Метод паперових дисків
Диски з фільтрувального паперу діаметром 8 мм стерилізують в автоклаві.Стерильний диск беруть пінцетом і змочують в досліджуваній культуральній рідині (або екстракті). Після цього диски накладають на поверхню пожив-ного агару, попередньо засіяного культурою тест-організму. Чашку з тест-організмом і паперовими дисками культивують за оптимальної температури 20-24 год.
За присутності антибіотичної речовини в
культуральній рідині навколо диска утворюєть-ся зона затримки росту тест-організму.
11
Недолік методу:
використання одного поживного середовища для досліджуваного організму і тест-організмів. Іноді для утворення антибіотика і росту продуцента необхідне середовище, що відрізняється від оптимального для росту тест-організмів
12
Метод агарових блоків
Досліджуваний організм висівають суцільним газоном на поверхню агаризованого середови-ща. Середовище оптимальне для росту і утворення антибіотика . Вирізають 3-5 цилінд-
рів і перенося- на тестову
культуру. Наявність відсут- ності зон росту характеризує
антибіотичну
активність
13
Визначення антивірусної дії антибіотиків
Віруси – внутрішньоклітинні паразити і тому не можуть розвиватися у вигляді чистої культури поза клітинами хазяїна. Це змушує використовувати для пошуку противірусних речовин методи, що відповідають їх особливостям.
Метод тканевих культур
Найбільш зручним є метод використання шматочків хориоаллантоїдної тканини курячого ембріону.
14
15
Метод з використання листків рослин
Для визначення антивірусної активності використовують також відносно простий метод
з’ясування антивірусної дії антибіотиків стосовно
вірусу тютюнової мозаїки.
1. |
Вирощують м/о на агарі; |
8 мм |
2. |
Вирізають агарові циліндри |
|
3. На лист дурману прикріплюють желатиной циліндри.
4.Лист дурману інокулюють вірусом табачной мозаїки.
16
5. Якщо циліндр містить антибіотик – некрози не утворються
17
У разі культивування м/о на рідкому середовищі - його змішують з вірусом і інокулюють на поверхню листа
б
а
Листки тютюну, інокульовані вірусом тютюнової |
|
мозаїки: а – половина листка, інокульована сумішшю |
|
віруса і культуральної рідини, антивірусна активність |
|
якої вивчається; б – половина листка, інокульована |
|
вірусом. |
18 |
Визначення протипухлинної дії антибіотиків
Використовують безпосередньо пухлинні клітини. З цією метою використовують методи, що базуються на використанні експериментальних тварин, культури тканин чи вільноживучих в окремих полостях організму пухлинних клітин (асцитні клітини), але кінцевий висновок про антипухлинну дію антибіотика надають лише після дослідів на тваринах.
19
|
• |
|
Використання |
|
|
|
експериментальних тварин |
||||
• |
В якості тест-об’єкта використовують |
||||
|
клітини асцитного раку Ерліха у мишей. |
||||
|
Суспензію |
асцитних |
ракових |
клітин |
|
|
змішують |
з |
рівним |
об’ємом |
|
|
досліджуваного |
|
антибіотичного |
||
|
препарата |
і |
суміш |
поміщують в |
|
рефрижератор при 4 С на 4 год, після чого її перевивають мишам підшкірно.
20