osn_san_mikr

183

Метод основан на выявлении способности кишечной палочки ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 440С от 24 до 48 часов. Идентификацию E.coli проводят по следующим таксономическим признакам: образование индола, положительная реакция с метиловым красным, отрицательная реакция Фогес-Проскауэра и отсутствие способности утилизировать цитрат.

Методика проведения анализа с предварительной инкубацией. Асептически взвешивают 10,0г сухого детского продукта «Детолакт»,

растворяют в колбе в 90,0см3 разбавленного фосфатного буфера; рН доводят до 7,0, для чего используют пастеризованный 1н раствор гидроокиси натрия или 1н раствор соляной кислоты, проверяя рН индикаторной бумажкой.

Колбу помещают в термостат и выдерживают при температуре 370С в течение 24 часов.

1,0см3 смеси из этой колбы засевают в пробирку или колбу с 9,0см3 среды Кесслера с лактозой и поплавком и инкубируют при температуре 440С в течение 24 часов.

При отсутствии газа, помутнения, изменения цвета среды в посевах продуктов, подвергавшихся предварительной инкубации, результат анализа считают отрицательным и дают заключение об отсутствии в нем E.сoli, т.е. соответствии продукта нормативу по этому показателю.

Методика проведения анализа без предварительной инкубации. Навеску продукта 10,0г (см3) помещают в колбу с 90,0см3 среды Кесслера

с лактозой и поплавком и инкубируют при 440С 24 часа.

При отсутствии признаков роста (газообразование и помутнение среды) посевы инкубируют еще 24 часа.

При отсутствии газа и других признаков роста в посевах дают заключение об отсутствии в продукте E.сoli и соответствии нормативу по этому показателю.

Пробирки (колбы), в которых обнаружен газ или другие признаки роста, подвергают дальнейшему изучению, для чего производят посев штрихом или рассевом на поверхность чашки Петри с подсушенной средой Эндо или Левина так, чтобы получить изолированные колонии. Посевы инкубируют при 370С в течение 24 часов.

При просмотре посевов необходимо учитывать, что эшерихии на среде Эндо дают красные с металлическим блеском или без него розовые колонии; на агаре Левина – черные, темно-коричневые с темным центром, с металлическим блеском или без него.

Если из окрашенных колоний при микроскопии мазков окрашенных по Граму и на наличие спор, обнаруживаются грамотрицательные неспорообразующие палочки, то все типичные колонии подвергаются идентификации по ИМАЦ–тестам (реакция на индол, реакция с метиловым красным, реакция Фогес–Проскауэра, утилизация цитрата).

При учете результатов в первую очередь обращают внимание на наличие роста и/или изменение цвета среды Симмонса, содержащей цитрат, с зеленого на синий или желтый, что характерно для цитрат-положительных культур. Для

184

цитрат-отрицательных разновидностей бактерий характерно отсутствие роста и изменения цвета среды.

При выделении из продукта грамотрицательных неспорообразующих палочек, продуцирующих газ на лактозе при температуре 440С, образующих или не образующих индол, дающих положительную реакцию с метиловым красным, отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра и не растущих на среде Симмонса (Козера), считают, что в 10,0г продукта содержится E.сoli.

Продукт в данном случае бракуется. При обнаружении в 10,0г продукта бактерий родов Enterobacter и Citrobacter, но при отсутствии колиморфных бактерий в 1,0г продукт браковке не подлежит.

Определение бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах.

Метод основан на использовании сред обогащения для увеличения роста сальмонелл, их выделении на специальных агаровых средах, идентификации с использованием биохимических и серологических методов.

Для посева используют то количество продукта, в котором регламентируется отсутствие бактерий рода Salmonella. Перед посевом проводят инкубацию продукта в фосфатном буферном растворе.

Компоненты детских сухих молочных продуктов засевают без предварительной инкубации, непосредственно в колбу со средой для селективного обогащения.

Посев с предварительной инкубацией.

Продукт взвешивают в стерильных условиях в стакане и затем для предварительного обогащения навеску асептически переносят в колбу с разбавленным фосфатным буфером. Соотношение массы продукта и буферного раствора 1:10, рН доводят до 7,0±0,2 1н раствором гидроокиси натрия, перемешивают и встряхивают.

