Лабораторная работа № 6
Тест на загрязнение воды тяжелыми металлами
При наличии микроскопаможно использовать тест на загрязнение |
|||
воды ТМ (тяжелымиметаллами) по движению хлоропластов в клетках |
|||
С |
|
|
|
ряски. В нормеони концентрируются со стороны источника света, |
|||
располагаясьперпендикулярно |
лучам |
света |
(положительный |
фототакс с), апри сильном |
загрязнении |
перемещаются хаотически, |
|
приж маясь к боковым стенкам клеток и располагаясь к источнику
рования 10 мкг/дмкобальт3. Ответные реакциина некоторые ТМ довольно специфичны.
светаребром (отр цательный фототаксис). Пробы должны быть приэтом свеж ми, а растен я живыми.
Для б отест |
|
загрязненных, например сточных, водлучше |
брать ряску одного |
да клона (из аквариума, бассейна). |
|
Чувств тельность ряски на загрязнение ТМ (барий, медь,магний, |
||
железо, |
) |
проявляется уже при концентрации порядка |
Так, в ответ на Cu (0,1…0,25 мг/см3) уже через 4 часа воздействия про сход т рассоед нение листецов из групп и изменение окраски с зеленой на голу ую; при воздействии Zn (0,025 мг/см3) – насыщенная зеленаяокраска меняется на есцветную, зеленой остается только точка
роста; Ba (0,1…0,25 мг/см3) – идет полное рассоединение листецов,отпадают корни, зеленая окраска меняется на молочно-белую;
Co (0,25…0,0025 мг/см3) – наблюдается полное приостановлениероста и |
|
потеря окраски. |
А |
Цель работы: провести тест на загрязнение воды ТМ подвижению |
|
хлоропластов в клетках щитков ряски. |
|
Материалы |
и оборудованиеД:микроскоп световой; стекла |
1.Листецы живых растений инфильтруютИ(пропитывают исследуемой жидкостью) с помощью медицинского шприца и ставят на слабый свет (120 лк).
2.Через 17 час после инфильтрации (утром следующего дня)оторванные листецы помещают в каплю исследуемой жидкостина предметное стекло.
3.Под микроскопом (желательно 400-кратное увеличение) вверхних клетках хлоренхимы рассматривают хлоропласты и делают
зарисовки. |
Для количественного анализа просматривают |
неменее |
10 клеток |
и ведут подсчет хлоропластов в каждой |
группепо |
23
расположению к свету («ребром» и перпендикулярно).
4. Не сдвигая опытный препарат, создают сильное освещение в течение 10 мин, а затем снова зарисовывают и(или) пересчитывают хлоропласты в разных положениях.
5. Определяют визуально либо количественно соотношениечисла хлоропластов, расположенных «ребром» к свету, к их первоначальному количеству и выражают показатель в %. Чем онвыше, тем сильнее загрязнена вода ТМ.
6. Контрольный листец помещают в каплю водопроводнойили дист лл рованной воды, в нем соотношение хлоропластов вразных положен ях (показатель торможения фототаксиса)обычно близко к
нулю. |
|
|
С |
|
|
7. делать выводы. |
|
|
Вопросы для защиты лабораторной работы |
||
«Тест на |
|
воды солями тяжелых металлов» |
загрязнение |
|
|
1. Что такое |
отестирование? Какую информацию можно получить с |
|
бА |
||
помощьюэтогометода?
2. Как ионы тяжелых металлов влияют на каталитическую активность ферментов растений?
3. Как зависит проницаемость клеток растения для молекул органического растворителя от состояния клетки?
4. Как оценить степень загрязненияДводы или почвы тяжелыми металлами с помощью проведенного тестирования?
Лабораторная работа № 7
Определение фермента пероксидазы какИпоказателя загрязнения
окружающей среды
Цель работы: оценить загрязненность окружающей среды по ферменту пероксидазы.
Пероксидаза выполняет две функции: пероксидазную (окисляет вещества с участием пероксида водорода) и оксидазную (катализирует окисление субстратов за счет молекулярного кислорода без участия пероксида водорода). В практике широко используют определение активности пероксидазы для оценки метаболизма ростовых веществ, лигнина и других вторичных продуктов обмена при физиологических и патологических процессах.
Реактивы:
1) ацетатный буфер, 0,1 М раствор с рН 5,4;
24
2) пероксид водорода, 0,03%-ный раствор; 3) бензидин, 0,92 г/л раствор на ацетатном буфере*.
Оборудование:
1) Колбы вместимостью 25 см3;
2) |
пипетки вместимостью 5 см3; |
3) |
центрифуга лабораторная с центрифужными весами; |
С |
|
4) |
ФЭК. |
Материал:листья растений, свежие.
Метод основан на непрерывном измерении светопоглощения бенз д новой с ни, образующейся при окислении бензидина под идейств ем перокс дазы.
Реакц я оп сывается уравнением.
Ход работыбАД
Навеску 100 мг растительного материала помещают в ступку и растирают, прибавляя порциями 10 см3 дистиллированной воды.
Растертую массу переносят в мерную колбу вместимостью 25 см3 и доводят водой до метки. Содержимое колбыИнастаивают 10 мин, затем
сливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 мин при
3000 об/мин.
Для определения активности фермента берут кювету с толщиной слоя 2 см и наливают в нее по 2 см3 водной вытяжки из листьев, ацетатного буфера и раствора бензидина. Ставят кювету в кюветодержатель и устанавливают стрелку прибора на нулевую отметку, затем добавляют 2 см3 раствора пероксида водорода пипеткой с широким носиком (чтобы сильная струя перемешала жидкость в кювете) и одновременно с добавлением пероксида включают секундомер. Раствор в кювете начинает синеть и по мере нарастания интенсивности окраски стрелка прибора отклоняется. Отмечают время от начала приливания раствора пероксида водорода до достижения
25
стрелкой гальванометра отметки 0,250. Повторяют определение трижды и берут среднее значение времени.
Расчет.
Активность фермента рассчитывают по формуле
С |
Х = |
∆tЕ·∙d25∙ 1000 |
, |
|||||
где X – акт |
вность пероксидазы, Е∙с-1∙∙кг0,1-1;∙2 |
|||||||
∆Е – |
зменен е экстинкции, равное 0,250; |
|||||||
и |
|
|
|
|
||||
t – время реакц , с; |
|
|
|
|
|
|
||
d – толщ на слоя кюветы, равная 2; |
||||||||
1000 – коэфф ц ент пересчета граммов в килограммы; |
||||||||
0,1 – навеска, г; |
|
|
|
|
|
|
||
2 – |
объем |
|
|
|
||||
|
про ы, см3. |
|
|
|
|
|
|
|
После сокращен й формула принимает вид |
||||||||
|
|
|
Х = |
15625 |
|
|||
|
|
|
|
t |
|
|||
|
|
А |
||||||
Рассчитайте и сравните активность пероксидазы в исследуемом материале; в выводе отметьте иологическое значение фермента.
1.Как по количеству ферментаДпероксидазы можно оценить степень загрязнения среды, в которой произрасталоИрастение?
2.Какой метод лежит в основе определения пероксидазы?
3.В чем особенности кинетических методов анализа?
4.Как пероксидаза реагирует с фенолами?
Отбор проб газов и атмосферного воздуха
Цель работы: изучить проведение отбора проб газо-воздушных смесей.
Используя учебный и лекционный материал ответьте на следующие вопросы.
26