Вопрос 69

Современная схема репликации E. coli

Модель тромбона

Совмещение – holo-ф-т един, а ДНК разнонаправлена

priA-геликаза для…

ДНК от SSB (геликаза не даёт образоваться шпилькам) – идёт пред ДНК-pol.

Здесь holo может распадаться. Переброс петли – белки прайминга, DNA-T – из 3-х субъед., вход. в состав праймосомы.

В ДНК E.coli:

Как только синтезируется дочерняя цепь, обр. 2-я спираль явл. полуметилированной (мат. метилирована, дочерняя нет.) Метилирование по участку –GA*TC- и метилируется –CTA*G-, аденин по 6-му положению. 10 таких участков на ori – очень много. Вероятность встречи псл. дл. n на участке длинной l равна l/4n.

Полуметилир. ДНК заякоривается на плазмалемме, где метил. идёт на порядки медленнее. Как только мет. дошло до конца, ДНК теряет сродство к мембране. (при этом расхождение ДНК к дочерним клеткам).

Вопрос 70

Репликация ДНК аденовируса человека

В фаге Т10174 работает не РНК-полимераза, а фермент-праймаза dnaG.

Нуждается в белках препрайминга. Праймосома – белки препрайминга и праймаза

dnaG

dnaВ – геликаза (6 субъединиц)

dnaС -6 мол-л

n' – АТФ-за

n – стр. компоненты

Пока dnaG работает, паровоз (праймосома) под ней, когда он отйдёт, и праймаз перестанет работать.

Парово – праймосома, её белки делают петлю, необх. для работы dnaG

Белки идут по матричной цепи 5’-3’, а праймаза ноборот, синтезируя РНК-затравки в организованных с помощью прайминга участках ДНК на раст. ~1000 нукл

Репликация аденовируса не нужд. в затравке.

Вопрос 72

Особенности репликации ядерных ДНК эукариот. Полирепликонность

Особенности репликации ДНК эукариот. Полирепликонность.

Плавление ori достигается: субъед. гиразы сближают несмежные участки ДНК, образуется петля, в ней ведётся суперспирализация.

ДНК закрепляется белками на неск. участ. мембранеы. На каждом отд. участrе работает топоизомераза. Сколько участков, столько и ori.

ДНК-пол. работают медленнее на порядок, размер генома больше на 3 порядка, но время репликации соизмеримо. - Полирепликонность

Репликон – участок м/ду 2-мя ori.

Реплицируются несинхронно.

Вопрос 62-63

Проблема недорепликации 3’концов. Теломераза, старение

Удаление РНК-праймеров после завершения синтеза лин. ДНК и заделывание обр. м/ду фрагм. брешей нуклеотидами ДНК приводят к тому, что дочерние ДНК короче материнской на размер 1-го РНК праймера..

1961, Лимит ХЕФЛИНГА – каждая диф. клетка им. огр. кол-во делений.

1971 – Оловников, гипотеза концевого сечения.

Все эукар. орг. им. на конце теломерные повторы – 6 нукл (человек – TTAGGG), повт 1000-и раз.

Обр. 3’-оверхенги, т.е выступающие концы мат. ДНК. Они узнаются теломеразой – ф-том, сод. sРНК, вып. роль матрицы для наращивания ДНК-повторов. (1985, Блекберн, Грейдер)

Старение происходит, если теломераза вообще не работает. ДНК с каждым раундом укорачивается, и при дост. Крит. длинны наст. апоптоз.

Активность теломеразы: в Кл: эмбриональных – 100%, стволовых – 70, генеративных – 100, раковых – 60-80. Было бы в ствол. 100 – не было бы старения.