- •Определение групп крови системы ав0 при помощи изогемагглютинирующих сывороток
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинского назначения
- •Техника определения группы крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток
- •Трактовка результатов реакции при определении группы крови с помощью изогемагглютинирующих сывороток
- •Техника определения группы крови перекрестным способом при помощи изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов
- •Трактовка результатов при определении группы крови перекрестным способом
- •Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
- •Определение групп крови системы ав0 с использованием моноклональных реагентов анти-а, анти-в, анти-ав
- •Применение идентификационных карт для определения групп крови ав0 в гелевом тесте микрометодом (id-карты ДиаМед)
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •Технология использования способа
- •Применение карточек с моноклональными
- •Определение резус-принадлежности крови
- •I. Общие положения
- •Определение резус-принадлежности
- •Учет групповой принадлежности сыворотки антирезус
- •3. Контрольные исследования
- •4. Особенности стандартных сывороток антирезус
- •II. Методы определения резус-принадлежности
- •1. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации
- •2. Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева)
- •3. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости (чашке Петри) с подогревом
- •4. Определение резус-принадлежности эритроцитов реакцией агглютинации в солевой среде
- •5. Определение резус-принадлежности крови с использованием моноклонального реагента анти-d
- •6. Определение резус-принадлежности в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса) с помощью неполных анти- d антител
- •III. Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
- •IV. Исследование других антигенов системы резус
- •Приготовление и использование стандартных сывороток и универсального реагента антирезус для определения резус-принадлежности крови человека
- •Источники получения сыворотки антирезус
- •Показатели пригодности крови для изготовления из нее стандартной сыворотки антирезус
- •Методы и дозы взятия крови
- •Первичная обработка сыворотки и плазмы
- •Исследование сыворотки на активность резус-антител
- •Повторное титрование сыворотки
- •Стандартизация сыворотки антирезус
- •Заключение о пригодности сыворотки
- •Назначение сыворотки антирезус
- •Розлив и паспортизация стандартных сывороток антирезус
- •Хранение и срок годности стандартной сыворотки антирезус
- •Выдача стандартной сыворотки антирезус
- •Изготовление универсального реагента антирезус для определения резус-принадлежности в пробирках без подогрева
- •Изготовление пробного образца реагента антирезус
- •Исследование на специфичность и активность
- •Трактовка результата
- •Изготовление серии стандартного универсального реагента антирезус
- •Инструкция по использованию стандартной сыворотки антирезус для определения резус-принадлежности эритроцитов крови реакцией с применением желатина
- •Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Инструкция по использованию универсального реагента для определения резус-принадлежности эритроцитов крови в пробирках без подогрева
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Исследование сыворотки человека на наличие резус-антител
- •I. Общие замечания
- •1. Учет специфичности антител и стандартных эритроцитов
- •2. Учет формы антител
- •II. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител непрямой пробой кумбса
- •Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результата
- •4. Титрование сыворотки, содержащей неполные резус-антитела
- •5. Проведение непрямого антиглобулинового теста с liss
- •6. «Спин»-метод для оценки результатов прямого и непрямого антиглобулиновых тестов
- •III. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител с применением желатина
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результатов
- •4. Титрование сыворотки, содержащей неполные резус-антитела
- •Іv. Исследование сыворотки на наличие неполных антител с применением полиглюкина (в пробирках без подогрева)
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результатов
- •V. Исследование сыворотки на наличие полных антител в реакции агглютинации в солевой среде
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результата
- •4. Титрование сыворотки, содержащей полные резус-антитела
- •VI. Феномен зоны
- •VII. Специфичность антител
- •Viiі. Выявление антител к антигенам эритроцитов в гелевом тесте микрометодом
- •IX. Общее заключение
- •Удаление из сыворотки антирезус антител другой специфичности
- •1. Использование амниотической жидкости для нейтрализации групповых агглютининов и *
- •2. Нейтрализация групповых агглютининов и естественными групповыми веществами специфичности а и в (фруглюмином а и в)
- •3. Абсорбция групповых агглютининов резус-отрицательными эритроцитами на свертках крови группы ab(IV)
- •4. Нейтрализация групповых агглютининов и при помощи разведения сыворотки
- •5. Удаление из сыворотки антирезус сопутствующих антител анти-с и анти-е
- •Предупреждение посттрансфузионных осложнений, обусловленных эритроцитарными антигенами системы кеll
- •Выявление иммунных анти-а, анти-в антител к антигенам эритроцитов системы ав0
- •I. Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •II. Определение полных иммунных антител к эритроцитарным антигенам системы ав0 в реакции солевой агглютинации
- •1. Подготовительная работа
- •2. Техника реакции
- •3. Трактовка результатов
- •III. Определение неполных изоиммунных антител к эритроцтарным антигенам системы ав0 в непрямой пробе Кумбса
