Для контрольних тварин замість досліджуваного препарату використовують фізіологічний розчин. Через 10 днів мишей забивають і визначають наявність пухлини і її розміри. Якщо досліджувана речовина вбиває асцитні ракові клітини, то вони відповідно не утворюють пухлин.
Тест-об’єктом можуть бути також інші пухлинні клітини.
21
Використання мікроорганізмів для пошуку протипухлинних антибіотиків
Обмін речовин в пухлинних клітинах відрізняється від обміну нормальних клітин. Зокрема, різниця визначається інтенсивністю дихання, в пухлинних клітинах воно значно знижене. Виходячи з цього було висунуто припущення про можливість використання в якості тест-об’єктів для пошуку протиракових антибіотиків мутантних мікроорганізмів зі зниженим коефіцієнтом дихання.
22
Після оброблення клітин стафілококів, кишкової палички та дріжджів було отримано мікроорганізми, коефіцієнт дихання яких становив
20-80% порівняно з вихідними культурами.
Використання рослинної тест-системи
Бактеріальний рак – одне з найбільш поширених і шкідливих захворювань рослин в багатьох країнах світу. Широке розповсюджен-ня бактеріального раку та його велика шкідливість вимагає пошуку нових ефективних методів боротьби з ним.
23
Серед усіх пухлин рослин тільки
корончасті гали, зумовлені вірулентними штамами Agrobacterium tumefaciens,
мають характерні біологічні особливості злоякісних пухлин, а саме: метаболітну автономію, гормононезалежний ріст і трансплантабельність. Тому їх можна вважати справжніми злоякісними пухлинами рослин – фітобластомами.
24
Для скринінгу протипухлинних речовин використовують індукцію
пухлиноутво-рення за допомогою A. tumefaciens на різних тест-рослинах:
експлантатах запасаючих органів моркви, картоплі та топінамбуру . Перевагами використання такої моделі
пухлиноутворення є висока специфічність, незначна, порівняно з тваринними системами, тривалість проведення досліду
25
Використання моделі індукції
пухлиноутворення за допомогою
Agrobacterium tumefaciens дає можливість здійснювати пошук сполук із протипухлинною активністю з мінімальними витратами та зменшити потребу у тваринних системах, які вимагають значних витрат коштів
26
.
Розвиток пухлин на експлантатах картоплі: |
|
1 – експлантати, оброблені протипухлинною |
|
речовиною, 2 – не оброблені експлантати. |
27 |
Методи кількісного визначення антибіотиків
Для визначення антибіотичної активності використовують хімічні, фізичні та біологічні методи.
Найбільше значення мають біологічні методи, оскільки лише прямий вплив антибіотиків на мікроорганізми дозволяє виявити антимікробну активність.
Недоліками біологічних методів є тривалість проведення аналізів, залежність точності від багатьох зовнішніх факторів.
28
Метод послідовних розведень
використовується для визначення кількості антибіотика в культуральній рідині, розчинах чи екстрактах.
Суть метода:
1.Готують стерильне прозоре поживне середовище та розливають у пробірки.
2.Вносять антибіотик у певній концентрації.
3.Готують тест-культуру м/о и вносять до пробірок.
4.Інкубують пробірки в термостаті.
5.Визначають наявність чи відсутність росту тест-організма.
29
Методом послідовних розведень отримують достовірні результати у разі:
•дотримання умов стерильності проведення дослідів;
•використання постійних середовищ;
•внесення однакової кількості клітин тест-
організму. |
30 |
|