Вопрос 52

Этапы трансляции у прокариот. Белковые ф-ры трансляции.

Элонгация

Действ. лица: белковые ф-ры ЕFT4, EFTs

EFT4 в коп. с ГТФ. Образует комплекс с любой а-а-тРНК за искл. ф-мет. Как только установка прошла, ГТФ гидролизуется и EFTs обеспечивает отделение ЕFT4.

Далее происходит транспептидация – перенос а/к, оторв. от Р-центра от ТРНК в А центр с обр. пептидной связи с амино-ацил-тРНК в А-центре

Затем – транслокация – прернос пептидил тРНК из А-центра в P центр. Как транспептидация, так и транслокация осущ. благодаря работе Pt центра.

Транслокация осущ. с помощью ещё одного ф-ра EFG в компл. с ГТФ. Гидролиз ГТФ свидтельствует об успешном завершении транслокации.

Теперь деац. тРНК перемещ. из P-центра в Е-центр, в Р-центр пришла пептидил тРНК, в А-центр – очередна а-а-тРНК

Терминация

ф-ты: RF1, RF2, RF3

УАА - : RF1, RF2, УАГ - RF1, УГА - RF2

Когда напротив А-центра 1 из 3 терм. кодонов, непоср. в Априходит 1 из 2 терм. ф-ров.

В Pt –центре отщепляется полипептид, в Р-центре – тупо тРНКи тупо переосит в А-центр, где отс. аатРНК (там – один из ф-ров).

Полипептид отваливается от рибосомы.

RF3 обесп. отделение RF1 и RF2 и при этом рибосома диссоциирует. Малая с/ч может сканировать мРНК до новой ШД

Вопрос 53

Регуляция трансляции на примере фага MS2

Вопрос 54

Образование рРНК и белков рибосом у E.coli

Ежеминутно в E.сoli образуется около 500 рибосом.

Имеется 7 оперонов, в которых закодированы rРНК (всего 3 разных rРНК х 7оперонов = 21 ген). В формировании рибосом участвуют 52 различных белка, а значит 52 гена, их кодирующих. В итоге,

73 гена должны работать координированно, чтобы не было избытка белков или rРНК.

Вначале образуется про-rРНК, которая метилируется и процессируется (т.е. "созревает").

Количество rРНК регулируется количеством рибосомных оперонов, скоростью их транскрипции и работой ферментов метилаз и эндонуклеаз.

Имеется 7 разных оперонов, в которых закодированы рибосомные белки. Регуляция каждого из них осуществляется отдельно.

Вопрос 56

Принципы репликации ДНК

1. Комплементарность

2. Антипараллельность

3. Униполярность

4. Потребность в затравке

5. Прерывистость

6. Полуконсервативность

Синтез каждой дочерней цепи ДНК идет комплементарно и антипараллельно матричной цепи и всегда в направлении 5' 3'.

Вопрос 57

Доказательство полуконсервативного характера репликации

Для выяснения вопроса о характере расхождения цепей по дочерним молекулам Мэтт Мезельсон и Фрэнк Сталь в 1958г. разработали метод равновесного центрифугирования в градиенте плотности CsCl. .

ДНК разделяется не по молекулярным весам, а по удельной плотности.

E. сoli выращивали на протяжении нескольких поколений на среде, содержащей тяжелый изотоп азота (N15), для того, чтобы вся ДНК была "тяжелой". Перед очередным раундом деления клетки синхронизировали. При этом в среде заменяли N15 на легкий изотоп N14 с тем, чтобы вновь синтезированные цепи были "легкими". После репликации ДНК выделяли и центрифугировали в градиенте плотности CsCl. Полуконсервативность означает, что каждая дочерняя ДНК состоит из одной матричной цепи и одной вновь синтезированной.

Равное распределение "тяжелых" и "легких" цепей между всеми молекулами исключало возможность консервативного способа, согласно которому одна дочерняя клетка получает материнскую ДНК, а другая - вновь синтезированную, обе цепи которой являются новыми.

Клетки второго поколения содержали как полностью "легкие" молекулы, так и "гибридные", состоящие из одной "легкой" и одной "тяжелой" цепи, аналогичные молекулам первого поколения. Этот факт исключал возможность дисперсного механизма, согластно которому куски материнской ДНК случайным образом распределяются между дочерними молекулами.