Для визначення активності антибіотиків на твердих поживних середовищах найбільш популярний метод радіальної дифузії антибіотику в агар, який попередньо був

засіяний тест-культурою . Він заснований на явищі дифузії антибіотику в поживне

31

Суть метода:

1.В чашки Петрі заливають 2 шари агаризованого середовиша – нижній без тест- культури, верхній – із суспензією тест- культурою в засівній дозі в 1мл агару.

2.Тест-культури: для хлортетрацикліну – Bacillus subtilis var. L2.

3. За допомогою трафарету під кутом 60º встановлюють 6 стерильних циліндрів із нержавіючої сталі або алюмінію (циліндри також стандартні – однакова маса, розмір - 10 мм заввишки і внутрішній діаметр 6 мм).

32

Метод з використанням металевих циліндрів

Активність антибіотиків визначають шляхом порівняння ступеню пригнічення росту чутливих мікроорганізмів в результаті дії випробовуваного антибіотика і стандартного зразка у відомих концентраціях. Робочими стандартами при дослідженні антибіотику служать спеціальні чисті зразки препаратів, активність яких встановлюється за міжнародними стандартними препаратами. Робочі стандарти випускають і зберігають в запаяних ампулах з нейтрального скла і зберігають при температурі не вищій за 0ºС.

33

4. В циліндри кожної чашки вносять по 0,1 мл стандартного розчину і розчину, що досліджується на антибіотичну активність.

5.Чашки закривають і протягом 2 год витримують при кімнатній температурі. За цей час відбувається дифузія антибіотику в агар.

6.Чашки встановлюють на інкубацію (температура 36-38ºС протягом 18 год).

7.Вимірють діаметри зон пригнічення росту у випадку стандартного і досліджуваного препарату.

8.За допомогою спеціальних програм роблять необхідні підрахунки антибіотичної активності.

34

Метод з використанням металевих циліндрів

Зони пригнічення росту тест-культури

Металеві циліндри

35

Метод з використанням лунок в агарі

Суть метода:

1. В агаровій пластинці засіяною тест-культурою роблять лунки діаметром 8 мм, використовуючи

спеціального крючка. В одні лунки вносять розчин досліджуваного антибіотика, в інші – стандартні розчини антибіотика.

Перевагою цього методу є відсутність необхідності стерилізації металевих циліндрів.

36

Метод з використанням лунок в агарі

8 мм

Метод з використанням дисків фільтрувального паперу

На поверхню поживного середовища засіяного тест-культурою розкладають диски фільтрувального паперу змочені досліджуваним розчином антибіотика та його стандартними розчинами.

Промисловістю випускаються готові диски з антибіотиками.

38

Схема метода

8 мм

Турбідиметричні методи

Методи, що базуються на реєстрації відповідних продуктів метаболізму тест-організму

Методи, які базуються на виділенні тепла або СО2 в довкілля.

Вплив антибіотика на біолюмінесценцію.

Хімічні та фізико-хімічні методи визначення антибіотиків

Опрацювати самостійно !!!

40