К приготовленной таким образом взвеси продукта добавляют 0,1% водный раствор бриллиантового зеленого в количестве 2% к объему (т.е. 20,0см3 раствора красителя к 1000,0см3 взвеси продукта), перемешивают и выдерживают в термостате при температуре 370С от 18 до 24 часов;

На следующий день 1,0см3 выдержанной в термостате смеси переносят в пробирки с 10,0см3 магниевой среды или среды Мюллера и инкубируют при температуре 370С в течение 18-24 часов.

Прямой посев в среды для селективного обогащения. Асептически сделанные навески сухих компонентов продукта засевают в

колбы с магниевой средой или средой Мюллера, соблюдая соотношение продукта и среды 1:9.

Для жидких продуктов допускается использование среды с двойной концентрацией ингредиента при соотношении продукта и среды 1:1.

В обоих случаях колбы с посевами инкубируют в течение 18-24 часов при 370С, после чего производят высев на поверхность чашек с подсушенными дифференциально-диагностическими средами – Плоскирева и висмут-сульфит агара. Чашки с посевами инкубируют при 370С в течение 24-48 часов, причем просмотр посевов осуществляют дважды: через 24 и 48 часов после инкубации.

185

При наличии смешанного роста необходимо сделать повторный пересев на питательный агар для выделения чистых культур и получения изолированных колоний.

Типичные колонии сальмонелл

–на среде Плоскирева – бесцветные, прозрачные, плоские;

–на висмут-сульфитном агаре – черные, с характерным металлическим блеском, зеленоватые с темным ободком, при этом наблюдается окрашивание в черный цвет участка среды под колонией.

При отсутствии типичных колоний сальмонелл на каждой из сред результат анализа считают «отрицательным», т. е. в исследуемой массе продукта сальмонелл нет.

При наличии на чашках Петри типичных для сальмонелл колоний или колоний, подозрительных на сальмонелл, производят их дальнейшее изучение.

Для этого выбирают хорошо изолированную колонию и засевают на

пробирки с трехсахарным агаром с мочевиной или средой Клиглера и инкубируют при 370С в течение 24 часов.

Идентификацию выделенных культур проводят, соответственно, по ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы и расщеплению мочевины:

–покраснение или пожелтение скошенной части столбика трехсахарной среды (при посеве уколом) говорит об образовании кислоты в результате ферментации лактозы или сахарозы;

–покраснение столбика трехсахарной среды указывает на расщепление глюкозы;

–бледно-розовый цвет столбика трехсахарной среды указывает на расщепление мочевины;

–об образовании сероводорода судят по почернению в столбике трехсахарной среды.

Если культуры сбраживают лактозу с образованием газа и расщепляют мочевину, то они не принадлежат к бактериям рода сальмонелл, поэтому дальнейшему изучению подвергаются культуры, не ферментирующие лактозу и не расщепляющие мочевину, но ферментирующие глюкозу (с образованием или без образования газа).

Культуры, ферментирующие глюкозу без образования газа, подозрительны как брюшнотифозные сальмонеллы или дизентерийные бактерии.

Культуры, ферментирующие глюкозу с образованием газа, т. е. дающие в среде пузырьки, и продуцирующие сероводород, могут принадлежать к роду сальмонелл.

Если во всех пробирках отсутствует характерная для сальмонелл реакция, результат считают отрицательным и дают заключение об отсутствии в исследуемой массе продукта бактерий рода сальмонелл.

Если обе пробирки покажут типичную для сальмонелл реакцию, а выделенный штамм дает отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра, то в этом случае проводят серологическую идентификацию с помощью реакции агглютинации по идентификации с сальмонеллезными О-сыворотками. Если

186

реакция агглютинации по идентификации отрицательная (агглютинации не наблюдается в течение 30-60 секунд), то конечный результат анализа записывают как отрицательный.

При выделении культур грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующих лактозу и сахарозу, образующих или не образующих сероводород, дающих отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра и положительную реакцию агглютинации по идентификации с соответствующими сальмонеллезными О-сыворотками, считают, что в исследуемой навеске продукта присутствуют бактерии рода сальмонелл, и продукт к реализации не допускается.

Определение коагулазоположительных Staphylococcus aureus

(СанПин 42-123-4940-88).

Метод основан на способности микроорганизмов рода Staphylococcus расти на средах с повышенным содержанием хлорида натрия (6,5%).

