1. Тема: Пути образования и обезвреживания аммиака, синтез мочевины. Методы определения мочевины.

2. Цель занятия: Студенты должны сформировать знания о закономерностях образования и обезвреживания мочевины тканях, о физиологических эффектах в организм мочевины об определении показателей белкового обмена в животном организме.

3. Задачи обучения: Сформировать представление о пути образования аммиака, обезвреживание аммиака. Синтез мочевины, методы определения мочевины.

4. Основные вопросы темы:

1. Дезаминирование аминокислот. Понятие, виды.

2. Непрямое дезаминирование аминокислот.

3. Судьба аммиака (перечислить).

4. Амидирование, дезамидирование, значение этого процесса.

5. Пути образования и обезвреживания аммиака.

6. Синтез мочевины, клиническое значение, определение мочевины.

7. Судьба безозотистого остатка аминокислот.

8. Глюкогенные и кетогенные аминокислоты.

9. Особенности превращения отдельных аминокислот.

10. Роль печени в обмене белков.

11. Конечные продукты обмена белков реакции в результате которых они образуются.

5. Методы обучения и преподавания: малые группы, решение задач, работа в парах.

6. Литература

На русском языке

Основная:

1.Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

2.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.- М.,2005, 2007.

3.Биохимия, под ред. Чл.-корр. РАН, проф. Е.С. Северина.- М.,2005, 2007.

4. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998, 2008

Дополнительная:

1.Тапбергенов С.О, Тапбергенов Т.С. Медицинская и клиническая биохимия.-Павлодар,2004.

2.Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. 2003

3.Кольман Я., Рем К-Г. Наглядная биохимия.- М.: Мир, 2004.

4.Биохимия. Тесты и задачи: Учебное пособие для студентов медвузов , под ред. Чл.-корр. РАН, проф. Е.С. Северина.- М.,2005.

5.Биохимия в вопросах и ответах. Под. Ред. чл.-корр. НАН РК, д.х.н.,

проф. С.М.Адекенова.-Астана, 2003.

На казахском языке

Основная:

1.Сейтембетов Т.С., Төлеуов Б.И., Сейтембетова А.Ж.. Биологиялық химия.-Қарағанды.-2007.

2. Тапбергенов С.О. Медициналық биохимия.-Павлодар.-2008.

2.Сеитов З.С., Биологиялык химия, 2007

3.Сейтембетова А.Ж.., Лиходий С.С., Биологиялық химия, 1994.

Дополнительная:

1.Биохимия сұрақтары мен жауаптары. ҚР ҰҒА корр., проф. С.М. Адекеновтің ред. басшылығымен.-Астана,2003.

На английском языке

1. Lehninger « Principles of biochemistry», Fourth Edition, David L.Nelson, Michael M. Cox, 2005.

2. Murray R.K., Granner D.K., Mayes P.A., Rodwell V.W., Harpers Biochemistry.1988.

3. Saini A.S., Kaur J., Textbook of biochemistry.- New Delhi,1995.

7. Контроль (вопросы, тесты, задачи и пр.)

Упражнения для самоконтроля.

1. Какие аминокислоты подвергаются окислительному дезаминированию: а) серин; б) тирозин; в) гистидин; д) глютаминовая кислота; е) метонин?

2. Напишите основные реакции обезвреживания аммиака

3. Допишите реакцию, укажите фермент, катализирующий данный процесс:

карбомоилфосфат + ? ? + Н₃РО₄

цитруллин + ? аргининсукцинат

4. Напишите реакцию взаимодействия глутаминовой кислоты с аммиаком. Где она протекает? Как она называется? Какое значение имеет для организма? Обратима ли она?

5. Назовите реакции, протекающие в печени при обмене белков.

6. Напишите суммарное уравнение синтеза мочевины

7. В виде каких соединений выводится аммиак из организма?

8. Перечислите аминокислоты, участвующие в синтезе мочевины.

Ситуационные задачи

1. Больной находится на диете с низким содержанием белка. При исследовании сыворотки крови обнаружено количество мочевины равное 11, 33 миллимоль/л. Какое заболевание можно предполагать у больного?

2. Азот мочевины сыворотки крови составляет 89% всего остаточного азота, равного 0,75г/л. Ваш предполагаемый диагноз?

