8. Сбор и сушка сырья

Лекарственным сырьем является трава. Наиболее выраженные лечебные свойства проявляются при сборе растений в июне, наименьшие - в июле и особенно в сентябре. Траву срезают серпом или ножом на уровне нижних листочков.

Сушат на воздухе в тени, в хорошо проветриваемых помещениях или в сушилах. Воздушно-теневая сушка проводится на приспособленных чердаках, лучше под железной крышей, в специально оборудованных помещениях. Главные требования – максимальное притягивание теплоты солнечных лучей и качественная вентиляция. Места для сушки обычно оборудуют стеллажами с полотном или металлической сеткой. Сырьё раскладывают на рамках тонким слоем, на верхних полках то, которое необходимо быстро высушить.

Конвективная сушка осуществляется в сушилках периодического или беспрерывного действия. Численные конструкции сушилок могут быть разделены на сушилки стационарные и переносные.

Стационарные сушилки имеют 2 отдела – сушильную камеру и изолированное отапливаемое помещение. Сушильная камера оснащена стеллажами и сушильными рамами, системой воздушных трубок и приточно-вытяжной вентиляцией. В трубах циркулируют горячая вода, пар или топливные газы.

Переносные сушилки бывают разной конструкции. По характеру загрузочного и разгрузочного материала и условием проведения самого процесса сушки сушилки подразделяются на 2 типа: периодического и беспрерывного действия. К сушилкам периодического действия относятся в основном камерные, паровые, огненные, солнечные и электросушилки. А к сушилкам беспрерывного действия – ленточные сушилки[2].

Траву лядвенца рогатого при ограниченных объёмах заготовки чаще всего связывают в маленькие пучки и развешивают на верёвках в хорошо проветриваемых помещениях или на чердаках под железной крышей.

Хотя такой способ удобен, но при даже самых благоприятных условиях листочки внутри пучка часто темнеют. Лучше сушить траву, раскладывая тонким слоем на стеллажах. Правильно высушенные листочки и трава легко перетираются на ладони, а главное – жилки листьев и стебля травы не ломаются[24].

9. Химический состав

Впервые проведено комплексное фитохимическое исследование надземных органов лядвенца рогатого (Lotus corniculatus). Установлено наличие различных групп биологически активных веществ: флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов, дубильных веществ, аскорбиновой кислоты, фосфолипидов, стероидов. Установлено количественное содержание флавоноидов - 1,75 %, оксикоричных кислот - 1,35 %, дубильных веществ - 0,49 %, аскорбиновой кислоты - 0,08 %.

С использованием методов жидкостной экстракции, колоночной хроматографии на полиамиде и силикагеле, препаративной хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента из надземной части лядвенца рогатого выделено 24 индивидуальных вещества: 5 оксикоричных кислот, 4 оксикумарина, 13 флавоноидов, 1 вещество фосфолипидной и 1 стероидной природы.

На основе физико-химических свойств исходных веществ и продуктов их химических превращений, данных УФ- ИК-, ПМР-спектроксопии, сравнением с достоверными образцами выделенные соединения идентифицированы как оксикоричные кислоты: n-кумаровая, кофейная, феруловая, хлорогеновая, неохлорогеновая; оксикумарины: изоскополетин, скополетин, умбеллиферон, эскулетин; флавоноиды: изорамнетин, 3-метилкверцетин, кемпферол, кверцетин, популин, астрагалин, трифолин, изокверцитрин, кверцитрин, гиперозид, морин, морин-3-О-β-D-галактопиранозид, кемпферол-3-О-β-D-галактопиранозил-7-О-β-D-глюкопиранозид; фосфолипиды: лецетин; стероиды: β-ситостерин. Астрагалин - новое вещество для вида Lotus corniculatus. Кроме того, морин впервые выявлен в семействе бобовых, а морин-3-О-β-D-галактопиранозид является новым природным соединением.

Получена липофильная фракция из травы лядвенца рогатого. Изучены органолептические и некоторые физико-химические свойства липофильной фракции, а также определено количественное содержание ее, которое составляет 7,23 %. Определено содержание хлорофиллов - 1,22 ± 0,03 %, каротиноидов - 28,4 ± 0,58 мг%.

Газожидкостной хроматографией обнаружено 12 жирных кислот, из которых 8 насыщеных и 4 ненасыщеных, из них преобладают ненасыщеные линоленовая (35,18 %), линолевая (16,27 %), олеиновая (3,56 %) и насыщеные пальмитиновая (30,91 %) и стеариновая (3,8 %) кислоты.

Также растение содержит каротин, витамин С и аминокислоту канаванин.

В семенах обнаружены галактоза, манноза, глюкоза, фруктоза. Цветки содержат незначительное количество горького ядовитого гликозида; в сене и силосе ядовитость пропадает[3].

9.1 Флавоноиды – это биологически активные вещества, в основе которых лежит дифенилпропановый фрагмент, с общей формулой С₆ – С₃ – С₆.

Название происходит от латинского слова flavus – жёлтый, потому что первые выделенные флавоноиды имели жёлтое окрашивание[4].

Физико-химические свойства

Флавоноиды – кристаллические соединения с определённой температурой топления. Флаваны, изофлаваны, флавонолы и др. – бесцветные кристаллы; флавоны, флавонолы, халконы и ауроны – жёлтые.

Катехины оптически активны. Флаваноны и флаванонолы – лабильные соединения. Под действием реагентов, которые имеют окислительные свойства, они могут переходить соответственно в халконы и лейкоантоцианидины[7].

