49. Реакция связывания комплемента (рск). Механизм, компоненты, постановка и применение.

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК) - это сложная серологическая реакция, в которой участвуют 2 системы антиген-антитело и комплемент:

1-ая система – специфическая,

2-ая - гемолитическая система.

РСК используется чаще для серодиагностики (обнаружения антител к возбудителю заболевания в сыворотке крови больного) гонореи, сифилиса, коклюша, сыпного тифа и др. риккетсиозов и многих вирусных заболеваний. РСК также используется для серотипирования.

Компоненты РСК: Специфическая система Антиген – экстракт микроорганизмов или других тканей, реже взвесь микробов. Антитело – сыворотка больного (при серодиагностике), реже иммунная сыворотка (при серотипировании)

Гемолитическая система:

Антиген – эритроциты барана. Антитело – гемолитическая сыворотка, содержащая антитела к эритроцитам барана.5. Комплемент – сыворотка морских свинок жидкая или лиофильно высушенная. Изотонический раствор NaCl

Схема РСК с сывороткой больного

Схема РСК с сывороткой здорового

50. Реакция гемагглютинации (рга) и реакция торможения гемагглютинации (ртга), механизм, компонентыи применение реакций.

Постановка реакция гемагглютинации (РГА) для обнаружении вируса гриппа в аллантоисной жидкости.При помощи РГА ориентировочно определяется наличие вируса гриппа в аллантоисной жидкости. Реакция основана на способности вирусов агглютинировать эритроциты. Вирусы гриппа А хорошо агглютинируют эритроциты курицы, морской свинки, человека; вирусы гриппа В – эритроциты курицы.

Постановка РГА на стекле.На обезжиренное предметное стекло наносят каплю аллантоисной жидкости и каплю 5% суспензии эритроцитов курицы (или морской свинки). Учет результатов проводится по наличию агглютинации. Агглютинация наступает через 2-3 минуты.

Постановка РГА в пробирках.Аллантоисную жидкость разводят в 10 раз физиологическим раствором, готовят двойные разведения (от 1:10 до 1:160) и разливают в пробирки по 0,5 мл (для контроля берут 0,5 мл такой же жидкости незараженного эмбриона). Затем во все пробирки добавляют по 0,5 мл 1% суспензии отмытых куриных эритроцитов и выдерживают при комнатной температуре. Результат реакции учитывают через 40 минут после оседания эритроцитов.

Учет результатов проводится по наличию в выраженности агглютинации. Выраженность агглютинации оценивается по 4-х крестной системе: ++++ - выраженная гемагглютинация (тонкая пленка из склеившихся эритроцитов на дне пробирки, имеющая вид зонтика); +++ - наличие просветов в пленке; ++ - наличие пленки с фестончатыми краями из склеившихся эритроцитов; + - хлопьевидный осадок эритроцитов, окруженный зоной комочков агглютинированных эритроцитов; - - резкоочерченный осадок эритроцитов, неотличимый от контроля (отсутствие гемагглютинации). Реакция считается положительной, если наблюдается выраженная гемагглютинация в опытных пробирках при ее отсутствии в контрольных пpобирках, что свидетельствует о наличии вируса в исследуемой жидкости. Титром вируса считается наибольшее его разведение, при котором наблюдается агглютинация эритроцитов не менее чем на 1 АЕ (1 АЕ - одна агглютинирующая единица соответствует гемагглютинации на ++).

2.Постановка реакции торможения гемагглютинации (РТГА).При помощи РТГА определяют подтип вируса А с антигенами HlNl (подтип А (подтип А2), Ю№ (подтип A3) с набором гомологичных типоспецифических сьп Метод основан на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать которые в результате этого процесса теряют свойства агглютинировать эритроциты.

Готовят разведения типоспецифических сывороток (от 1:10 до титра сыворотк! ливают в пробирки по 0,2 мл. Затем во все пробирки помешают по 0.2 гемагппотинируюшие дозы вируса и выдерживают при комнатной температуре 60 ми: прибавляют по 0,4 мл 1% суспензии эритроцитов курицы и снова выдерживают при koi \c;»iiiepaType 30-60 мин. Параллельно ставят контрольные пробы (контроль сыворотки, к вируса и контроль эритроцитов).

Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинадии (см. учет реакщ «+» - реакция - отсутствие гемзгглютккации. Если гемштлютшшрующая снос исследуемого вируса нейтрализуется типоспецифической сьюороткой в разведения) 1:160 (до его титра), то исследуемый вирус относится к данному подтипу (Al, A2, A3).

3.Риноцитоскопическое исследование (является ориентировочным экспресс-лабораторной диагностики гриппа). С поверхности нижней носовой раковины больного: мазки-отпечатки (с помощью узких стекол со шлифованным краем или пластинок из гласа) . Препараты окрашивают смесью основного фуксина и метиленового синего,плазме цилиндрического эпителия, а также в цитоплазме дегенерированных макрофаго коцитах располагаются ширококонтурированные включения, окрашенные в красный цвет, данный метод позволяет дифференцировать грипп от аденовирусных инфекций, при кото блюдается деструкция клеток, вакуолизация ядер и образование внутриядерных включений.