Метод очистки или выделения из смесей хлорогеновой кислоты

Измельченные листья лядвенца предварительно экстрагируют хлороформом (для удаления гутты и других экстрактивных веществ) и высушивают. Заливают их 10 мл 25-% серной кислоты и оставляют их ночь (для гидролиза флавоноидов и дубильных веществ). После отсасывания, промывания и высушивания остаток экстрагируют 20 часов в аппарате Сокслета абсолютным эфиром.

В экстракт постепенно переходят все содержащиеся в листьях лядвенца органические кислоты, в том числе и хлорогеновая кислота. Эта кислота плохо растворяется в эфире и из эфирного раствора либо выпадает в виде кристаллического продукта, либо отделяется в виде масла. В первом случае кристаллы отфильтровывают и кристаллизуют несколько раз из воды. Маслообразный продукт следует очистить обычным способом через свинцовые соли. С ацетатом свинца хлорогеновая кислота осаждается нацело и освобождается при обработке сероводородом

При омылении дает кофейную и хинную кислоты[25].

9.3 Оксикумарины – это природные соединения, в основе строения которых лежит скелет бензо- α- пирона (лактон цис-о-гидроксикоричной кислоты), связанный с ОН-группой. Заместитель (ОН-группа) может находиться как в бензольном, так и в пироновом кольце и одновременно в 2х кольцах[5].

Физико-химические свойства

Оксикумарины – кристаллические, бесцветные вещества, которые обладают запахом. При нагревании до 100°С сублимируются. Хорошо растворяются в органических растворителях: этиловом и метиловом спиртах, петролейном и диэтиловом эфирах, хлороформе, жирах , жирных маслах, а также в водных щелочных растворителях (особенно при нагревании) за счёт образования солей гидроксикоричных кислот. Большинство кумаринов проявляют характерную флуоресценцию в УФ-свете в нейтральных спиртовых, щелочных растворах и концентрированной серной кислоте в видимой части спектра. Этим особенно отличаются производные умбелиферона, которые имеют интенсивную ярко-голубую флуоресценцию в УФ-свете.

Методы выделения

Выделяют кумарины из ЛРС обычно экстракцией спиртом, хлороформом, бензолом, диэтиловым и петролейным эфирами.

Полученный после отгонки спирта густой экстракт для очистки и фракционирования обрабатывают растворителями: петролейным эфиром, бензолом и хлороформом. Для освобождения от пигментов и эфирного масла при промышленном получении кумаринов бррабатывают экстракты активированным углём.

Для очистки от сопутствующих веществ применяют также методы хроматографии на колонках сорбентов: оксида алюминия и силикагеля. Кумарины с колонок хорошо обрабатывать смесью органических растворителей.

Качественное определение

В циклической системе кумаринов, которая состоит из бензольного и гетероциклического α-пиронового цикла, заложены возможности для разнообразных химических реакций.

Одной из характерных особенностей кумаринов как лактонов является специфическое отношение к щелочам. Они медленно гидролизуются под действием разбавленной щёлочи и образуют жёлтый раствор солей кумариновой кислоты. При подкислении щелочных растворов или насыщении их СО₂ кумарины регенерируются до исходного состояния:

При взаимодействии солей диазония с кумаринами в слабощелочной среде диазорадикал присоединяется к С-6 кумариновой системы, т.е. в пара-положение к фенольному гидроксилу. При этом раствор приобретает красное окрашивание.

Производные кумаринов флоресцируют в ультрафиолетовом свете. Это свойство используется для хроматографического их выявления.

Количественное определение

При количественном определении кумаринов учитываются их физико-химические свойства.

Специфическое отношение кумаринов к щелочам лежит в основе метода нейтрализации (обратного титрования), которое применяется для применения как суммы кумаринов, так и индивидуальных веществ. Количественное определение кумаринов проводят также полярографическим методом. Флуоресценция в УФ-свете лежит в основе флуорометрического метода. Способность кумаринов давать стойкие окрашенные растворы с диазореактивом в щелочной среде используется в колориметрических методах.

Также используют спектрофотометрические методы. В основе их лежит измерение оптической плотности растворов кумаринов. Зачастую используют хроматографическое распределение кумаринов на бумаге и в тонком слое сорбента, поэтому эти методы принято называть хромато-оптическими[6].

9.4 Фосфолипиды – сложные эфиры спиртов (глицерина или сфингозина) и жирных кислот. Кроме того, в их состав входят остатки фосфорной кислоты и азотистые соединения ( холин, коламин или серин).

Лецетин. Одним из первых фосфоглицеридов, полученным еще в 1845 году из яичного желтка, был лецетин (lethitos – желток, греч.). В молекуле лецетина 2 гидроксила глицерина соединены двумя молекулами высших жирных кислот, из которых одна, как правило, ненасыщенная. Третий гидроксил соединяется с фосфорной кислотой, к которой присоединён аминоспирт – холин. Таким образом, лецетин относится к фосфатидилхолинам[22].

9.5 Стероиды – органические вещества растительного и животного происхождения, в основе которых лежит стеран, или циклопентанпергидрофенантрен.

Физико-химические свойства

β-ситостерин растворим в воде, обладает поверхностной и гемолитической активностью.

Исследование

β-ситостерин определяют при помощи распределительной хроматографии (БХ, ТСХ). После высушивания хроматограммы обрабатывают раствором уксусного ангидрида в серной кислоте.

Содержание β - ситостерина определяют гравиметрическим или физико-химическим методом[18].