1. Описать принцип микроскопии с тёмнопольным микроскопом.

Для микроскопии в темном поле применяются особые конденсоры, у кот центр часть линзы затемнена, за искл узкой полоски по периферии. боковые поверхности конденсора предст собой не прямую линию, а параболу. Внутр поверхн такого темнопольного параболоид-конденсора зеркальная. Лучи света попадают в темнопольный конденсор только через узкую полоску по периферии линзы. Затем они отражаются от его зеркал поверхн и, если в поле зрения нет никакого объекта, то ни 1 луч не попадает в объектив. Поле зрения кажется совершенно черным. Если же в поле зрения есть какие-то объекты, н, микробы, то лучи, отраженные от них, попадают в объектив, и их можно видеть светящимися на темном фоне. (феномен Тиндаля). можно обычный конденсор превратить в темнопольный, поместив между его линзами кружок черной бумаги меньше по диаметру линзы конденсора. В таком "приспособленном" конденсоре можно наблюдать достаточно ясно живых светящихся микробов, но поле зрения будет не черным, а серым. Преимущество микроскопии в темном поле зрения в том, что при этом можно видеть объекты более мелкие. в темном поле зрения лучше наблюдать в живом состоянии такие микробы, как лептоспиры, кот в водной среде не преломляют света и поэтому в проходящем свете совершенно прозрачны. Неокрашенные живые культуры микроорг наблюдают также в препарате «раздавленная» капля с помощью темнопольной микроскопии, кот позволяет несколько расширить разрешающ способность микроскопа. Микроскопия в темном поле основана на освещении объекта косыми лучами света. Эти лучи, не попадая в объектив, остаются невидимыми для глаза, поэтому поле зрения выглядит совершенно черным, а объекты, н микроб кл, находящиеся в препарате, интенсивно светятся.

Такое освещение препарата достигается применением спец темнопольного конденсора, кот заменяют обычный конденсор микроскопа. Темнопольный конденсор имеет затемненную сред часть, поэтому центр лучи света, идущие от осветителя или зеркала вверх, задерживаются. В плоскость препарата попадают только боковые лучи, отраженные от зеркальных поверхн, располож внутри конденсора. Для темнопольной микроскопии требуется более мощный источник света, чем для микроскопии в светлом поле, толщина препарата д б минимальной, а размер предметных стекол стандартным (толщиной до 1,2 мм). Фокусируют препарат с объективом X8 (X10), затем производят замену светлопольного конденсора на темнопольный, на верх линзу конденсора наносят каплю иммерсионного масла, конденсор поднимают до соприкосновения капли масла с предметным стеклом, капля должна равномерно заполнять пространство между линзой конденсора и предметным стеклом и не содержать пузырьков воздуха. Просматривают препарат, пользуясь объективом X40.

2. Описать принцип микроскопии с люминесцентным микроскопом.

Люминесценция - это свечение объекта за счет поглощенной световой энергии коротковолновой или уф части спектра. Бол-во микроорг не обладает собственной люминесценцией, поэтому пользуются наведенной люминесценцией путем обработки микробов флюорохромами. Некот флюорохромы избирательно связываются с опред структурами, н, ядро, цитоплазма, включения. Т о, можно дифференцировать эти структуры. Препараты, обработан флюорохромами, микроскопируют в спец люминесцентных микроскопах, в кот объекты исследуются в уф лучах.

Люминесцентная микроскопия испол для р-ции иммунофлюоресценции (РИФ). В этой р-ции для опред вида микробов препарат-мазок из исслед материала обрабатывают специф антисывороткой, соединенной с флюорохромом. Если в материале содержатся микробы, соответст антисыворотке, то при микроскопии препарата в люминесцентном микроскопе наблюдается свечение микробов.

Флюоресценция - свечение микроскопических объектов, возбуждаемое поглощенной световой энергией. Свечение объектов м б собственное (без предварительного окрашивания) и наведенное (в результате обработки образца красителем). При действии на объект невидимыми уф или сине-фиолет лучами с короткой длиной волн возбуждается люминесценция с более длинной световой волной, видимой глазом чела. Это св-во и положено в основу люминесцентной микроскопии. Т о, для люминесцентной микроскопии необходимы источник уф или сине-фиолетового света и набор оптических светофильтров для отделения флюоресценции от падающего света. Микробиологич препараты для люминесцентной микроскопии обрабатывают спец красителями - флюорохромами (акридин оранжевый, аурамин, корифосфин, родамин), некот из них обладают способностью связываться с опред органоидами кл - ядром, клет оболочкой, включениями.