Диагностические и лечебно-профилактические бактериофаги

Применяемые на практике препараты бактериофагов представляют собой фильтрат бульонной культуры соответствующих микробов, лизированных фагом, содержащий живые частицы фага, а также растворённые антигены бактерий, освободившиеся из бактериальных клеток при их лизисе. Полученный препарат - жидкий бактериофаг должен иметь вид совершенно прозрачной жидкости жёлтого цвета большей или меньшей интенсивности.

активность, т.е. вирулентность.

Для применения с лечебно-профилактическими целями фаги могут выпускаться в форме таблеток с кислотоустойчивой оболочкой. Таблетированный сухой фаг более стабилен при хранении и удобен при применении. Одна таблетка сухого бактериофага соответствует 20-25 мл жидкого препарата. Срок годности сухого и жидкого препарата - 1 год. Жидкий бактериофаг следует хранить при температуре + 2 +10 С, сухой- не выше +1°С, но его можно хранить в холодильнике и при отрицательной температуре.

Принятый внутрь бактериофаг сохраняется в организме в течение 5-7 дней. Как правило, прием бактериофага не сопровождается какими-либо реакциями или осложнениями. Противопоказаний к приёму нет. Применяются в виде орошений, полосканий, примочек, тампонов, инъекций, а также вводят в полости - брюшную, плевральную, суставную и в мочевой пузырь.

Фаги могут применяться в качестве диагностических препаратов для установления рода и вида бактерий, выделенных в ходе бактериологического исследования (эпидемиологическое маркирование). Диагностические фаги выпускаются как в жидкой, так и сухой форме в ампулах. На ампулах указан титр, ДРТ (доза рабочего титра) или тип. Перед началом работы сухой бактериофаг разводится. Применяют в реакции фаголизабельности (метод Отто) или фаготипирования.

Схема описания бактериофагов:

Название препарата ………………….

Классификационное положение: бактериофаг

Действующее начало: бактериофаг

Получение: фильтрат фаголизата бульонной культуры соответствующего

микроорганизма

Применение: лечебно-профилактические – для лечения и профилактики

соответствующих инфекций;

диагностические – для идентификации микроорганизмов

Способ применения:

Действие бактериофага на микробную культуру в жидкой среде и на плотной среде

Лизирующее действие бактериофага выражается в полном

просветлении бульонной культуры или в образовании на засеянных плотных средах пустых прозрачных участков среди густого налёта культуры на поверхности среды (стерильные пятна)

Метод Отто (стекающая капля)

Делают густой посев газоном исследуемой культуры. Через 5-10 мин после посева на подсушенную поверхность питательной среды наносят жидкий диагностический фаг. Чашку слегка наклоняют, чтобы капля фага растеклась по поверхности агара. Чашку помещают в термостат на 18-24 часа. Учёт опыта производят по полному отсутствию роста культуры в месте нанесения капли фага.

Опыт на жидкой питательной среде.

Делают посев исследуемой культуры в две пробирки с жидкой средой. В одну пробирку («О») добавляют петлёй диагностический бактериофаг. Через 18-20 часов в пробирке, куда бактериофаг не добавлялся («К»), наблюдается сильное помутнение бульона — произошел рост посеянной культуры. Бульон в пробирке, куда был добавлен бактериофаг, остался прозрачным вследствие лизиса культуры под его влиянием.

Метод титрования фага

Титрование фагов проводится на культурах бактерий в жидких и плотных средах с целью определения их активности.

Метод Аппельмана

Данный метод основан на внесении одной и той же дозь'1 культуры гомологичных микробов в различные концентрации титруемого бактериофага в мясо - пептонном бульоне.

Готовят десятикратные разведения исследуемого бактериофага в МПБ. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл МПБ. В 1-ю пробирку добавляют 0,5 мл исследуемого фага. Тщательно перемешивают и переносят в последующие пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответствующего разведения фага с уменьшением его концентрации в десять раз.

Получают разведения 10^-1 степени и т.д. до 10^-9 степени. После этого в пробирки вносят по 1 капле суточной культуры соответствующих бактерий. За титр бактериофага принимают то его максимальное разведение, при котором наблюдается полный лизис культуры.