При этом среди всех представителей данного рода и вида наибольшее санитарно-микробиологическое (санитарно-гигиеническое) значение имеет обнаружение коагулазоположительных S.аureus – стафилококков, способных коагулировать цитратную плазму крови человека или кролика.

Методика проведения анализа. Навеска продукта должна составлять:

–10,0г – без предварительной термической обработки;

–1,0г – с предварительной термической обработкой.

Сухие молочные продукты типа «Детолакт», «Новолакт ММ», «Новолакт-1», восстанавливаемые перед употреблением при 370С и 700С, перед посевом подвергаются разведению в фосфатном буферном растворе.

Встерильных условиях взвешивают 10,0г или, соответственно, 1,0г продукта и помещают в колбы с 90,0см3 или, соответственно, 9,0см3

разбавленного фосфатного буфера, тщательно перемешивают.

Полученную смесь инкубируют при 370С в течение 18-24 часов, затем 1,0см3 этой смеси переносят в пробирку с солевым бульоном (6,5% натрия хлорида) и снова инкубируют при 370С в течение 24 часов.

Жидкие, пастообразующие и другие продукты, не подвергающиеся предварительной инкубации, в количестве 1,0г или 10,0г засевают в пробирки

или колбы с солевым бульоном при соотношении продукта и среды 1:10. Посевы инкубируют при 370С в течение 18-24 часов.

Вобоих случаях для выделения чистой культуры стафилококков делают пересев петлей из солевого бульона на чашки Петри с подсушенными средами

типа Байрд-Паркер или желточно-солевой агар (ЖСА) и снова инкубируют при 370С в течение 18-24 часов.

Учет роста колоний:

– на среде Байрд-Паркер S.аureus растет в виде черных, блестящих, выпуклых колоний. При этом штаммы золотистого стафилококка, выделенные из пищевых продуктов и штаммы, продуцирующие энтеротоксин, на этой среде часто дают просветление через 24 часа инкубации при 370С.

187

–на желточно-солевом агаре (ЖСА) колонии стафилококка имеют форму выпуклых дисков белого, желтого, кремового, лимонного цвета с ровным краем, окруженные зоной лецитиназной активности.

Из подозрительных на стафилококк колоний в любом случае готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

При обнаружении грамположительных кокков, расположенных в виде

скоплений, делают пересев на скошенный агар (МПА с 0,1% глюкозой) для накопления чистой культуры. Посевы инкубируют при 370С в течение 24 часов.

Выделенную чистую культуру пересевают на среду Гисса с маннитом или

мальтозой, разлитую высоким столбиком (посев производят уколом) и снова инкубируют при 370С в течение 24 часов.

В случае роста стафилококков на среде Гисса с маннитом или мальтозой наблюдается ферментация или окисление углевода, сопровождающиеся изменением цвета среды.

Выделенную чистую культуру также обязательно исследуют на наличие

фермента плазмокоагулазы. Для проведения реакции в стерильную пробирку с 0,5-1,0см3 цитратной плазмы крови кролика вносят одну петлю суточной агаровой культуры бактерий. Еще одну пробирку с плазмой крови оставляют

незасеянной для контроля. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют при 370С в течение 24 часов.

Результат реакции при этом учитывают через 2, 4, 6 и 24 часа. При учете реакции плазмокоагуляции возможно 2 варианта:

–реакция плазмокоагуляции считается положительной при образовании даже небольшого сгустка плазмы через 24 часа культивирования, соответственно, исследуемую культуру относят к коагулазоположительным,

что в свою очередь свидетельствует о присутствии коагулазоположительных стафилококков в 10,0г или, соответственно, 1,0г (см3) продукта.

–реакция плазмокоагуляции считается отрицательной, если свертывание плазмы не происходит через 24 часа культивирования, исследуемую культуру относят к коагулазоотрицательным.

Отрицательная реакция плазмокоагуляции свидетельствует об отсутствии коагулазоположительного стафилококка в засеянной массе.

При значительном росте коагулазоотрицательных стафилококков в посевах детских сухих молочных смесей необходимо обратить внимание на соблюдение санитарно-гигиенических нормы их изготовления, т.к. у детей грудного возраста некоторые коагулазоотрицательные стафилококки способны вызывать острые энтериты.

Определение Bacillus cereus.

Bacillus cereus – аэробные спорообразующие грамположительные палочки, некоторые штаммы которых способны продуцировать энтеротоксин.

