На дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина) учитывают подозрительные колонии, характерные для сальмонелл. В случае отсутствия роста колоний, типичных для сальмонелл на этих средах, через 16 ч.

производят пересев со среды обогащения на одну из элективных сред.

Пересевы со сред обогащения целесообразно производить на среду Плоскирева, так как число случаев выделения сальмонелл на этой среде наибольшее. Эта среда ингибирует рост вульгарного протея, или он вырастает на ней в О-форме.

При обнаружении на среде Эндо или Левина подозрительных на сальмонелл колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму, исследуют подвижность микробов. Одновременно с микроскопией ставят реакцию агглютинации на предметном стекле с поливалентной агглютинирующей сальмонеллсзной сывороткой пяти основных групп (B1, C 1, С 2, D 1, E 1). В ветеринарной практике чаще всего встречаются бактерии этих групп. Отрицательная реакция с поливалентной сывороткой указывают на то, что испытуемая культура не принадлежит к группам В 1, С 1, С 2, D 1, E 1. Если испытуемая культура дает положительную агглютинацию с поливалентной сывороткой, то это позволяет отнести ее к роду Salmonella одной из пяти групп. Такую культуру окончательно идентифицируют в РА с монорецепторными агглютинирующими сальмонеллезными О- и Н- сыворотками, устанавливая в ней наличие не всех присущих ей антигенов, а лишь основных, имеющих значение для дифференциации.

Сначала культуру испытывают в реакции агглютинации с одной из О- сывороток. Выбирают сыворотку, исходя из вида животного, от которого выделена испытуемая культура, серотипа сальмонелл, наиболее часто встречающегося у данного вида животных. При отрицательной реакции с первоначально взятой О-сывороткой культуру испытывают в РА с остальными четырьмя групповыми О-сыворотками и на основе положительной реакции агглютинации относят культуру к одной из серологических групп.

Затем культуру испытывают в РА ,с Н-сыворотками первой и второй фазы. В выборе сывороток для реакции исходят из антигенной структуры сальмонелл той группы, к которой отнесена определенная культура, с учетом вида животного, от которого она выделена. При положительной РА с определенными О- и Н-сыворотками испытуемую культуру относят к одному из серотипов.

При идентификации сальмонелл по антигенной структуре иногда возникает трудность в определении Н-антигеиа или одной из его фаз, что может быть обусловлено угнетением или утратой Н-антигена (потеря подвижности) либо преобладанием какой-либо одной фазы.

Для восстановления агглютинабильности и выявления специфической фазы Н-антигена можно использовать метод роения в чашках по Свену Гарду. Принцип этого феномена основан на том, что при добавлении к агару гомологичной Н-сыворотки подавляется подвижность бактерий, зависящая от этой фазы. Фаза, не подвергающаяся влиянию сыворотки, разрастается и может быть выделена из краевой части колонии.

На предметное стекло из ампулы наносят каплю неразведенной сыворотки. Затем платиновой петлей берут испытуемую 20-часовую агаровую культуру и тщательно растирают ее в капле сыворотки.

При положительной реакции (через 1—2 мин.) образуется агглютинат, который можно наблюдать в виде плотных комочков, зернышек (О-агглютинация) или крупных, рыхлых, легко разбивающихся хлопьев (Н-агглютинация). С образованием агглютината жидкость становится прозрачной. При отрицательной реакции культура распределяется в капле в виде гомогенной взвеси.

Если выделенная культура типична по морфологии (грамотрицательные подвижные палочки), имеет характерный рост па элективной среде, дает положительную реакцию агглютинации, то ее относят к роду Salmonella.

В случае отрицательной реакции агглютинации, но при характерном росте на элективной среде и соответствующих морфологических признаках сальмонелл производят высев из подозрительных колоний на короткий пестрый ряд, состоящий из углеводных сред с лактозой, сахарозой, глюкозой, маннитом, бульона Хоттингера (для определения индолообразоваиия) и скошенного МПА. Для полной типизации выделенной культуры делают посев на развернутый пестрый ряд, включающий глицеринофуксиновый бульон Штерна, среду с рамнозой (по Биттеру), лакмусовое молоко, углеводные среды с арабииозой, салицином, дульцитом и пр.

Если по ферментативным свойствам культура принадлежит к роду Salmonella, а реакция агглютинации отрицательна, то микроб относят к неагглютинабильным штаммам сальмонелл. Для уточнения вида выделенного штамма сальмонелл можно поставить биологическую пробу.

Биологическую пробу проводят обычно на белых мышах путем введения культуры peros. За животными наблюдают в течение 10 — 12 сут. Культура патогенна, если зараженные мыши погибают. В этом случае производят высевы из внутренних органов животных на элективную среду.

При нетипичности выделенной культуры по ферментативным свойствам (отклонения в ферментации тех или иных углеводов и спиртов), но избирательно агглютинирующей монорецепторные сыворотки, ее относят к бактериям рода Salmonella.

