаниям вакуумметра. Колонии анаэробов в вакуумных условиях растут на поверхности плот пит среды.

Химич методы выращивания анаэробов (метод Аристовского). Материал, исслед на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфит натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда уст на подставке чашки с посевами. Прибор закрывают крышкой и помещают в термостат при т 37 *С на 24–48 ч.

Биологич метод выращивания анаэробов (по Фортнеру). В чашку Петри наливают толстым слоем 5 % кровяной агар с 1–2 % глюкозы. Посередине чашки в пит среде вырезают стерильным скальпелем канавку шириной 1–1,5 см, кот делит пит среду на 2 половины. 1 из них засевают культурой анаэробов или исслед на их наличие материалом, др половину – культурой аэробов: чудесной палочкой (Serratia marcescens) или кишечной палочкой (Escherichia coli). Перед посевом чашки подсушивают в термостате, чтобы аэробы вместе с капельками влаги не могли попасть на др сторону чашки. Засеянные чашки закрывают, а свободное пространство между дном и крышкой заклеивают лейкопластырем, чтобы предупредить поступление в чашку кислорода извне. В термостате чашки уст вверх дном. Быстро растущие аэробы, поглощая находящийся в чашке кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробов.

Анаэростат для культивирования анаэробов. Анаэростат – прибор для выращивания микробов в анаэробных условиях – предст собой толстостенную металлич или пластиковую камеру с герметически привинчивающейся крышкой, на кот имеются вакуумметр и 2 крана для присоединения к вакуум-насосу. Вместо кислорода в нем используются газовые смеси.

38. дайте характеристику пробиотика по составу и применению

Пробиотики (синоним эубиотики) — непатогенные для чела (или животного) бак или др микроорг, обладающие антагонистической активностью в отношении патогенных и условно патогенных микроорг и обеспечивающие восст норм микрофлоры чела или выполняющие др полезные для чела (или животного) ф-ции. Пробиотики — это живые микроорг, кот м б вкл в состав различных пищ продуктов, лекарственных препаратов и пищевых добавок.

В зависимости от особенностей состава пробиотки подразделяют на несколько основных групп:

1. Монокомпонентные – относятся к 1му поколению. Содержат бак 1го вида, являющ представителями облигатной кишеч микрофлоры (лактосодержащие, бифидосодержащие, колисодержащие). К ним относятся такие препараты, как Лактобактерин, Мутафлор, Колибактерин, Бифидумбактерин.

2. Антагонисты (2 поколение) – препараты конкурентного действия, кот не явл представителями нормальной микрофлоры ЖКТ (Спорбактерин, Энтерол).

3. Симбиотикиполикомпонентные (3 поколение), содержащие более 1го штамма микроорг, усиливающих действие друг друга (Биовестин-лакто, Линекс, Ацилакт, Бифиформ).

4. 4ое поколение – сорбированные бифидосодержащие пробиотики комбинированного типа. В состав таких ср-в входят в-ва, оказывающие иммуномодулирующее действие (поливалентные иммуноглобулины, витамины, лизоцим и др.).

5. Синбиотики 5го пок вкл компоненты пребиотич д-вия и облигатную флору (Нормофлорины)

По применению 1.Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника. Нарушение кач-ного или колич-ного состава микрофлоры(н при приеме а/б). Синдром, не явл самостоятельным заб. Имеет мн-во проявл и причин. Необходимо устранение или лечение причин этого состояния. Пробиотики помогают восстановить баланс микрофлоры кишечника.

2. Инфекц поражения кишечника. У пац наблюдается расстройство пищеварения, диарея, боль в животе. Пробиотики способс инактивации патогенной микрофлоры, нормализуют работу кишечника.

3. Синдром раздраженного кишечника. Заб проявл нарушением моторики кишечника и выявл путем искл иных патологий. Клинически у пац отмечается наличие запоров или поносов, болей в животе. Пробиотики способствуют улучшению моторики, нормализуют стул, борются с вздутием живота.

4.Воспалит заб ЖКТ. В данном случае пробиотики испол в кач-ве вспомогательных ср-в к основному лечению. Они способствуют созданию защитного барьера на слизистой оболочке кишечника, повыш иммунитет, ускоряют процесс заживления повреждений, вызванных воспалением.

39. характеристика при микроскопировании препарата.

40. поставьте реакцию агглютинации на стекле

На обезжиренное предметное стекло наносят 2 кап сыворотки и каплю изотонич р-ра хлорида натрия. В 1 из капель сыворотки и в каплю изотонич р-ра петлей вносят культуру исслед микроорг и тщательно размешивают. Нельзя при этом переносить культуру из капли с сывороткой в каплю с р-ром хлорида натрия, кот явл контролем антигена. Капля сыворотки, в кот не внесена культура, явл контролем сыворотки. Р-ция протекает при комнат т в теч 1-3 мин. Если контроль сыворотки остается прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерное помутнение, а в капле, где культура смешана с сывороткой, появл хлопья агглютинана, то результат р-ции считают +