В продуктах, выработанных с соблюдением технологических правил, при посеве 0,01г рост B.сereus должен отсутствовать, что соответствует показателю по этому микроорганизму – менее 10 клеток /г.

188

При несоответствии нормативу только по B.сereus в сухих молочных продуктах типа «Детолакт» (в отдельных случаях от 100 до 200 КОЕ / г) – партия однократно не задерживается для реализации. В таких случаях проводят исследование на наличие B.сereus в компонентах растительного и животного происхождения и в случае обнаружения значительного количества бактерий дают рекомендации о возможности использования их в производстве.

Метод основан на выявлении и количественном подсчете колоний бактерий вида Bacillus cereus, относящихся к спорообразующим бациллам, при росте их на специальных плотных питательных средах.

Методика проведения анализа.

Производят посев по 0,1см3 (0,01г) и по 0,2см3 (0,02г) сухих молочных продуктов из разведения 1:10 на поверхность хорошо подсушенной плотной специальной питательной среды Донована, разлитой в чашки Петри.

Посевы инкубируют при 300С в течение 24-96 часов.

При отсутствии роста на обеих чашках дают заключение о соответствии детской сухой молочной смеси нормативу по этому показателю.

При обнаружении роста на среде Донована изучают выросшие колонии, учитывая при этом, что Bacillus cereus на среде Донована образуют крупные белые распластанные колонии с изрезанными краями, окруженные зоной глубокого белого матового коагулята или зоной просветления – результат проявления лецитиназной активности.

Из изучаемых колоний делают мазки, окрашивают по Граму и на наличие спор, затем микроскопируют, учитывая, что Bacillus cereus – грамположительные спорообразующие палочки.

Для накопления чистых культур 3-5 колоний пересевают на скошенный агар с последующей инкубацией при 300С в течение 24-48 часов.

У выделенных чистых культур методом «висячей капли» определяют подвижность. Кроме этого, эти культуры засевают:

–на кровяной агар;

–на среду с маннитом;

–на среду Кларка для постановки реакции Фогес-Проскауэра (в

пробирки).

Посевы инкубируют при 300С в течение 24-48 часов.

Характерными признаками для бактерий вида Bacillus cereus являются:

–наличие подвижности;

–положительная проба на лецитиназу;

–гемолитическая активность (образование зон просветления вокруг колоний) на кровяном агаре;

–отсутствие способности ферментировать маннит;

–положительная реакция Фогес-Проскауэра.

Подсчет обнаруженных в продукте бактерий вида B.сereus проводят путем умножения количества типичных выросших на среде Донована колоний на соответствующее разведение, и затем пересчитывают в расчете на 1,0г или 1,0см3 исследуемого продукта.

189

Экспресс-метод определения антибиотиков в пищевых продуктах

(МУК 4.2.026-95).

Допустимое значение антибиотиков для продуктов не должно превышать для тетрациклина 0,01ЕД, пенициллина – 0,01ЕД, стрептомицина – 0,5ЕД на 1,0г (мл) продукта.

Метод качественного и количественного обнаружения антибиотиков в пищевых продуктах и других субстратах, основан на подавлении антибиотиками дегидрогеназной активности тест-культур в жидкой питательной среде. Если антибиотик оказывает цитотоксическое действие, то клетки тест-культур теряют способность восстанавливать метиленовый синий в анаэробных условиях, поскольку метиленовый синий играет в этой системе одновременно роль акцептора водорода и индикатора.

Преимущество экспресс-метода заключается в возможности получения ответа через 4-5 часов, относительной простоте и значительной экономии питательной среды.

Методика проведения анализа состоит из нескольких этапов:

1.Подготовка проб к исследованию при качественном и количественном определении.

2.Получение и хранение взвеси из клеток тест-культур.

3.Определение «рабочей дозы» тест-культуры.

4.Определение концентрации антибиотиков в испытуемом растворе.

5.Качественное определение антибиотиков.

«3.1.1. Подготовка проб к исследованию при качественном определении. Молоко (ГОСТ 13928-84).

Сырое молоко желательно подвергать исследованию в день отбора, как можно быстрее после получения; до начала анализа сохранять в холодильнике при температуре 4±10С. Пробу в объеме не менее 10,0см3 переносят в пробирку.

