В лабораторных условиях количественное определение ферментов про­водят при оптимальном для данного фермента pH.

Ингибирование активности ферментов

Ингибиторами ферментов называют вещества, снижающие их актив­ность. Различают два основных класса ингибиторов ферментативной активно­сти - конкурентные и неконкурентные.

Химическая структура конкурентного ингибитора (I) обычно сходна со структурой субстрата. Поэтому ингибитор может обратимо связываться с ак­тивным центром фермента, образуя вместо Е-S комплекс Е-I, т.е. фермент- ингибиторный комплекс. При одновременном присутствии в реакционной смеси и субстрата, и ингибитора указанного типа они конкурируют за один и тот же каталитический центр фермента. Примером может служить ингибиро­вание сукцинатдегидрогеназы малонатом (I), конкурирующим за один и тот же центр с субстратом СДГ - сукцинатом. Поскольку конкурентное ингибирова­ние является обратимым, при повышении концентрации субстрата происходит ослабление ингибиторного действия.

Конкурентный ингибитор по химической структуре обычно ничем не напоминает субстрат, поэтому связывается с другим участком фермента (от­личным от каталитического центра) и конкуренции между S и I за активный центр фермента не происходит. Поскольку I и S связываются с разными цен­трами, возможно образование как комплекса Е-I, так и комплекса E-I-S. Ком­плекс E-I-S тоже распадается с образованием продукта, однако с меньшей ско­ростью, чем E-S.

Типы ингибирования легко распознаются с помощью анализа фермента­тивной активности методом Лайнуивера-Бэрка, т.е. построения графической зависимости 1/V от 1/[S]. График зависимости 1/V от 1/[S] - это прямая с на­клоном Км/Vmax, отсекающая на оси ординат отрезок 1/Vmax.

где 1 - норма, 2 - конкурентное ингибирование, 3 - неконкурентное ингиби­рование.