1.2. Микробиологические методы исследования

СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ

Спинномозговую жидкость исследуют во всех случаях

предполагаемого менингита как первичного процесса, так и

осложнения после черепно-мозговой травмы, нейрохирургической

операции или наличия инфекционного очага в организме.

Наиболее частыми возбудителями менингита у новорожденных

являются: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus

mirabilis, Serratia marcescens, Enterobacter, Pseudomonas

aeruginosa, Streptococcus (гр. В, D), Listeria monocitogenes. У

детей раннего возраста: Neisseria meningitidis, Streptococcus

pneumoniae, Haemophilus influenzae, Mycobacterium tuberculosis.

У лиц пожилого возраста и ослабленного контингента больных

возникновение менингита может быть как результатом заражения N.

meningitidis, S. pneumoniae, так и проявлением внутригоспитальной

инфекции, вызванной H. influenzae, S. pneumoniae, Salmonella.

Этиологическим фактором менингитов, развившихся после

черепно-мозговой травмы или как осложнение после

нейрохирургических операций, чаще всего являются Staphylococcus

aureus, Staphylococcus epidermidis, S. pyogenes, P. aeruginsa, E.

coli, K. pneumoniae, S. marcescens.

Как правило, менингит вызывается только одним микроорганизмом.

Взятие исследуемого материала

Для бактериологического анализа обычно используют

спинномозговую жидкость, взятую при люмбальной пункции или при

пункции боковых желудочков мозга.

Взятие спинномозговой жидкости проводят как можно раньше,

желательно до начала антибактериального лечения.

Взятие спинномозговой жидкости производит врач. Проба

отбирается со строгим соблюдением правил асептики.

Свежевзятый ликвор из шприца без иглы над спиртовкой вносят в

стерильную, желательно центрифужную пробирку в количестве 1-2 мл.

Ликвор для исследования немедленно доставляют в лабораторию, где

тотчас, пока спинномозговая жидкость теплая, ее подвергают

анализу, т.к. некоторые микроорганизмы, например, N. meningitidis,

при охлаждении погибают. При отсутствии такой возможности материал

сохраняют при 37°С в течение нескольких часов. Для пересылки

материала используют изотермальные ящики, грелки, термос или любую

другую упаковку, где поддерживается температура около 37°С.

Микроскопия исследуемого материала

Спинномозговую жидкость центрифугируют 5 минут при 3500 об/мин

и из осадка делают мазки. Если присланная жидкость мутная, мазки

готовят без центрифугирования.

1. При исследовании ликвора с неопределенным возбудителем или

на менингококк мазки после высушивания фиксируют на пламени и

окрашивают метиленовым синим или по Граму в модификации Калины.

Окраска по Граму в модификации Калины препаратов из ликвора и

культур.

Приготовление растворов

А. 0,5% спиртовой раствор бриллиантового зеленого:

бриллиантового зеленого - 0,05 г;

спирта этилового чистого - 10,0 мл.

Хранить во флаконе с резиновой пробкой.

Б. Основной реактив:

0,5% спиртовой раствор йодистого калия - 96 мл;

5% спиртовой раствор основного фуксина - 2 мл;

5% спиртовой раствор йода - 2 мл.

0,5% спиртовой раствор йодистого калия готовят при

подогревании в водяной бане. После полного растворения навески

йодистого калия в спирте раствор соединяют с раствором фуксина и

йода. Полученную смесь хранят во флаконе из темного стекла с

притертой или резиновой пробкой.

В. Раствор спирта:

спирта этилового 96% - 30 мл;

дистиллированной воды - 70 мл.

Г. Водный раствор фуксина:

основной фуксин Циля - 1 мл;

дистиллированной воды - 9 мл.

Раствор готовят ежедневно.

Окраска мазка

На обезжиренное стекло наносят каплю воды. В ней суспендируют

культуру и туда же вносят петлей каплю раствора бриллиантовой

зелени. После высыхания препарат фиксируют над пламенем. Затем на

препарат наливают основной реактив на 1,5-2 минуты, после чего

краску сливают и стекло в наклонном положении промывают водой.

Далее препарат в наклонном положении промывают в спирте до

отхождения облачков краски и немедленно отмывают водой. Затем

производят докрашивание препарата водным раствором фуксина в

течение 2 минут, окончательную промывку водой и подсушивание. При

микроскопировании грамотрицательные бактерии выглядят

ярко-розовыми, грамположительные - зеленовато-черными или

темно-фиолетовыми. Желательно для контроля на каждом стекле делать

мазок культур стафилококков или кишечной палочки.