Методы выделения и исследования

Зачастую для выделения флавоноидов из растительного сырья используют этанол или метанол. Спиртовые вытяжки выпаривают до водного остатка, разводят водой и обрабатывают хлороформом для отделения липидов и липоидов: хлорофилла, каротиноидов, восков и т.д. Очищенный водный остаток последовательно обрабатывают диэтиловым эфиром, этилацетатом, пропанололом, бутанолом, получая фракции агликонов, монозидов, биозидов, триозидов соответственно.

Для разделения флавоноидов на индивидуальные компоненты используют колонковую хроматографию на силикагеле, полиамиде, целлюлозе. Колонку обрабатывают смесью хлороформа со спиртом, постепенно увеличивая долю спирта в смеси.

Качественные реакции

Цианидиновая проба является специфической реакцией на данную группу веществ. Флавоноиды восстанавливаются водородом во время выделения его при взаимодействии металлического магния с концентрированной соляной кислотой, вследствие этого образуются окрашенные антоцианидины.

Изофлавоноиды, флаваны дают жёлтое окрашивание, иногда – красное. Флавонолы – от малинового до ярко-красного.

Реакция с борно-лимонным реактивом. 5-Оксифлавоны и 5-оксифлавонолы образуют с борной кислотой в присутствии лимонной или щавелевой кислот комплекс ярко-жёлтого цвета с жёлто-зелёной опалесценцией. 3-Оксифлавоны без гидроксильного радикала при С-5 не дают этой реакции.

Реакция с пятихлористой сурьмой. Раствор соли в четыреххлористом углероде с флавоноидами образует красное и ярко-жёлтое окрашивание. Это объясняется тем, что SbCl₅ по силе действия похож на серную кислоту и вызывает соответственный галохромизм. Халконы дают красное, красно-синее окрашивание, флавоны – жёлтое.

Реакция азосоединения. С диазотированным сульфаниламидом флавоноиды, которые имеют свободную гидроксильную группу в положении С-7, образуют окрашенные продукты азосоединения. Флавоны, флаваноны, флаванолы, флаванололы дают жёлтое окрашивание с раствором аммиака. Халконы и ауроны имеют красно-пурпурное окрашивание.

Реакция с растворами щелочей. Практически все соединения этой группы образуют окрашивания со щелочами благодаря вторичным превращениям. Флавононы при взаимодействии с разбавленными щелочами превращаются в бесцветные или желтоватые растворы, которые со временем становятся ярко-жёлтыми или красными вследствие их изимеризации в халконы. Халконы и ауроны мгновенно образуют со щелочами красные или пурпурные растворы. Эта реакция является для них специфической, так как ни одна другая группа флавоноидов её не даёт. Флавоны и флавонолы образуют со щелочами жёлтые, а полиоксифлавонолы (6 и больше групп) – красные или синие растворы.

Реакция с концентрированной серной кислотой. Много кристаллических флавоноидов растворяются в серной кислоте и образуют окрашенные растворы. Флавоны и флавонолы образуют при этом оксониевые (флавилиевые) соли.

Флаваноны приобретают в серной кислоте ярко-жёлтое или красное окрашивание, которое обусловлено появлением солей соответственных халконов.

Халконы и ауроны с серной кислотой образуют интенсивное – от красного до малинового цвета окрашивание, которое объясняется появлением хиноидных структур.

Реакция с раствором ванилина в концентрированной хлористоводородной кислоте. В этом случае катехины дают красно-малиновое окрашивание.

Реакция со средним ацетатом свинца. При взаимодействии с этим реактивом флавоноиды выпадают в осадок. Цвет осадка с флавонами – жёлтый, с ауронами – красный, с антоцианами – красный или синий.

Хроматографическое обнаружение флавоноидов. Для разделения и обнаружения флавоноидов используют бумажную хроматографию (БХ) и хроматографию в тонком слое сорбента (ТСХ). В УФ-свете при длине волны 360 нм большинство флавоноидов флуоресцируют: флавоны, флавонол-3-гликозиды, халконы – тёмно-красным цветом; флавонолы и их гликозиды – жёлтым, жёлто-зелёным; куместаны – ярко-голубым, бирюзовым. Другие классы флавоноидов не флуоресцируют.

Хроматограммы обычно проявляются хромогенными реактивами, которые используются для качественных цветных реакций. Это спиртовые растворы щелочей, гидрокарбоната натрия, алюминия хлорида и др[6].

Количественное определение

Для количественного определения флавоноидов предложено много методов: весовые, объёмные, флуорометрические, полярографические, фотоколориметрические. Но наибольшее значение имеет спектрографический метод. Он базируется на реакциях комплексообразования с ионами разных металлов, реакции азосоединения, с борной кислотой с последующим определением оптической плотности в УФ-свете при соответствующей длине волны[4].

9.2 Оксикоричные кислоты (п-кумаровая, кофейная, феруловая и синаповая) в различных комбинациях, в свободном виде или в составе гликозидов и сложных эфиров содержатся во многих высших растениях. Наиболее распространены в природе кофейная кислота и ее производные (хлорогеновая и ее изомеры), оказывающие противовоспалительное и желчегонное действие. Сумма кофейной, хлорогеновой, феруловой, кумаровой и других кофеилхинных кислот оказывает гипоазотемический эффект, усиливает функцию почек, стимулирует антитоксическую функцию печени.

Эфиры коричной кислоты

Хлорогеновая кислота (5-кофеолхининовая кислота)

Коричные кислоты

Феруловая R1-R2-H, R3-OH, R4-OCH3

п-Кумаровая R1-R2-R4-H, R3-OH

Кофейная R1-R2-H, R3-R4-OH [6]