Вопрос 63

ДНК-полимераза 3, 3*, holo-ф-т.

К репликации имеет отношение лишь 1 и 3, причём именно 3 является репликазой, 1 – вспомогательная, репаративная. Полимераза 2 – только репарация

Вопрос 64

Схема размножения фага М13 и док-во наличия РНК-затравки в репликации ДНК

ДНК – кольцевая, одноцеп.

мРНК компл. дочерней цепи – идентична исходной. После трнмляции 6 белков, часть из них необходима для репл. 2 дочерней цепи.

Рифампицин - ингибитор бактериальной РНК-полимеразы (на стадии инициации).

Хлорамфеникол - ингибитор трансляции на бактериальных рибосомах.

Если одновременно с заражением E. сoli фагом добавить хлорамфеникол, то блокируются трансляция, репликация II и сборка фагов.

Если подействовать рифампицином, то блокируется не только транскрипция и все следующие процессы, но и репликация I.

Вывод: бактериальная РНК-полимераза участвует в репликации ДНК фага.

Вся фаговая ДНК составляет ~6000 нукл.

Вопрос 65

Модель Катящегося колеса

Репликация 2 ДНК-фага M13

После репл. 1 – 2-х цепоч. ДНК. НА 5´ конец садится реп-белок (геликаза E.coli, кот. не нужен одноцеп. участок ДНК) он отодвигает 5’ конец.

Белок 2-го гена обладает лигазной активностью – сшивка концов полной (+)ДНК, при этом он вновь вносит разрыв в (-)цепь

Вопрос 66

В фаге Т10174 работает не РНК-полимераза, а фермент-праймаза dnaG.

Нуждается в белках препрайминга. Праймосома – белки препрайминга и праймаза

dnaG

dnaВ – геликаза (6 субъединиц)

dnaС -6 мол-л

n' – АТФ-за

n – стр. компоненты

Пока dnaG работает, паровоз (праймосома) под ней, когда он отйдёт, и праймаз перестанет работать.

Парово – праймосома, её белки делают петлю, необх. для работы dnaG

Белки идут по матричной цепи 5’-3’, а праймаза ноборот, синтезируя РНК-затравки в организованных с помощью прайминга участках ДНК на раст. ~1000 нукл

Репликация аденовируса не нужд. в затравке.

Вопрос 67

Проблема денатурации матрицы для репликации ДНК эукариот. SSB. Геликазы

1968 – белок Альберта, 32 гена фага Т4, в стех. кол-вах, покрывает всю ДНК фага (связ. с ней). Высокое сродство к одноцеп. ДНК, обл. кооперативным эффектом – если на какой-то участок одноцеп. ДНК он случайно сел, то вероятность посадки таких же молекул рядом ↑. Отрицательно заряжен, связан с ДНК электростат. (валенки)

Белок фикс. денат. состояние, необходим для удержания ДНК матрицы. Найдены у всех

1978 – Гефтер, ф-т геликаза

У E.coli несколько разных геликаз, одна из них – dnaB. Все геликазы, за исключением rep, работают по 1 принципу: садятся на одноакц. участок и двигаются по двуцеп. ДНК, плявя её (АТФ). 1000 п.н. в сек.Всем геликазам, кроме rep необх. посад. площадка в виде одноцеп. ДНК.

Вопрос 68

Топоизомеразы – ферменты, меняющие число сцеплений одной цепи за другую. релаксазы – уменьшают число сцеплений, геразы – увеличивают.

Гираза делает двуцеп. разрыв с липкими концами, в который протаскивается любой конец ДНК и после этого сшивает разрыв.

3 активности: эндонуклеазная, атфазная, лигазная.

Результат – супервитки.

Могут расплавиться А-Т-богатые участки (ori); ori видоспецифичны.