Особенности микробиологической диагностики различных форм стафилококковых инфекций

Формы инфекционного процесса

Ограниченный очаг воспаления

(фурункул, карбункул, панариций и другие локализованные воспалительные процессы)

Заболевания внутренних органов (пневмония, пиелонефрит, цистит и другие неспецифические воспалительные процессы)

Генерализованная форма инфекции - сепсис

Пищевые отравления

(интоксикации)

Исследуемый материал

Содержимое очага

(гной)

Отделяемое пораженных органов (носоглоточный смыв, мокрота, моча)

Кровь

Рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения

Остатки пищи, суточные пробы блюд, пищевые продукты

Особенности исследуемого материала

Концентрация возбудителя в исследуемом материале

высокая

высокая

высокая

низкая

низкая

Наличие форменных элементов крови (ФЭК)

присутствует

присутствует

присутствует

присутствует

отсутствуют

Наличие сопутствующей микрофлоры

присутствует

присутствует

отсутствуют

присутствует

отсутствуют

Бактериоскопическое исследование

Диагностическая значимость бактериоскопического метода исследования

Обнаружение возбудителя под микроскопом, оценка тинкториальных свойств, оценка качественного и количественного состава микрофлоры

Обнаружение возбудителя под микроскопом, оценка тинкториальных свойств, оценка качественного и количественного состава микрофлоры

Обнаружение возбудителя под микроскопом, оценка тинкториальных свойств

Морфология и тинкториальные свойства стафилококков

Шаровидные клетки стафилококков окрашиваются в сине-фиолетовый цвет и располагаются небольшими скоплениями («виноградная гроздь»), попарно или короткими цепочками

Шаровидные клетки стафилококков окрашиваются в сине-фиолетовый цвет и располагаются хаотично

Бактериологическое исследование

Нужно ли использовать среды обогащения? Если да, то какие?

При низкой концентрации бактерий в необходимы элективные среды, содержащие глюкозу

При низкой концентрации бактерий в необходимы элективные среды, содержащие глюкозу

При низкой концентрации бактерий в необходимы элективные среды, содержащие глюкозу

Стафилококковые пищевые интоксикации возникают, как правило при массивном накоплении в продукте штаммов золотистых стафилококков, продуцирующих энтеротоксины. Микроскопия остатков продукта позволит предположить этиологию заболевания. Для подтверждения диагноза как в материале от больного, так и в продукте необходимо выявить экзотоксин. Для этого может быть поставлена биологическая проба или ИФА.

Характер роста на жидких питательных средах

диффузное помутнение

Какие плотные питательные среды используются?

– молочно-солевой агар (МСА)

При росте на МСА оценивают пигментообразование

– желточно-солевой агар (ЖСА) (Чистовича)

При росте на ЖСА оценивают наличие радужного

венчика вокруг колоний за счет фермента лецитовителлазы

– кровяной агар (КА)

При росте на кровяном агаре оценивают зону прозрачного

гемолиза вокруг колоний

– молочно-солевой агар (МСА)

При росте на МСА оценивают пигментообразование

– желточно-солевой агар (ЖСА) (Чистовича)

При росте на ЖСА оценивают наличие радужного

венчика вокруг колоний за счет фермента лецитовителлазы

– кровяной агар (КА)

При росте на кровяном агаре оценивают зону прозрачного

гемолиза вокруг колоний

– молочно-солевой агар (МСА)

При росте на МСА оценивают пигментообразование

– желточно-солевой агар (ЖСА) (Чистовича)

При росте на ЖСА оценивают наличие радужного

венчика вокруг колоний за счет фермента лецитовителлазы

Свойства колонии стафилококков на ЖСА

Золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком.

Тесты для идентификации и их значение

Независимо от исследуемого материала при идентификации чистой культуры стафилококков изучают

1. Морфологические свойства (окраска по Граму, оценка взаиморасположения клеток в мазке).

2. Биохимические свойства

А. Выявление каталазы (смешивание одной петли чистой культуры с каплей 3% Н ₂ О ₂)

Значение: разрушение перекиси водорода (подтверждает отношение к семейству Micrococcaceae)

Б. Посев на среды «пестрого ряда»

- ферментации глюкозы в анаэробных условиях

Значение: ферментация до кислоты (определение рода Staphylococcus)

-ферментация маннита в анаэробных условиях

Значение: ферментация до кислоты (видовой признак S. Аureus)

3. Изучение факторов патогенности

А. Наличие плазмокоагулазы (посев одной петли чистой культуры в цитратную плазму кролика)

Значение: фибринозная пленка вокруг стафилакокка (коагулазоположительные стафилококки (КПС): S. Aureus, и коагулазоотрицательные (КОС): S.epidermidis, S. Saprophiticus)

Б Выявление гемолитической активности (посев штрихом на сектор кровяного агара).

Значение: разрушение эритроцитов (распределение на альфа-, бетта- и гамма-гемолизы в зависимости от количества пометнения вокруг клеток)

В. Выявление лецитовителлазы (посев штрихом не сектор ЖСА).

Значение: разрушение клеточной стенки (продуцируют чаще всего S. Аureus, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком)

4.Фаготипирование. (Метод стерильного пятна с использованием набора типовых стафилококковых бактериофагов).

Значение: Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.Положительным считается результат, степень лизиса при котором определяют не менее как на 2 плюса. В этом случае зона лизиса составляет около 50% площади в месте нанесения бактериофага. Во многих случаях культуры стафилококков лизируются не одним, а несколькими фагами, образуя своеобразую фагомозаику из стерильных пятен. Стафилококки, обнаруживающие одну и ту же мозаику или отличающиеся на 1 фаг, считаются идентичными.

Антибиотикочувствительность

Значение определения чувствительности к метициллину. Характеристика MRSA.

MRSA – метициллин (оксациллин)-резистентные стафилококки – это стафилококки, устойчивые к группе Бетта-лактамных антибиотиков. Такая устойчивость является маркером на множественные лекарственные препараты. В отношении данной антибиотикоусойчивости эффективны: гликопептидные антибиотики (ванкомицин, тейкопланин), оксазолидоновый антибиотик (линезолид)