- •1. Подготовительная работа
- •2. Техника реакции
- •3. Трактовка результатов
- •Іv. Выявление иммунных (IgG) анти-а, анти-в антител с использованием унитиола
- •1. Характеристика метода
- •2. Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •3. Порядок проведения исследования
- •4. Трактовка результатов
- •5. Условия хранения и эксплуатации
- •V. Определение гемолизинов системы ав0
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •2. Подготовительная работа
- •3. Техника реакции
- •4. Трактовка результатов определения групповых гемолизинов
- •Иммунизация доноров для получения стандартной сыворотки и иммуноглобулина антирезус
- •1. Отбор доноров для иммунизации
- •2. Выбор крови, используемой в качестве антигена
- •3. Условия иммунизации и реиммунизации
- •4. Иммунизация доноров для получения антител анти-d
- •5. Реиммунизация доноров для получения антител анти-d
- •6. Время появления антител
- •Иммунизация доноров для получения антител анти-с и анти-е
- •Время появления антител анти-с и анти-е
- •Заключение
- •Приготовление стандартных редких сывороток для определения различных изоантигенов человека
- •1. Основное назначение редких сывороток в организациях службы крови
- •2. Источники и способы получения сыворотки
- •3. Методы иммунизации и реиммунизации
- •4. Методы и дозы взятия крови
- •5. Показатели пригодности редких сывороток для практического использования
- •6. Организация поиска и первичное исследование редких сывороток
- •7. Титрование сыворотки
- •8. Стандартизация сыворотки
- •9. Обработка и расфасовка сыворотки
- •10. Паспортизация редкой сыворотки
- •11. Хранение и выдача редких сывороток
- •Использование стандартной сыворотки для определения антигенов эритроцитов редкой специфичности методом конглютинации с желатином в пробирках
- •Приготовление консервированных стандартных эритроцитов и их применение в изосерологических исследованиях
- •I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам
- •II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов
- •2. Получение взвеси эритроцитов в консерванте и розлив
- •3. Маркировка
- •4. Контроль
- •Взятие и учет крови, получаемой от доноров малыми дозами для приготовления стандартных эритроцитов
- •Министерство здравоохранения республики беларусь
- •Порядок выполнения иммуногематологических исследований крови доноров и различных категорий реципиентов
- •Алгоритм проведения иммуногематологических исследований у доноров
- •1. Определение группы крови по системе ав0
- •Порядок внесения в паспорта граждан отметок о групповой и резус-принадлежности
- •Определение резус-принадлежности крови
- •4. Определение антигена Келл
- •5. Фенотипирование антигенов эритроцитов
- •6. Определение наличия аллоиммунных антител в сыворотке крови
- •7. Идентификация аллоантител
- •Индивидуальный подбор гемокомпонентов для трансфузии
- •Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
- •Определение группы крови по системе ав0
- •2. Определение резус-принадлежности
- •3. Определение наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител в сыворотке крови
- •4. Определение антител, фиксированных на эритроцитах (прямой антиглобулиновый тест)
- •5. Скрининг антиэритроцитарных аллоантител
- •Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
- •Отбор крови и плазмы для стандартных сывороток
- •Требования, предъявляемые к стандартной изогемагглютинирующей сыворотке
- •Основные этапы работы
- •Методы серологических исследований Определение групповой принадлежности сыворотки при помощи стандартных эритроцитов
- •Определение способности сыворотки вызывать неспецифическую агглютинацию
- •Определение гемолизирующих свойств сыворотки
- •Определение скорости наступления агглютинации
- •Определение титра агглютининов
- •Технология использования метода Предварительное заключение о пригодности крови для стандартной сыворотки
- •Взятие крови и донора и отделение от нее сыворотки
- •Паспортизация
- •Получение сыворотки из крови, оставшейся во флакончиках (пробирках)-спутниках после взятия ее у доноров
- •Использование плазмы крови
- •Паспортизация
- •Дальнейшая обработка и предварительное заключение о пригодности сыворотки
- •Консервирование сыворотки
- •Первый контроль сыворотки до розлива и оценка пригодности ее для дальнейшей обработки
- •Устранение свойства сыворотки вызывать неспецифическую агглютинацию
- •Устранение гемолизирующего действия сыворотки
- •Второй контроль сыворотки до розлива и оценка ее пригодности для дальнейшей обработки
- •Смешивание сывороток
- •Окрашивание сыворотки
- •Фильтрование сыворотки
- •Паспортизация разлитой сыворотки
- •Срок годности стандартной изогемагглютинирующей сыворотки
- •Контроль разлитой сыворотки
- •Методика титрования при контроле разлитой сыворотки
- •Брак разлитой сыворотки в пределах указанного срока годности
- •Выдача сыворотки
- •Хранение сыворотки
- •Общие сведения о паспортизации сыворотки
- •Паспортные записи в журналах
- •Результат реакции
- •Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток двух серий каждой группы
- •Подготовка и применение красок при приготовлении стандарнтных изогемагглютинирующих сывороток
4. Определение резус-принадлежности эритроцитов реакцией агглютинации в солевой среде
Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов,
изделий медицинской техники
Стандартные сыворотки антирезус анти-D с полными антителами;
стандартные эритроциты Rh+ и rh- для контроля;
пробирки высотой 1,5-2,0 см и диаметром 0,5-0,6 см с гладким дном округлой формы или планшеты для иммунологических реакций;
лупа с 2-4-кратным увеличением;
термостат на +37°С.