Лабораторная работа

Методическое указание 13

Количественное определение содержания мочевины в

сыворотке крови и в моче с помощью цветной реакции с диацетилмонооксимом

Принцип. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде окрашенные соединения, интенсивность окраски которых пропорциональна содержанию мочевины в биологической жидкости.

Ход определения.

1. Получение безбелкового фильтрата. В пробирку наливают 0,8мл дистиллированной воды, 0,2мл сыворотки крови или разведенной 1: 25, 1:50 мочи и 1мл 10% раствора ТХУ, перемешивают встряхиванием и через 15-20 мин. фильтруют.

2. Цветная реакция. В три пробирки вносят в указанном порядке следующие реактивы.

Пробирки Реактивы	1 опыт	2 контроль	3 стандарт
Безбелковый фильтрат	0,1мл	—	—
Вода дистиллированная	—	0,1мл	—
Стандартный раствор мочевины (100мг%)х	—	—	0,1мл
Цветной реактивхх	2мл	2мл	2мл

Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 10 мин. (точно!), затем охлаждают 2-3мин. под водопроводной водой и колориметрируют на ФЭКе против контрольной пробы в кювете с рабочей длиной 1см при зеленом светофильтре.

Расчет

1. При определении содержания мочевины в сыворотке крови

Ех х 100

Х = мг%

Ест

Х - концентрация мочевины в мг% в сыворотке крови

Ех - экстинкция опытной пробы

Ест - экстинкция стандартной пробы

100 - концентрация мочевины стандартного раствора в мг%

В норме в сыворотке крови содержится 15-50мг% мочевины.

2. При определении содержания мочевины в суточном количестве мочи

Сст х Ех х а х К

Х = г/сутки

Ест х в х 1000

Х - концентрация мочевины в суточном количестве мочи в г

Ех - экстинкция опытной пробы

Ест - экстинкция стандартной пробы

Сст - количество мочевины в стандартной пробе-0,1мг

а - суточное количество мочи в мл

в - количество мочи (мл), взятое для анализа

К - коээфициент разведения мочи

1000 - коэффициент пересчета из мг в г

В норме в суточном объеме мочи содержится 20-35г мочевины

х)-стандартный раствор мочевины: 100мг мочевины растворяют в 0,2% растворе бензойной кислоты (0,2г кристаллической бензойной кислоты растворяют в 100мл дистиллированной воды при помешивании и нарревании на водяной бане)

хх)-цветной реактив: К 30мл рабочего раствора хлорного железа добавляют 20мл дистиллированной воды, 1мл 2,5% раствора диацетимонооксима и 0,25мл 0,25% тиосемикарбазида. Готовить перед употреблением.

Рабочий раствор хлорного железа готовится из основного: 1мл основного раствора доводят до 100мл водой, добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1мл 85% ортофосфорной кислоты

Приготовление основного раствора хлорного железа: 5г хлорного железа растворяют в 100мл дистиллированной воды и подкисляют 1мл концентрированной серной кислоты.

Определения содержания мочевины уреазным методом по

конечной точке в сыворотке крови и моче.

Мочевина КТ “ДДС”

Принцип метода

Уреаза катализирует гидролиз мочевины с образованием аммиака и углекислого газа. Нитропруссид в щелочной среде катализирует реакцию взаимодействия аммиака с салицилатом и гипохлоритом натрия с образованием окрашенного соединения, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации мочевины и измеряется фотометрически при длинне волны 540 нм.

Подготовка к анализу

Приготовление рабочего реагента: в коническую колбу вместимостью 200 мл внести 100 мл реагента 1, добавить 0,1 мл реагента 3 и перемешать. Пустой флакон с реагентом 3 промять 3-4 раза приготовленным раствором рабочего реагента. После промывки флакона все порции объединить и тщательно перемешать.

При необходимости приготовления рабочего реагента в меньшем объеме следует смешать нужные объемы реагентов 1 и 3 в соотношении 100:1.

Рабочий реагент можно хранить в темном месте при температуре +2-8С не более двух недель или при комнатной температуре (+18-25С) не более двух суток.

Реагенты 2 и 4 готовы к использованию.