Работа 4. Приготовление мазка. Простая окраска Цель работы: овладеть методикой приготовления мазка; изучить морфологические формы бактерий

Ход работы:

1. На обезжиренное стерильное предметное стекло по центру нанести каплю воды и перенести в нее стерильной микробиологической петлей небольшое количество исследуемого материала с плотной питательной среды (например, пленку Bac. mesentericus с ломтика картофеля).

2. Получившуюся суспензию равномерно размазать петлей на площади 2-3 см² возможно более тонким слоем. Простерилизовать петлю обжиганием в пламени спиртовки.

3. Препарат высушить на воздухе при комнатной температуре.

4. Зафиксировать мазок. Цель фиксации: Микроорганизмы погибают, лучше прокрашиваются красителем, прикрепляются к стеклу. Физическая фиксация. Для этого препарат 2-3 раза медленно провести через пламя спиртовки, держа предметное стекло мазком вверх. Химическая фиксация. На мазок нанести смесь Никифорова на 5-7 мин.

5. Охладить предметное стекло до комнатной температуры.

6. Предметное стекло положить на мостик над ванночкой и залить красителем – фуксином или метиленовым синим на 1-3 минуты.

7. По окончании окраски препарат промыть водой, держа стекло в чуть наклонном положении над ванночкой.

8. Снять избыток воды с предметного стекла (не касаясь мазка) фильтровальной бумагой и досушить на воздухе.

9. Для микроскопирования нанести на мазок каплю иммерсионного масла и рассмотреть под микроскопом с объективом МИ-90^х. В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения светлое и чистое, окрашен только клетки микроорганизмов.

10. Просмотреть приготовленные препараты, сделать зарисовки микроорганизмов, обращая внимание на форму, взаимное расположение клеток и на соотношение размеров различных бактерий.

Задание: Приготовить фиксированные и окрашенные микропрепараты микроорганизмов:

1. Культуры картофельной палочки.

2. Микрофлора молока.

3. Микрофлора зубного налета.

Рассмотреть микропрепараты при увеличении микроскопа МИ-90^х , сделать рисунки с обозначениями.

Занятие 3 Работа 1. Анализ микрофлоры воздуха

Санитарно-гигиеническое состояние воздуха помещений определяется двумя показателями:

микробным числом – содержанием общего числа микроорганизмов в 1 м³ воздуха;

числом санитарно-показательных бактерий – гемолитических стрептококков и стафилококков в 1 м³ воздуха.

Санитарно-гигиенические показатели воздуха

Жилое невентилируемое помещение		Микробное число	Число гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха
Сезон года	Пробы воздуха
Лето	чистый	до 1500	до 16
	загрязненный	>2500	>36
Зима	чистый	до 4500	до 36
	загрязненный	>7000	>124

Дата закладки опыта-

Ход работы:

1. В чашки Петри разлить расплавленный на водяной бане мясо-пептонный агар (МПА).

2. В помещении, избранном для анализа микрофлоры воздуха, поставить на горизонтальную поверхность чашку с МПА и открыть крышку на 5 минут.

3. Чашку Петри закрыть, подписать и поставить в термостат с t = 25˚С на 2-е суток.

Дата снятия опыта-

1. Произвести подсчет выросших на агаре колоний бактерий и грибов.

Известно, что на площадь в 100 см² в течении 5 минут осаждается столько бактериальных клеток, сколько их находится в 10 л воздуха.

а) Определить площадь чашки Петри: S = πr²; S = 3,14 х …………..

б) Подсчитать количество колоний в чашке Петри: бактерий – шт

грибов - шт

в) Сделать перерасчет количества колоний бактерий и грибов на 100 см² агаровой пластинки:

кол-во бактерий на 100 см² -

кол-во грибов на 100 см² -

г) Рассчитать кол-во микроорганизмов, содержащихся в 1 м³.

1. Полученные данные занести в таблицу, сделать вывод.

Результаты и обсуждение:

Исследованное помещение	Время экспозиции, мин	Число колоний на 100 см2 агаровой пластинки		Число в 1 м3 воздуха
		бактерий	грибов	бактерий	грибов

Вывод:

Работа 2. Особенности роста микроорганизмов на плотной питательной среде

Ход работы:

Описать отдельную колонию выросшую на поверхности агара в чашки Петри в работе «Микрофлора воздуха» по следующим признакам:

1.Форма колонии: (округлая, округлая с фестончатым краем, округлая c валиком по краю, ризоидная, амебовидная, нитевидная, складчатая, неправильная, концентрическая, сложная).

2. Размер (диаметр колонии в мм; если d <1 мм, колония – точечная).

2. Оптические свойства (прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная; блестящая, матовая, флуоресцирующая).

3. Цвет колонии.

4. Поверхность (гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая).

5. Профиль (изогнутый, кратерообразный, бугристый, плоский, выпуклый, каплевидный, конусовидный, врастающий в агар).

6. Край колонии (гладкий, волнистый, зубчатый, лопастной, неправильный, реснитчатый, ворсинчатый, ветвистый).

Определяют при малом увеличении микроскопа, помещая чашку Петри на столик микроскопа крышкой вниз.

8.Структура колонии (однородная, мелкозернистая, крупнозернистая, струйчатая, волокнистая).

Анализируют при малом увеличении микроскопа.