Предварительная обработка исследуемой крови и
стандартных эритроцитов
Кровь для исследования берут в количестве 0,5-1 мл в обычные пробирки, содержащие 0,25 мл (5 капель) раствора лимоннокислого натрия или другого стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы и группу крови лица, от которого взята кровь. Эритроциты необходимо отмыть, для чего в пробирки доливают доверху изотонический раствор NaCI, содержимое их перемешивают и центрифугируют.
Кровь можно брать без стабилизатора. При этом после свертывания крови обычно в пробирке остается некоторое количество свободных эритроцитов. Если этих эритроцитов недостаточно, следует интенсивно встряхнуть сгусток для отделения большего количества эритроцитов. Полученные таким образом эритроциты отмывают, как указано выше.
Из отмытых эритроцитов приготавливают 2%-ую взвесь, для чего 1 каплю эритроцитов переносят в соответственно обозначенную пробирку, содержащую 49 капель изотонического раствора NaCI. 2%-ую взвесь эритроцитов используют для исследования.
Допустимо хранить кровь в течение 2 суток при +4 – +8°С.
Техника определения
В штатив устанавливают два ряда пробирок по числу исследуемых образцов эритроцитов в каждом ряду и две – для контролей. Предварительно штатив накрывают листом бумаги. На нем слегка накалывают отверстия, сквозь которые и устанавливают пробирки. Против каждой пары пробирок на бумаге надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого будет исследоваться. Во все пробирки (лунки планшета) первого ряда вводят по 1 капле (0,05 мл) сыворотки антирезус одной серии, во все пробирки (лунки) второго ряда – по 1 капле (0,05 мл) сыворотки антирезус другой серии и во все пробирки (лунки) обоих рядов по 1 капле изотонического раствора NaCI.
В соответственно обозначенные пары пробирок (лунок планшета) добавляют по 1 капле (0,05 мл) 2%-ой взвеси испытуемых эритроцитов, а в контрольные – по 1 капле (0,05 мл) 2%-ой взвеси контрольных стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. Содержимое тщательно перемешивают встряхиванием и помещают в термостат при +37°С на 1 час. Можно затем оставить пробирки при комнатной температуре еще на 1,5-2 часа до учета результата.
За это время эритроциты оседают на дно, предварительно войдя в контакт с сывороткой антирезус.
Трактовка результатов
Пробирки (планшеты) следует рассматривать по продольной оси над источником света, закрытым матовым стеклом.
Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов, что выражается в разной форме их осадка на дне.
При положительном результате осадок эритроцитов располагается на дне неравномерным слоем. Видна шероховатость, губчатость или зернистость его структуры. Края осадка никогда не бывают ровными, они изогнуты, иногда завернуты внутрь. В некоторых случаях эритроциты располагаются в виде волнистого венчика вокруг более светлой центральной части. При отрицательном результате осадок эритроцитов располагается равномерным слоем без шероховатостей и неровностей, иногда с небольшим просветлением в центре. Границы его представляют собой правильно очерченный круг.
Диаметр осадка при отрицательном результате всегда меньше, чем при положительном.
Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой анти-D, являются резус-положительными (Rh+), образцы эритроцитов, не давшие агглютинации с сывороткой анти-D резус-отрицательными (rh-).
Однако результаты учитывают как истинные при совпадении их в обеих сериях сыворотки антирезус и после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными.
Примечание: полные антитела не выявляют слабый антиген Du.