В две пробирки с МПА, содержащими 0,5 и 0,05 ед. пенициллина, и в контрольную пробирку без пенициллина (контроль I) вносят по 0,25 мл испытуемых 3-часовых бульонных культур. Культуры почвенных бацилл, засеянные на МПА и МПА с пенициллином, служат контролем II. Посевы помещают в термостат при 37°С. Через 3 ч. из конденсационной жидкости берут материал и готовят мазки, которые фиксируют в спирте — эфире и окрашивают метиленовым синим, разведенным фуксином, или по Граму.

При положительной реакции теста «жемчужное ожерелье» бациллы сибирской язвы, засеянные на МПА с пенициллином, приобретают шарообразную форму, а цепочки их имеют вид ожерелья. Споровые сапрофитные аэробы (контроль) имеют обычную форму палочек.

Для постановки этого теста применяют фаг «Гамма МВА». Исследуемую культуру высевают в 3 пробирки на скошенный МПА и выдерживают в термостате 20 мин при 37°С. Пробирки ставят вертикально в штатив. В 2 пробирки вносят по капле неразведенный фаг, третья пробирка является контролем (без фага). Действие фага устанавливают через 6—8 ч. В контрольной пробирке по всей поверхности агара наблюдается обычный рост культуры. В пробирках с фагом по ходу стекания капли на поверхности агара образуется прозрачная дорожка лизиса с бордюром роста культуры по бокам дорожки. Наиболее четко явление лизиса наблюдается через 16—18 ч. Этот метод получил название способа «стекающей капли».

Испытуемую культуру засевают на среду ГКИ и помещают в термостат при 37°С. Через 30—120 мин наблюдается образование капсул у отдельных сибиреязвенных палочек, а через 16—18 ч. — у большинства.

При хронических сибиреязвенных процессах, сопровождающихся некрозом ткани, обнаруживают лишь слабоокрашенные тени, напоминающие сибиреязвенные бациллы.

Свертываемость желтка куриного яйца определяют следующим образом. Исследуемую культуру высевают в пробирку со средой Дрожжевкиной. Посевы помещают в термостат при 37°С и выдерживают от 8 до 24 ч. За это время сибиреязвенная палочка вызовет коагуляцию желтка куриного яйца. Большинство же спорообразующих аэробов коагулируют желток уже через 6—8 ч.

Ее определяют путем засева культуры на чашки с кровяным агаром или на МПБ с кровью. Посевы помещают в термостат при 37оС на 20—24 ч.

Наличие в чашках с МПА прозрачных колоний обусловливает необходимость проведения исследований на присутствие в мясе возбудителей рожи свиней, листериоза и пастереллеза.

Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму. Микробы исследуют на подвижность и делают посев на МПА, МПБ, МПЖ, молоко, полужидкие углеводные среды с индикатором ВР, на агар с 4% пептона и 0,25% уксуснокислого свинца.

Листерии и рожистые палочки дифференцируют на основании морфологических, культуральных и ферментативных свойств. Иногда ставят биопробу.

Если в мазках, приготовленных из мелких прозрачных колоний, обнаруживают коккообразные грамотрицательные палочки, расположенные в виде диплококка, или цепочки из коротких палочек, то исследование проводят на пастереллез. Испытуемую культуру вводят внутривенно кролику, внутрибрюшинно морской свинке или белой мыши. При наличии возбудителя животные обычно погибают через 24— 48 ч. Из органов павших животных готовят мазки-отпечатки, окрашивают их краской Муромцева в течение 30 с и микроскопируют. Диагностическое значение при этом имеет обнаружение в мазках би полярно окрашенных овоидных палочек.

Существует метод ускоренной идентификации возбудителей рожи свиней, листериоза, сальмонеллеза с помощью флюоресцирующих (люминесцирующих)" антител. Сущность метода заключается в определении способности антител иммунных сывороток при соединении через карбомидные группы со специальными красителями (флюорохромами) вступать в специфическую связь с соответствующими антигенами. Образующийся при этом комплекс антиген—антитело флюоресцирует, и его легко можно обнаружить при люминесцентной микроскопии. Применение метода люминесцирующих сывороток для идентификации выделенной культуры микробов ускоряет исследование, так как исключает в ряде случаев необходимость определения культуральных, ферментативных, антигенных и других свойств микроорганизмов.

Наличие на чашках с МПА мелких прозрачных или слегка мутноватых колоний, образующих иногда различные пигменты, дает основание предположить присутствие возбудителей кокковых инфекций (диплококкоз, стафилококкоз, стрептококкоз).

Дифференциальный диагноз ставят на основании микроскопического исследования (грамположительные, неподвижные, неспорообразующие круглые клетки, располагающиеся одиночно, цепочками, гроздями, в виде ланцетовидных диплококков), а также определения характера роста на питательных средах. На МПБ стафилококки и диплококки дают равномерное помутнение, на дно пробирки выпадает осадок. При росте стрептококков в МПБ с 2% глюкозы бульон остается прозрачным, а на дно пробирки выпадает осадок. Патогенность стафилококков определяют реакцией коагулирования плазмы крови. Для этой цели берут 2 пробирки с плазмой крови кроликов. В одну из них бактериологической петлей вносят суточную агаровую культуру испытуемого стафилококка и тщательно перемешивают. Другая пробирка является контрольной. Пробирки помещают в термостат при 37°С. Результаты реакции учитывают через 2—4 и 24 ч. Штаммы стафилококка, продуцирующие фермент плазмокоагулазу, свертывают плазму, вследствие чего она превращается в студнеобразную массу. Положительная реакция указывает на наличие в мясе патогенных стафилококков.