- •Инструкция к практическому занятию № 6
- •Задание №1
- •1.1.Изучите неспецифические и специфические показатели иммунного статуса. Иммунодиагностика. Неспецифические показатели иммунного статуса
- •Задание № 2
- •2.2.Изучите специфические показатели иммунного статуса. Специфические показатели иммунного статуса
- •3.1.Изучите серологические реакции их значение для диагностики инфекционных заболеваний.
- •Задание № 4
- •4.1. Изучите принцип постановки и учёт результатов реакций агглютинации
- •Реакция непрямой (пассивной) агглютинации
- •Задание № 5
- •5.1. Изучите принцип постановки и учёт результатов реакций преципитации
- •Задание № 6
- •6.1. Изучите принцип постановки и учёт реакции связывания комплемента (рск)
- •Задание № 7
- •7.1. Изучите принцип постановки и учёт реакции реакции нейтрализации экзотоксинов и вирусов
- •Реакция нейтрализации вирусов
- •Задание № 8
- •8.1.Изучите методы, основанные на использовании меченых антигенов и антител Методы, основанные на использовании меченых антигенов и антител
- •Задание № 9
- •9.1.Изучите кожные пробы и провокационные тесты кожные пробы и другие провокационные тесты
- •Задание № 10
- •10.1.Ответьте устно на контрольные вопросы Контрольные вопросы:
- •Литература:
Реакция непрямой (пассивной) агглютинации
Для получения феномена агглютинации антиген предварительно адсорбируют на корпускулярном носителе, которым служат инертные частицы (латекс, целлюлоза, полистирол, оксид бария и др.) или клетки (эритроциты барана, I (0) – группы крови человека).
В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный антигенный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика, установление серологического диагноза). Если нагрузить эритроциты антителами, то их можно применять для выявления антигенов.
Прямая и непрямая антииммуноглобулиновые реакции Кумбса используются для выявления «неполных» (неагглютинирующих) антител, которые образуются при различных заболеваниях: резус-конфликте, аутоиммунных заболеваниях, некоторых инфекциях. Для постановки этих реакций необходима антиглобулиновая сыворотка, которую получают путем иммунизации кролика иммуноглобулинами человека. Такая сыворотка содержит полные (бивалентные) антитела - антииммуноглобулины.
Прямая реакция: к отмытым эритроцитам крови больного добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если на эритроцитах есть неполные антитела (иммуноглобулины), что наблюдается при гемолитической анемии, резус-конфликте (эритроциты пуповинной крови новорожденного), то они агглютинируются.
Непрямая реакция выявляет свободные антиэритроцитарные антитела в сыворотке крови больного. К этой сыворотке добавляют отмытые эритроциты донора 0 (I) группы крови. Смесь инкубируют при температуре 37ºС в течение 30 мин и отмывают эритроциты. Затем к ним добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если в сыворотке больного были неполные антиэритроцитарные антитела, то наступит агглютинация.
Задание № 5
5.1. Изучите принцип постановки и учёт результатов реакций преципитации
В основе реакций преципитации лежит образование и выпадение в осадок комплексов антиген-антитело. В реакции участвуют растворимые антигены – преципитиногены (продукты микроорганизмов, тканей, химические вещества и лекарства). Антитела (преципитины), соединяясь с растворимыми антигенами, вызывают их агрегацию, что проявляется в помутнении прозрачных жидкостей или выпадении осадка (преципитата). Диагностические преципитирующие сыворотки выпускают с высоким титром антител. Их получают путем иммунизации лабораторных животных соответствующим антигеном. Титром преципитирующей сыворотки является минимальное количество антигена, которое данная сыворотка может преципитировать.
Иммунодиффузия в геле лежит в основе реакции преципитации по Манчини, которая используется для определения классов иммуноглобулинов в сыворотке крови.
Реакции преципитации используются для: определения антигенов бактерий, тканей человека и животных; диагностики некоторых инфекционных заболеваний; определения видовой принадлежности белка в судебной медицине; выявления примесей в мясных, рыбных, мучных изделиях в санитарной практике.
Реакцию преципитации можно проводить в жидкой и плотной среде ( в агаре или геле).
Реакция преципитации в жидкой среде (кольце преципитация)
Реакцию ставят в узких пробирках, куда вносят преципитирующую антисыворотку, а сверху осторожно наслаивают прозрачный раствор антигена. При положительной реакции через несколько минут на границе соприкосновения двух жидкостей появится кольцо преципитации. При малых количествах реагентов реакцию можно проводить в капиллярах (микро преципитация).
Реакция преципитации в агаре.
Сущность реакции в том, что антигены и антитела, помещенные в разные лунки в агаре, диффундируют навстречу друг другу и при взаимодействии образуют комплекс, который осаждается в виде линии преципитации.