Дезинфицирующие растворы и вещества

Наибольшее распространение в микробиологической практике получили следующие дезинфектанты:

- 1…3 % раствор фенола;

- формальдегид и его 1…3 % водный раствор;

- хлорная известь, хлорцин, хлорамин;

- хлорированная вода;

- 1 % раствор перманганата К;

- соли тяжелых металлов (Ag, Hg).

Практическая работа № 3 (4 ч) Подготовка питательных сред, посуды и сопутствующих материалов

Цель занятий: Подготовить посуду, изготовить ватные пробки, приготовить мясную воду и питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ) и мясо-пептонный агар (МПА).

Оборудование и материалы. Вата, марля. Стеклопосуда: колбы Эрленмейера, пробирки, чашки Петри, пипетки Мора: микро (0,1), 1, 10 мл. Пептон, поваренная соль, агар-агар. Фарфоровые или пластмассовые ложечки, лощеные бумажки для взятия и взвешивания веществ. pH-метр. 10%-ный раствор едкого натрия – 1 л. Дистиллированная вода в стаканчиках для промывки и для определения pH – по 200 мл. Ведерки для составления пробирок и шпагат для их связывания. Электроплитки для нагревания, расплавления агар-агара и растворения пептона.

Посуду для питательных сред (колбы, чашки Петри, пробирки) чисто моют, нейтрализуют, высушивают и стерилизуют в завернутом виде в автоклаве или сушильном шкафу при температуре 160-170 ⁰С. В кончики пипеток Мора помещают вату, завертывают в бумагу и стерилизуют выше указанным способом.

Пробки готовят из ваты, для чего ее разделяют послойно. Слой ваты вначале ровно заворачивают по краям, а потом туго скручивают. Образуется валик, который и представляет пробку. Она должна быть плотной и умеренно туго входить в пробирку или колбу. Пробки, бывшие в употреблении, высушивают, стерилизуют, после чего они могут быть использованы в производстве повторно. При длительном употреблении края пробок становятся неровными. Для лучшей сохранности их заворачивают в марлю и завязывают в верхней части ниткой. Ватные пробки должны быть сухими и хорошо подогнанными к пробиркам. В сыром месте пробки впитывают влагу, в результате чего развиваются плесени и другие микроорганизмы, которые впоследствии могут попадать внутрь пробирок.

В микробную клетку в течение всей жизни поступают питательные вещества, и, несмотря на малые размеры, в ней происходят сложные биохимические процессы расщепления и образования новых веществ. Следовательно, чтобы в микроорганизме нормально протекали физиологические процессы, необходимо поступление питательных веществ. В природе эти существа получают питательные вещества из распавшихся остатков растений и животных или живут за счет живых клеток.

Для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях используют специально приготовленные питательные среды. По своему составу они разделяются на естественные (молоко, сыворотка, яйца, желчь, картофель, горох, морковь и др.) и искусственные, которые готовят по определенным рецептам, используя наборы тех или иных солей, анионы и катионы которых являются факторами роста для микробиоты. Питательные среды могут быть животного (МПБ, МПА, МПЖ) и растительного (пивное сусло) происхождения.

Не все микроорганизмы растут на одних и тех же средах. Каждый микроорганизм требует для жизнедеятельности среды определенного состава и определенной реакции. Среды, используемые для культивирования микроорганизмов, называются элективными (избирательными). Приготовленные среды хранят в сухом прохладном месте. Перед посевом длительно хранившиеся и частично высохшие питательные среды освежают путем расплавления, а затем придают им нужную форму (столбика, скошенного агара в пробирках или питательной пластины в чашках Петри).

Мясо-пептонный бульон (МПБ) готовят на мясной воде (готовят путем настаивания мелко порубленного мяса без костей, жира и сухожилий в термостате при температуре 55⁰С в течение 1 ч). К ней добавляют 1% пептона и 0,5% химически чистого NaCl. Кипятят до растворения пептона, все время при этом помешивая. Величину pH определяют колориметрическим методом или рН-метром. Реакцию среды доводят до 7,4-7,6, подщелачивая 10%-ным раствором NaOH или насыщенным раствором соды. После добавления щелочи бульон еще раз кипятят в течение 15-20 мин и фильтруют через бумажный фильтр, увлажненный дистиллированной водой, затем среду разливают по пробиркам и стерилизуют в течение 20 мин при температуре 120⁰C.

Приготовление МПА. К определенному количеству МПБ добавляют агар-агар из расчета 20 г/л и расплавляют его на электроплитке. После расплавления среду фильтруют через марлевый фильтр и одновременно разливают в пробирки (по 3-4 мл для скошенного агара и по 12-15 мл для агара столбиком или в чашку Петри). Стерилизуют так же, как и МПБ.