ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЕ

ТЕМА: ОСОБО ОПАСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ООИ).

ЦЕЛЬ:

• Изучить методы исследования холерного вибриона

• Изучить специфическую профилактику холеры

• Изучить методы исследования возбудителя чумы

• Изучить специфическую профилактику чумы

• Ознакомьтесь с порядком одевания и снятия защитного костюма

Задание № 1 Методы исследования холерного вибриона

Холера – особо опасное инфекционное заболевание, протекающая по типу гастроэнтерита с профузным поносом и фонтанной рвотой, тяжелой интоксикацией и резким нарушением водно-солевого обмена. Вызывается холера двумя биоварами – Vibrio cholere и Vibrio eltor.

Взятие материала и бактериологическое исследование проводится в защитном костюме с соблюдением особых правил безопасности в специальных лабораториях.

При заболеваниях, вызванных холерным вибрионом в лабораторию доставляется следующий материал: испражнения, рвотные массы, желчь, пищевые продукты, вода; секционный материал (отрезки тонкой кишки, желчный пузырь с частью печени).

Подготовительный этап:

1. Подготовить рабочее место согласно правил работы в бактериологической лаборатории.

2. Подготовить емкости с дез. растворами для обеззараживания предметов, используемых в процессе работы, согласно инструкции.

3. Надеть защитный костюм.

Основной этап:

• Микроскопическое исследование. Из испражнений и рвотных масс готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют метиленовым спиртом или смесью Никифорова. Одни из них окрашивают по Граму, другие – обрабатывают люминесцирующими холерными сыворотками. Холерный вибрион под иммерсионным микроскопом имеют вид тонких изогнутых грамотрицательных палочек. В люминесцентном микроскопе вокруг них наблюдаются ободки яркого свечения. Параллельно с этим изучаются раздавленные и висячие капли. Изучив морфологию и подвижность вибрионов, дают первое заключение о наличии в материале возбудителя холеры.

2. Бактериологическое исследование. Испражнения высевают на элективную для холерного вибриона простую 1% щелочную пептонную воду. Посевы помещают в термостат при температуре 37⁰С. Через 5-6 часов инкубации в термостате на пептонной воде вырастает едва видимая пленка. Сразу же производят пересев пленки на вторую пептонную воду и щелочной мясо-пептонный агар. Далее среды пересевают на пестрый ряд и на заключительном этапе определяют гликозидазную и протеолитическую активность полученной культуры. Затем определяют чувствительность к полимиксину (выделенную культуру засевают на чашки петри с питательным агаром, содержащем 50 единиц полимиксина М или В в 1 мл питательной среды

3. Серологическое исследование. Иммунологические реакции используются для ретроспективной диагностики и определения напряженности противохолерного иммунитета. Для этого ставят реакцию агглютинации.

Задание № 2 Специфическая профилактика холеры

Проводится корпускулярной убитой вакциной Эль-Тор из штаммов Огава и Инаба. Вакцина вводится подкожно и создает слабый иммунитет продолжительностью 3-6 месяцев. Экстренная профилактика в очаге холеры осуществляется тетрациклином, перорально 300 тыс.едениц 4 раза в день в течение 5 суток.

Задание № 3 Методы исследования возбудителя чумы

Чума – особо опасная кровяная инфекция сопровождающаяся тяжелейшей интоксикацией, поражением лимфатических узлов, кожи, легких, кишечника и развитием сепсиса. Возбудитель чумы – Yersinia pestis.

Взятие материала и бактериологическое исследование проводится в противочумном костюме с соблюдением особых правил безопасности в специальных лабораториях.

При заболеваниях, вызванных возбудителем чумы (Yersinia pestis) в лабораторию доставляется следующий материал: пунктат из бубона (бубонная форма), отделяемое язвы после ее вскрытия (кожная форма), мокрота (легочная форма), испражнения (кишечная форма), кровь (септическая форма), секционный материал (кровь, внутренние органы, лимфатические узлы. В природных очагах чумы исследуются трупы грызунов и блохи, вода, пищевые продукты).

1. Бактериоскопическое исследование. Из материала готовят 3 мазка и фиксируют их в смеси Никифорова. 2 из них окрашивают по Граму и метиленовым синим, третий – обрабатывают иммунофлюоресцирующей сывороткой (прямая РИФ). Обнаружение в иммерсионном микроскопе внеклеточно расположенных мелких грамотрицательных палочек, интенсивно окрашенных метиленовым синим по полюсам, а в люминесцентном – желто-зеленых ободков свечения вокруг них позволяет выдать предварительное заключение о наличии возбудителя чумы.

2. Бактериологическое исследование. Содержимое бубона, гной язвы, мокроту и другой материал высевают в чашки Петри с питательным агаром. Кровь больного в количестве 5 – 10 мл засевают в 100 мл бульона. Выращивают культуру при трех значениях температуры 5,20,37⁰С, через 10-12 часов на пластинчатом агаре могут вырастать мутно-белые шероховатые колонии. В бульоне через 24 часа образуется рыхлая пленка. Чистую культуру чумных бактерий выделяют на скошенном агаре и дифференцируют по морфолого-культуральным и биохимическим признакам. Идентификацию проводят с помощью реакции РА, РНГА, ИФА.

3. Биологическое исследование производится путем заражения морских свинок патологическим материалом подкожно или внутрибрюшинно. Инфицированное животное погибает через 3-7 суток. При вскрытии трупа обнаруживают множественные геморрагии и некротические поражения внутренних органов. Посев гноя из пустул и капельки крови из сердца погибшей свинки на питательный агар дает рост чистой культуры возбудителя чумы.

Задание № 4 Специфическая профилактика чумы

Специфическая профилактика чумы проводится по эпидемическим показаниям живой ослабленной вакциной. Она вводится однократно накожно, внутрикожно, подкожно. Поствакцинальный иммунитет непродолжителен (не более 1 года) и недостаточно напряжен.