Сухие молочные продукты (сухое молоко, сухие сливки, сухие детские молочные продукты, изготовленные

на основе коровьего молока).

Непосредственно перед исследованием продукты подвергаются восстановлению в кипяченой воде при температуре не выше 45±10С в соответствии с указаниями на этикетке. Образцы тщательно перемешивают, они не должны содержать нерастворенных частиц или комков.

Из восстановленного продукта отбирают пробы для анализа объемом не менее 10,0см3.

Мясо и субпродукты.

Мясо и субпродукты (печень, почки, язык и т.д.) скота и птицы, предназначенные для исследования, измельчают при помощи мясорубки или гомогенизатора, помещают полученный фарш в чашку Петри и дают стечь тканевому соку. Тканевой сок в объеме не менее 10,0см3 переносят в пробирку.

Термическая обработка проб пищевых продуктов.

Перед проведением исследования пробирки с отобранными пробами помещают в водяную баню с температурой 60±10С. Параллельно с

190

испытуемыми образцами в водяную баню помещают пробирки с аналогичным продуктом и термометром. Время прогревания – 30 минут – отмечают от момента достижения температуры внутри пробирки.»

«3.1.2. Подготовка проб к исследованию при количественном определении.

Молоко, молочные продукты, яйца.

Для определения концентрации антибиотика в молоке, жидких молочных продуктах, кроме кисломолочных, яйцах, пробы, подготовленные к исследованию, в количестве 10,0мл или 10,0г (смешанного содержимого каждого яйца) вносят в колбы емкостью 50,0мл и добавляют равное количество (10,0мл) буферного раствора соответственно определяемому антибиотику: тетрациклин – цитратно-солянокислый (рН 5,8-6,0), стрептомицин – 0,066 М фосфатный буфер (рН 7,8-8,0), пенициллин – 0,066 М фосфатный буфер (рН 6,8-7,0).

Таким образом, получают пробы для исследования, разведенные в 2 раза.

Мясо и мясные продукты.

Навески по 10,0г мышечной ткани, почек, печени, легкого и т.д., вырезанные из средней части образца, измельчают ножницами или микроразмельчителем тканей с последующим растиранием в ступке со стерильным кварцевым песком. В ступку добавляют 10,0мл соответствующего буфера, тщательно перемешивают и переносят в центрифужные пробирки.

Экстракцию антибиотика проводят в течение 90 минут в термостате при 37±10С. Затем пробы прогревают на водяной бане при 65±10С в течение 20 минут. Из надосадочной жидкости, являющейся первым разведением 1:2, берут 1,0мл и прибавляют 1,0мл соответствующего буфера, получают второе разведение 1:4 и т.д. Концентрацию антибиотика определяют в надосадочной жидкости, полученной от каждого образца мяса и мясных продуктов.

3.2. Получение и хранение взвеси клеток тест-культур. Тест-культурами служат вегетативные формы спорообразующих и

неспорообразующих культур: Bacillus subtilis вар. 6633, Bacillus subtilis вар. L2,

Bacillus mycoides 537, Micrococcus luteum ATCC 9341, обладающих высокой чувствительностью к антибиотикам.»

Для определения тетрациклина предпочтительно пользоваться штаммом Bac. subtilis вар. L2, а для пенициллина и стрептомицина – всеми остальными.

«Музейные штаммы вегетативных форм тест-культур хранят в столбике полужидкого (0,4%) питательного агара.

Вначале тест-культуру рассевают на чашки с 2% МПА для получения отдельных колоний и инкубируют при 37±10С в течение 20-24 часов. После этого для накопления чистой культуры отсевают в пробирки с 2% скошенным МПА и вновь инкубируют при 37±10С в течение 20-24 часов.

Микробную взвесь готовят путем смыва физиологическим раствором суточной культуры со скошенного агара. Важно, чтобы смыв культур был абсолютно гомогенным и не содержал комочков. Полученную взвесь хранят в холодильнике при температуре 4±10С не более 7 дней.»

191

По дегидрогеназной активности жизнеспособных клеток тест-культуры в смыве определяют «рабочую дозу» тест-культуры, т.е. наибольшее разведение суспензии, вызывающее обесцвечивание метиленового синего в определенное время (1 час) в термостате при температуре 37±10С.

«3.4. Количественное определение концентрации антибиотика и расчет активности.

