7. Среда для определения продукции

полисахаридов на агаре с 5% сахарозы

Принцип: способность отдельных видов нейссерий образовывать

крахмалоподобные вещества при расщеплении сахарозы.

Ингредиенты:

питательный агар,

сахароза,

сыворотка,

раствор Люголя.

Для приготовления раствора Люголя берут калия йодистого - 2 г,

дистиллированной воды - 10 мл, йода кристаллического - 1 г. Смесь

хорошо закупоривают, оставляют на сутки. Затем добавляют

дистиллированной воды 300 мл.

Приготовление среды. К расплавленному и охлажденному до 50°С

питательному агару с 5% сахарозы добавляют 20% сыворотки и

разливают в чашки Петри.

Ход исследования. Производят густой высев культуры петлей, по

секторам. На одну чашку можно посеять несколько штаммов. Через 48

часов инкубации в термостате на поверхность выросшей культуры

наносят 1 каплю водного раствора Люголя. Реакция считается

положительной при образовании бурого окрашивания выросшей

культуры.

8. Среда для постановки йодного теста у N. sicca

Принцип: способность N. sicca на средах с казеиновым

гидролизатом образовывать крахмалоподобное вещество.

Ингредиенты:

0,25% водный раствор йода,

натрий хлористый (NaCl).

Приготовление. Питательный агар готовят на бульоне из

казеинового гидролизата (аминный азот 1,6 г/л) с добавлением

1,5-2% агара, 0,5% NaCl, рН 7,2-7,4, стерилизуют при 1 атм. 15

мин.

Ход исследования. Реакцию на йод определяют на культуре,

выращенной бляшками на указанном выше агаре. На культуру

пастеровской пипеткой наносят 1 каплю 0,25% раствора йода в

дистиллированной воде. Положительная реакция характерна только для

вида N. sicca, она проявляется появлением синего окрашивания

бактериальной массы.

9. Полужидкая среда Хью-Лейфсона

с индикатором Андреде

Принцип (см. раздел 3.2.).

Ингредиенты:

пептон - 0,2 г,

натрий хлористый - 0,5 г,

калий фосфорнокислый, двузамещенный - 0,03 г,

углевод (лактоза, глюкоза, сахароза, мальтоза, фруктоза) -1 г,

агар - 0,3 г,

индикатор Андреде - 2 мл,

вода дистиллированная - 100 мл.

Для приготовления индикатора Андреде берут 1 г кислого

фуксина, растирают в ступке с 64,0 мл 1 моль/л едкого натра и

добавляют 400 мл дистиллированной воды. Раствор на сутки ставят в

термостат при 37°С, двое суток выдерживают на свету и затем

сохраняют в темном месте. Индикатор должен быть бесцветным. Для

приготовления среды к воде добавляют пептон, натрий хлористый и

агар. Смесь подогревают до расплавления агара. Затем добавляют

калий фосфорнокислый двузамещенный и один из углеводов. Продолжают

кипятить 2-3 минуты. Смесь подщелачивают 20% раствором едкого

натра до рН 7,2-7,4, доводят объем среды до первоначального и

добавляют 2 мл раствора индикатора Андреде. Среду фильтруют через

ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют

текучим паром 3 дня подряд по 20 минут.

Ход исследования. Посев уколом на столбики полужидкой среды

Хью-Лейфсона, содержащей глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу,

фруктозу. О разложении углеводов судят по появлению розового

окрашивания через 18-24 часа со времени посева, иногда окрашивание

появляется через 48 часов.

Биохимические методы исследования

Определение редукции нитратов и нитритов