Практическая работа № 5 (4ч) Методы выделения чистых культур микроорганизмов и изучение форм колоний

Цель занятия: изучить характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах

Оборудование и материалы: чашки Петри с МПА (стерильные) и с предварительно выполненными посевами культур микроорганизмов; микробиологические петли; стеклянные палочки; шпатель Дригальского; жидкие среды Гильтая, Виноградского и др.; спиртовка, спички.

Выделение чистых культур микроорганизмов:

• Метод разведения. Исследуемый материал разводят в изотоническом растворе NaCl или в стерильной жидкой питательной среде. Разведения от 10^-2 до 10^-7 и выше. Для выделения изолированных колоний из больших разведений делается посев на плотную питательную среду. При однородности выросших колоний делается дополнительный пересев.

• Метод рассева. На плотную питательную среду (например, МПА) наносят каплю исследуемого материала. Каплю растирают. Этим же шпателем растирают последовательно несколько последующих чашек Петри со средой. При этом происходит механическое разделение микробных клеток, из каждой из них вырастает 1 колония.

• Метод применения элективных сред. Микроорганизмы выращивают в соответствии с их физиологическими потребностями в элементах питания.

• Метод выделения бацилл (спорообразующих микроорганизмов). Отделение бацилл при прогревании посевного материала при температуре 70-80⁰С в течение 10-15 мин.

• Метод биологической очистки культуры. Для выделения некоторых культур микроорганизмов проводится предварительное заражение ею лабораторных животных. При введении животному предполагаемой культуры возбудителя происходит его смерть, впоследствии на элективных питательных средах устанавливается природа возбудителя.

Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах.

Схема описания колоний:

• Форма (круглая, овальная, ветвистая и т.п.)

• Размеры (точечные – Д~ 1 мм, мелкие – 1…2 мм, средние – 2…4 мм, крупные – более 4 мм)

• Поверхность (ровная или складчатая, матовая или блестящая)

• Края (ровные, изрезанные, локонообразные, лопастные и т.д.)

• Прозрачность

• Консистенция (слизистая, крошковатая, плотная и т.д.)

• Пигмент

Рост культур микробов на жидких питательных средах

• Рост на поверхности (пленка по всей площади или пристеночное кольцо)

• Цвет (может изменяться под действием пигмента, образуемого микроорганизмом)

• Помутнение

• Газообразование

• Осадок (зернистый, вязкий, крошковатый)

Практическая работа № 6 (6 ч) Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Цель работы: Санитарно-микробиологическая оценка различных почв

Оборудование и материалы: образцы почв, расплавленные среды МПА и КАА в колбах, те же застывшие среды в чашках Петри для проведения поверхностного посева, колбы и пробирки со стерильной водопроводной водой, пипетки Мора для глубинного и поверхностного посевов, шпатели Дригальского, спиртовые горелки.

Микроорганизмы распределены в почве неравномерно, их численность подвержена как кратковременным флуктуациям, так и более длительным изменениям, поэтому отбор проб почвы необходимо проводить во времени. Кроме того, образцы почв следует отбирать и в пространстве, что подразумевает взятие почвенных образцов из возможно большего количества точек изучаемого участка.

Из отобранных образцов готовится смешанная проба. Из средней пробы извлекают 5 г почвы и переносят их в колбу с 49 мл стерильной водопроводной воды (разведение 1 : 10). Последующее разведение готовят путем разбавления 2 мл исходного раствора в пробирке с 18 мл стерильной воды (разведение 1 : 100), последующие разведения готовят идентично.

Посев на агаризованные среды проводят поверхностно или глубинно.

Общее число микроорганизмов почвы учитывают на средах:

КАА- крахмало-аммиачный агар;

МПА - мясо-пептонный агар и других.

В почве учитываются физиологические группы микроорганизмов, относящиеся к индикаторам самоочищения: аммонифицирующие, нитрифицирующие, целлюлозоразрушающие, разрушающие органические фосфаты и т.д., а также аэробы и анаэробы, растущие не только на твердых, но и на жидких средах. При подозрении на загрязнение почвы в ней учитывают наличие санитарно-показательных микроорганизмов, в частности БГКП.

Подсчет микроорганизмов, выросших на жидких средах, осуществляют при использовании вероятностных таблиц Мак-Креди.

Подсчет микроорганизмов на твердых средах:

Х =	а х N
	m

где а - число выросших колоний;

N - разведение из которого сделан высев;

m - вес сухой навески, г.