Практическая работа № 7 (6 ч) Санитарно-микробиологическое исследование воды и воздуха

Цель работы: Санитарно-микробиологическое исследование воды различного качества и воздуха открытых пространств и закрытых помещений.

Оборудование и материалы: образцы воды, расплавленные среды МПА и КАА в колбах, те же застывшие среды в чашках Петри для проведения поверхностного посева, пипетки Мора для глубинного и поверхностного посевов, шпатели Дригальского.

Санитарно-микробиологический контроль воды и воздуха включает обязательное выявление общей микробной загрязненности, установление коли-титра кишечной палочки (рассматривается в рамках методических указаний к лабораторно-практическим занятиям, ч. II) и обнаружение патогенных микроорганизмов.

Исследование водопроводной воды:

Воду из водопровода спускают в течение 10…15 мин, после чего водопроводный кран обжигают в пламени спиртовки. Заранее готовят две пробирки со стерильной водой, три стерильные чашки Петри и три пипетки.

Воду набирают в стерильную колбу, из которой отбирают 2 мл. Из колбы, в которую отобрана вода для исследования, пипеткой берут 2 мл; 1 мл вносят в первую стерильную чашку и 1 мл – в первую пробирку с 9 мл стерильной воды. Получается разведение 1:10. Второй пипеткой воду перемешивают в первой пробирке. Затем этой же пипеткой 1 мл разведения переносят во вторую стерильную чашку и 1 мл – во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды, но не перемешивают . Третьей пипеткой перемешивают воду во второй пробирке (разведение 1:100) и 1 мл переносят в третью чашку.

После внесения в каждую чашку по 1 мл воды в разведениях 1:100, 1:10 и неразведенной выливают по 10-12 мл расплавленного и охлажденного до 45⁰С МПА. Чашку быстро закрывают и вращательными движениями перемешивают расплавленный МПА с водой. На крышке чашки Петри карандашом или специальными чернилами делают надписи с указанием даты посева, разведения. Чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат при температуре 35-37⁰С.

Подсчет микроорганизмов в воде проводят идентично почвенным образцам. По количеству выросших колоний, с учетом разведения, судят о содержании микроорганизмов в засеянном объеме воды:

Х = а х N,

где а - число выросших колоний;

N - разведение из которого сделан высев

Все подсчеты относят на мл или л.

Выявление и подсчет микроорганизмов в воде другого качества проводится идентично.

Исследование воздуха открытых пространств и закрытых помещений.

Имеется несколько способов микробиологического исследования воздуха, но наиболее простым из них является метод оседания микробов по Коху.

При использовании этого метода чашки Петри с питательной средой открывают на 5 мин (а иногда и на более продолжительное время, в зависимости от загрязнения) в том помещении, где необходимо определить чистоту воздуха или на открытом пространстве (при общемониторинговых исследованиях). Чашки закрывают и ставят в термостат при температуре 30-35⁰С на 2-3 суток. Подсчет колоний проводят на всей площади чашки. Считают, что из каждой живой клетки вырастает колония. Примерно на площади 100 см² в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха, а в 1 м² – в 100 раз больше. Диаметр чашки Петри ~ 9…10 см.

По приблизительному расчету на площадь в 100 см² за 5 мин осаждается примерно столько клеток микроорганизмов, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 м³). Зная площадь чашки Петри, по этим данным можно подсчитать количество клеток в 1 м³ воздуха. Для этого число колоний, выросших в чашке Петри, относят к значению общей площади чашки, затем пересчитывают, сколько таких колоний поместилось бы на 100 см², и переводят на 1 м³ воздуха.

Пример. В чашке Петри диаметром 10 см выросло 45 колоний. Площадь чашки 3,14 х 5² =78,5 см². Чтобы подсчитать число клеток (х) на 100 см² (равнозначных 10 л, или 0,01 м³ воздуха), составляют пропорцию (78,5 см²∕ 45 = 100 см² ∕ х), откуда

х = (100 х 45) ∕ 78,5 =57.

Таким образом, в 0,01 м³ воздуха находится 57 клеток, а в 1 м³ их будет в 100 раз больше, т. е. 5700.