21. Методика заполнения насадочной колонки для гжх.
Основной узел хроматографа колонка, в которой непосредственно происходит разделение анализируемой пробы на компоненты. Основная задача колонки состоит в том, чтобы разделить многокомпонентную анализируемую смесь на серию последовательно выходящих из колонки смесей.
З
аполнение
колонки. Предварительно
промытую органическим растворителем
и тщательно высушенную колонку (U-
или W-образную
металлическую или стеклянную) заполняют
приготовленным сорбентом. При этом
насыпают небольшими порциями через
воронку, постукивая по трубке вакуумным
шлангом. Можно применить специальный
вибратор. Он обеспечивает быстрое и
равномерное наполнение колонки сорбентом
и повышает ее эффективность. Колонка
считается заполненной, если в течение
5 мин «постукивания» уровень засыпанного
сорбента не изменяется.
Заполнение спиральной колонки проводится с использованием вакуумного насоса. Один из концов промытой органическими растворителями и высушенной колонки закрывают тампоном из шнурового асбеста, стекловолокна или тонкой металлической сетки и подключают к водоструйному насосу. Колонку закрепляют в штативе таким образом, чтобы спиральные витки располагались горизонтально. К открытому концу колонки прикрепляют воронку для засыпания насадки. Создав разрежение, начинают осторожно присыпать отсеянную от пыли и комков насадку, одновременно постукивая по колонке деревянной палочкойдля достижения более равномерного заполнения. О заполненности колонки судят по прекращению убыли насадки в воронке. Сняв воронку, закрывают открытый конец колонки тампоном, как описано выше. Свежезаполненная колонка нуждается в тренировке.
Сорбент перед заполнением взвешивают, оставшийся после заполнения колонки также взвешивают. По разности определяют точное количество сорбента, засыпанное в колонку. Количество сорбента в колонке можно рассчитать и как разность весов колонки с сорбентом и колонки пустой (перед заполнением). Открытые концы колонок закрывают стекловатой или пробками из металлической сетки.
22. Основные характеристики подвижной фазы.
Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу.Подвижная фаза (газ-носитель или жидкость) непрерывно пропускается через неподвижную фазу (колонка, сорбент и.т.д.). В этот поток дозирующим устройством вводится импульсно анализируемая смесь, которая должна быть газообразной или испаряться в дозаторе в случае газовой хроматографии, или растворяться в подвижной фазе в случае жидкостной.
При выборе газа-носителя следует учитывать, что природа газа-носителя оказывает влияние как на характеристики разделения компонентов анализируемой смеси в хроматографической колонке, так и на параметры работы детектора. В этой связи не всегда оптимальный для данного детектора газ-носитель является наилучшим с точки зрения обеспечения высокоэффективного разделения веществ анализируемой смеси, и наоборот.
Основные требования, предъявляемые к газу-носителю:
- газ-носитель должен способствовать обеспечению оптимального разделения компонентов смеси;
- газ-носитель должен обеспечить максимально высокую чувствительность детектора;
- газ-носитель должен характеризоваться химической инертностью по отношению к компонентам разделяемой смеси, наполнителю хроматографической колонки, материалу, из которого изготовлена колонка и подводящие газ магистрали;
- газ-носитель должен иметь достаточно высокую степень чистоты (99,9 - 99,99 % основного компонента);
- газ-носитель должен существенно хуже удерживаться неподвижной фазой по сравнению с любым из разделяемых компонентов, поскольку только в этом случае выполняются условия элюентного анализа;
- газ-носитель должен иметь небольшую вязкость для поддержания минимального перепада давления в колонке, минимального значения разности давлений газа-носителя на входе в колонку и на выходе из неё;
- газ-носитель должен обеспечивать оптимальное значение коэффициентов диффузии разделяемых компонентов, способствующее минимальному размыванию полос;
- газ-носитель должен быть взрывобезопасен;
- газ-носитель должен быть достаточно дёшев.
В практике газовой хроматографии в качестве газа-носителя чаще всего используются индивидуальные газы, газообразные соединения и смеси газообразных соединений: азот, водород, гелий, аргон, углекислый газ, воздух.
Требования к степени чистоты газа-носителя определяют следующие факторы:
- требования применяемой системы детектирования;
- природа разделяемых компонентов;
- природа используемой неподвижной фазы;
- температурный режим процесса разделения;
- необходимая точность получения воспроизводимых величин параметров удерживания.
Основными примесями, мешающими выполнению газохроматографических разделений, являются вода, кислород, органические соединения.
Обычным способом очистки газа-носителя от названных примесей является пропускание его через осушительную колонку, заполненную силикагелем, и колонки, заполненные молекулярными ситами и активированным углём.
Иногда для подавления повышенной адсорбционной активности носителя используют добавки паров воды к газу-носителю.