Резистентность возбудителя в окружающей среде

     В окружающей среде устойчивость вирусов гриппа невелика. Они термолабильны (чувствительны к высоким температурам). При 56-60°С теряют инфекционность в течение нескольких минут, однако могут некоторое время сохраняться при низких температурах – в течение недели не погибают при температуре около 4°С. Также чувствительны к УФ-облучению, жирорастворителям и к табельным дезинфектантам.

III. Патогенез (пути и механизм заражения)

     Обычно входные ворота инфекции – это верхние дыхательные пути, но вирус, передающийся воздушно-капельным путем, может проникнуть сразу в альвеолы, что вызывает развитие пневмонии. Первичная репродукция вирусов происходит в клетках цилиндрического эпителия респираторного тракта, вызывая их дегенеративные изменения, используя содержимое эпителиальных клеток для построения новых вирусных частиц. Инфицированные клетки начинают вырабатывать интерферон, оказывающий неспецифическое противовирусное действие. Развиваются воспаление, отек, набухание базальной мембраны, происходит десквамация клеток поверхностного эпителия. Через поврежденные эпителиальные барьеры вирус гриппа А проникает в кровоток и вызывает виремию. Всасывание продуктов распада клеток также оказывает токсическое и сенсибилизирующее действие на организм. Вирус активирует систему протеолиза и вызывает повреждение эндотелия капилляров. Это повышает проницаемость сосудов и серозных оболочек, что вызывает геморрагии и нарушение гемодинамики с расстройствами микроциркуляции. При гриппе также развивается транзиторный вторичный иммунодефицит, что предрасполагает к развитию вторичной бактериальной инфекции.

     Жизненный цикл вирусов гриппа следующий:

     - адсорбция на рецепторах чувствительных клеток, содержащих сиаловую кислоту, с помощью гемагглютининов

     - проникновение в клетку путем рецепторного эндоцитоза

     - депротеинизация: освобождается от суперкапсида и капсидных белков

     - эклипс-фаза: репликация нуклеиновых кислот в ядре и синтез вирусных белков в цитоплазме на рибосомах

     - сборка нуклеокапсида на внутренней поверхности клеточной мембраны в цитоплазме клетки

     - выход из клетки путем экзоцитоза (почкования) или лизиса, из ЦПМ клетки образуется суперкапсид.

     В целом жизненный цикл вируса занимает 6-8 часов и завершается отпочкованием вновь синтезированных вирионов, которые способны атаковать другие клетки ткани.

IV. Микробиологическая диагностика

     Материалы для исследования – смывы и мазки из носоглотки, мазки-отпечатки из носовой полости и кровь. Возможно постмортальное исследование аутопсийного материала (кусочки пораженной легочной ткани, соскобы со слизистой оболочки бронхов и трахеи).

     Основные методы диагностики – вирусоскопический, вирусологический, серологический и экспресс-диагностика.

     Вирусоскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом, используют электронный микроскоп, реже – люминесцентный.

     Вирусологический метод. Полученным материалом, обработанным антибиотиками, заражают 9-10 дневные куриные эмбрионы (или реже различные клеточные культуры). Заражение обычно производят в аллантоисную или амниотическую полость. Через 48-72 часа эмбрионы вскрывают, амниотическую жидкость исследуют с помощью цитопатического действия или цветной пробы. Поскольку вирус гриппа может не вызывать видимых изменений в тканях куриных эмбрионов проводятся реакции гемагглютинации (РГА) или гемадсорбции (ГАд) с целью обнаружения вируса. Если вирус не обнаруживается, проводят не менее 3-х “слепых” пассажей (амниотической жидкостью из первой партии эмбрионов заражают новую партию эмбрионов и так не менее 3-х раз).

     Выделенный вирус идентифицируют по антигенной структуре с помощью диагностических иммунных сывороток в РТГА, РН ЦПД, РН ЦП, РТГад. Типовую принадлежность вирусов идентифицируют в РСК; подтип гемагглютинина – в РТГА (вирусы гриппа агглютинируют эритроциты человека и различных животных); подтип нейраминидазы – в реакции ингибирования активности фермента. 

     Серологический метод. С целью серодиагностики гриппа исследуют парные сыворотки крови (первую берут не позднее 5-го дня болезни, вторую – через 10-14 дней после первой). Обе сыворотки испытывают одновременно с помощью РТГА, РСК, РПГА, ИФА. Заболевание подтверждает четырёхкратный рост титра AT при сравнении образцов сыворотки, полученной в острой фазе инфекции и через 2-3 недели в период реконвалесценции.

     Экспресс-диагностика основана на выявлении вирусного антигена с помощью РИФ (прямой и непрямой варианты); разработана тест-система для ИФА. Также можно обнаружить в носовых смывах вирусную РНК с помощью ПЦР.