Если по ферментативным свойствам культура нетипична и агглютинируется несколькими монорецепторными сыворотками разных серологических групп (явление параагглютинации), то культуру не относят к роду Salmonella.

При невозможности полной типизации выделенную культуру сальмонелл направляют в соответствующий научно-исследовательский институт.

Для идентификации сальмонеллезных культур предлагается использовать О-фаготест — определение фагочувствительности сальмонелл к О-бактериофагу. О-фаготест позволяет дифференцировать сальмонелл и непатогенных энтеробактерий: цитробактер, аэробактер, протеус и др.

Для испытания культур на чувствительность к О-бактериофагу на пластинке хорошо подсушенного мясопептонного агара (рН 7,2— 7,4) стерильной пробиркой с ровным краем делают 5—6 насечек. На каждую насечку наносят тонкой пастеровской пипеткой по 2 капли 4- или 18-часовой бульонной культуры испытуемого штамма. После подсыхания культуры наносят каплю О-бактериофага, на другую в качестве контроля наносят каплю бульона (фаг наносят в 10- или 100-кратном разведении в зависимости от указанного на этикетке). Чашки помещают в термостат при 37°С на 18—20 ч. При положительном результате на месте нанесения фага видна четко очерченная зона лизиса. При отрицательной реакции лизис культуры отсутствует. Контроль также отрицательный: отмечен рост культуры микроорганизма.

Сущность метода заключается в изучении морфологических, культуральных, ферментативных свойств этих бактерий.

Наличие на средах в чашках Петри вуалеобразного налета (Н- форма), при микроскопии которого обнаруживают полиморфные грамотрицательные подвижные палочки, указывает на присутствие вульгарного протея. Для подтверждения наличия протея (Н-форма) производят посев в конденсационную воду свежескошенного агара (способ Шукевича). Присутствие изолированных колоний средней величины, нежных, полупрозрачных, с розоватым центром, свидетельствует о наличии нероящихся О-форм протея. При микроскопии этих колоний обнаруживают грамотрицательные неподвижные палочки. Для подтверждения наличия О-форм протеуса производят посев на агар Плоскирева. О-форма протеуса образует на этой среде прозрачные колонии с характерным запахом. Среда вокруг колоний приобретает желтый цвет в результате ее подщелачивания. Старые колонии нередко мутнеют и принимают белую окраску.

Сущность выявления анаэробов заключается в определении их морфологии, способности расти на питательных средах в отсутствие кислорода воздуха и установлении патогенное заражением лабораторных животных.

Удовлетворительные анаэробные условия создаются в жидких питательных средах, в которых используют печень и мясо в качестве восстановления и источника питания.

Бактериологическое исследование на присутствие возбудителей анаэробных инфекций проводят при подозрении на следующие заболевания: ботулизм, энтеротоксемия овец, дизентерия ягнят, некробактериоз, столбняк, эмфизематозный карбункул (эмкар), злокачественный отек и брадзот овец.

В зависимости от подозреваемого заболевания отбор проб в лабораторию может быть различен. Так, для исследования направляют: при ботулизме — селезенку, кусочек печени, головной мозг и содержимое желудка; при энтеротоксемии овец и дизентерии ягнят — пораженную ; почку и содержимое кишечника; при некробактериозе — некротические фокусы паренхиматозных органов; при столбняке — кусочки тканей из глубоких слоев пораженных участков, гной (при наличии) и раневой секрет; при эмкаре и злокачественном отеке — кусочки пораженных мышц, лимфатические узлы, селезенку, кусочек печени и отечные ткани; при брадзоте овец — инфильтрированные ткани, подкожной клетчатки, кровь из сердца, слизистые оболочки сычуга и тонкого отдела кишечника. Материал заворачивают в целлофан или пергаментную бумагу, а жидкость (кровь, содержимое желудка и кишечника) помещают во флаконы, плотно закрывают резиновыми пробками и заливают сургучом. Кровь разрешается запаивать в пипетки.

Диагноз на анаэробные инфекции ставят на основании бактериоскопии, посева материала на питательные среды и биопробы на лабораторных животных.

Канаэробам, представляющим большую опасность для людей

иживотных, относят Cl. botulinum и Сl. реrfringers.

Cl. botulinum — слабо подвижная палочка длиной 4—8 мкм и шириной 0,6—0,8 мкм, по Граму окрашивается положительно. Спора обычно располагается на конце палочки, в связи с чем споровые формы микроба имеют вид теннисной ракетки или короткой свечи с пламенем. Вегетативные формы Cl. botulinum инактивируются при 80°С течение 30 мин., а споры, не погибают при кипячении даже в течение 4—5 ч. Cl. botulinum относят к группе сапрофитных почвенных микробов, широко расространенных в природе. Различают шесть серотипов этого возбудителя (А, В, С, Е, D, F), которые обладают различной патогенностью по отношению к животным и человеку. Последние заболевают ботулизмом только при проникновении в их организм токсинов, накопившихся в продуктах и кормах.