При определении концентрации антибиотика в пищевых продуктах параллельно ставят контрольный ряд с известным содержанием антибиотика в пробирках. Для этого навеску стандарта антибиотика 1,0г растворяют в 1,0мл соответствующего буфера, получая, таким образом, основной раствор стандарта 1000,0мкг/мл. Затем основной раствор десятикратно разводят до получения 100,0мкг/мл и 10,0мкг/мл. Далее концентрации, с которых начинается титрование стандарта в контрольном ряду, разводят соответствующими буферными растворами.

Титрование стандарта антибиотика и испытуемых образцов проводят путем двукратных разведений в объеме 0,5мл МПБ. Последняя пробирка в контрольном ряду не содержит антибиотика и служит контролем дегидрогеназной активности клеток тест-культуры.

После этого во все пробирки вносят 0,5мл взвеси, содержащей двойную «рабочую дозу» тест-культуры, т.е. предпоследнее разведение тест-культуры, вызывающее обесцвечивание метиленового синего через 1 час. В результате микробная нагрузка в пробирках уменьшается вдвое и соответствует «рабочей дозе» тест-культуры.

Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 370С на 3-х часовую экспозицию тест-культуры с антибиотиком. Затем в каждую пробирку добавляют по 2,0мл 1% МПА с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок вновь смешивают и инкубируют при 370С в термостате.

Если в исследуемом объекте содержится антибиотик, то он блокирует дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-культуры и вызывает их гибель. В этих пробирках метиленовый синий не обесцвечивается (цвет – синий).

О степени активности антибиотика судят по его минимальной концентрации, которая вызывает полное подавление дегидрогеназ клеток тесткультур через 1 или 2 часа инкубации в термостате при температуре 370С, по сравнению с контролем.»

«3.6. Качественное определение антибиотиков. Подготовленные к использованию испытуемые пробы в объеме 0,5мл

вносят в пробирки с таким же количеством МПБ и тщательно перемешивают. Во все пробирки добавляют 0,5мл взвеси, содержащей двойную рабочую дозу тест-культуры.

Последняя пробирка не содержит испытуемого субстрата и служит контролем ферментативной активности тест-культуры.

192

Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 3-х часовую экспозицию тест-культуры с испытуемым субстратом.

После этого в каждую пробирку вносят по 2,0мл растопленного и охлажденного до 45±10С МПА с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок смешивают и вновь инкубируют при 37±10С в течение 1-2 часа.

Учет результатов.

1.При отсутствии в испытуемых образцах антибиотика дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-систем не нарушаются и восстанавливают (т.е. обесцвечивают) в анаэробных условиях метиленовый синий.

2.В контрольной пробирке, где нет испытуемого образца, также

происходит обесцвечивание в течение 1-2 часа наблюдения в термостате при 37±10С (контроль ферментативной активности бактериальных клеток тест-культуры).

3.При наличии антибиотика в испытуемом образце дыхательные ферменты бактериальных клеток блокируются, метиленовый синий не восстанавливается и цвет в пробирке не меняется, остается синим.

4.Параллельно в качестве второго контроля можно использовать субстраты, содержащие определенную концентрацию антибиотика.» (с.16

13.3.4. Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции

(МУК 4.2.801-99).

Выявление и идентификация Pseudomonas aeruginosa.

Метод основан на выявлении бактерий вида Pseudomonas aeruginosa с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выделенных культур бактерий по биохимическим свойствам.

Методика проведения анализа.

10,0см3 исследуемого материала из разведения 1:10 вносят в стеклянный флакон объемом 200,0см3, содержащий 100,0см3 мясопептонного бульона с 0,1% глюкозой (среда накопления). Смесь перемешивают и инкубируют при температуре 370С в течение 24-48 часов.

При наличии признаков роста на МПБ с 0,1% глюкозой (диффузное помутнение) петлей делают высев на мясопептонный агар (МПА) с 0,1% глюкозой для выделения чистой культуры. Посевы инкубируют при 370С в течение 24 часов.

При наличии роста зеленоватых, флюоресцирующих колоний, обладающих характерным запахом и окрашивающих среду, из них готовят мазки и окрашивают по Граму.

Колонии, подозрительные по морфологии (каждую отдельно), пересевают петлей на скошенный агар (МПА с 0,1% глюкозой) для накопления чистой культуры. Посевы инкубируют при 370С в течение 24 часов.