Задача 5.

Материал для исследований: - от людей: кровь, моча, костный мозг, спинномозговая жидкость, суставная жидкость (при артритах), околоплодные воды, секционный материал; - от животных: абортированные плоды, плодные оболочки, лимфатические узлы; - пищевые продукты: молоко, сливки, сыры, творог, мясо; - объекты внешней среды: почва, вода. При бактериологическом исследовании патологический материал высевают в 2 флакона с жидкой питательной средой (соевый бульон, бульон Мартена, эритрит-бульон, бульон BBL, МПБ с 1% глюкозы и глицерина). В одном из флаконов создают повышенную концентрацию (10%) углекислого газа (например, флакон помещают в эксикатор со свечой для стимуляции роста B. abortus). Флаконы инкубируют в термостате при 37ОС в течение 30 дней, после чего производят высевы на плотные среды (триптозный, 5%-ный кровяной, печеночный агар и др.). Для подавления посторонней микрофлоры в среды добавляют генцианвиолет, кристаллвиолет или антибиотики – полимиксин, амфотерицин, бацитрацин. В атмосфере углекислого газа рост бруцелл наблюдается уже через 4-5 суток. Положительные результаты посевов крови больных людей на питательные среды наблюдается только в 50-70% случаев. Колонии на плотной питательной среде имеют круглую форму, размеры 1-5 мм в диаметре, серовато-белые, блестящие, прозрачные с янтарным оттенком. Для дифференциации видов бруцелл используют показатели: - способность некоторых биоваров вырабатывать сероводород (B. abortus); - продукция уреазы; - чувствительность к бактериостатическому действию фуксина и тионина.

К экспресс-методам диагностики бруцеллеза относятся РИФ, РПГА и РНАт.

При отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований проводят внутрикожную аллергическую пробу (пробу Бюрне). Эта проба позволяет выявлять гиперчувствительность организма.

6. В стационар поступил больной в тяжелом состоянии: температура тела 400с, лимфаденит паховых и подмышечных лимфоузлов с их агломерацией. Подозрение на чуму.

а) Определить объекты для обследования.

б) Разработать схему лабораторной диагностики с учетом того, что Y. pestis относится к ПБА I степени патогенности.

Задача 6.

Схема микробиологического исследования при чуме:

Первый день:

- выявление в материале чумных микробов путем микроскопии мазков, приготовленных из исследуемого материала и окрашенных по Граму, метиленовым синим и специфической люминесцирующей сывороткой;

- обнаружение в материале фракции I чумного микроба с помощью РПГА с иммуноглобулиновым диагностикумом или реакции нейтрализации антител (РНАт) с антигенным диагностикумом;

- выделение чистой культуры чумного микроба путем посева материала на плотные и в жидкие питательные среды;

- биопроба на морских свинках и белых мышах.

Второй день:

- изучение характера роста культуры на питательных средах, приготовление, окраска и микроскопия препаратов;

- пересев подозрительных колоний для выделения чистой культуры.

Третий день:

- идентификация чистой культуры по характеру роста на питательных средах, специфическому свечению при люминесцентной микроскопии, по наличию фракции I в РПГА;

- изучение ферментативной активности – расщепление глицерина, рамнозы, сахарозы, глюкозы и других углеводов;

- определение чувствительности культуры к чумному бактериофагу (Л-413, Покровской);

- определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом дисков.

Четвертый день:

- учет результатов и выдача заключения.

При бактериоскопическом исследовании приготовленный препарат фиксируют в смеси Никифорова и окрашивают по Граму или метиленовым синим по Лёффлеру.

При культуральном исследовании проводят выделение чистой культуры и ее идентификацию. С этой целью исследуемый материал высевают на питательные среды (МПА, МПБ, агар Мартена). Культивирование проводят при температуре 28ОС в течение 12-20 часов. Эффективным способом выделения чистой культуры чумного микроба из материала, контаминированного посторонней микрофлорой, является биопроба на морских свинках и белых мышах. В качестве экспресс-диагностики используют фагодиагностику, ПЦР, РИФ. Например, реакция иммунофлюоресценции позволяет поставить предварительный диагноз уже через 2 часа.

Серологическое исследование проводится постановкой РНГА, ИФА. В качестве аллергического метода диагностики проводят кожную пробу с пестином. Аллергическая проба относится к методам ретроспективной диагностики. В диагностике чумы используют также чумной бактериофаг.

КАПЕЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ

ТУБЕРКУЛЕЗ

1. У больного Н., 54-ех лет рентгенологически в шестом сегменте правого легкого определяется полость деструкции. Клинически: длительный субфебрилитет (в течение 1,5 месяцев), влажный кашель, в мокроте определяются прожилки крови, жалобы на слабость, общее недомогание, потливость в ночное время. Больной астеничен, кожные покровы бледные, влажные. Подозрение на туберкулез. Какой материал для исследования необходимо забрать у больного? Каким образом осуществить эту процедуру? Какой первичной обработке должен быть подвергнут материал и для чего? Какую питательную среду следует использовать для культивирования возбудителей? Каковы культуральные свойства возбудителей туберкулеза и сроки их роста на искусственных питательных средах? Можно ли использовать ускоренный метод лабораторной диагностики и в чем его суть?