Занятие 5 Работа 1. Маслянокислое брожение

Маслянокислое брожение – сложный процесс превращения углеводов в масляную кислоту и другие продукты, совершаемой группой анаэробных спороносных бактерий.

Схематично процесс может быть изображен в виде уравнения:

C₆H_1`2O₆ → CH₃ – CH₂ – CH₂ – COOH + 2 CO₂ + 2 H₂ + 495 кдж

Дата закладки опыта -

Материалы и оборудование: средняя и большая пробирки, резиновая пробка, пинцет, скальпель, водяная баня, спиртовка, пробиркодержатель; мел в порошке, р-р Люголя, 5% р-р хлорида железа; клубни картофеля

Ход работы:

1. Неочищенный картофель нарезать ломтиками, которые могут легко войти в пробирку.

2. Пробирку на 1/3 объема заполнить ломтиками картофеля, добавить щепотку мела и налить воду почти до верха.

3. Поставить пробирку в водяную баню (t = 80˚С) на 10-15 минут.

4. Пробирку закрыть пробкой и поставить в термостат с t = 35˚С на 2-3 суток.

В культуральной жидкости обнаруживают бактерии маслянокислого брожения, главным образом - Clostridium pasteurianum – подвижные палочки с закругленными концами, одиночные и парные. В старых культурах у одного из концов клетки обнаруживают спору.

Дата снятия опыта-

Задание: Приготовить фиксированный и окрашенный микропрепарат микроорганизмов:

1. Микрофлора маслянокислого брожения.

Рассмотреть микропрепараты при увеличении микроскопа МИ-90^х, сделать рисунки с обозначениями.

2. Провести качественную реакцию на масляную кислоту:

к 5 мл культуральной жидкости добавить 2 мл 5% р-ра FeCl₃. При нагревании

Работа 2. Молочнокислое брожение

Молочнокислое брожение – анаэробный процесс разложения углеводов ферментами молочнокислых бактерий с образованием молочной кислоты и другими продуктами.

При гомоферментативном брожении молочный сахар образует только молочную кислоту:

C₆H_1`2O₆ → 2CH₃ – CНОH –COOH + 75,6 кдж

При гетероферментативном брожении кроме молочной кислоты образуются другие продукты – летучие кислоты, спирты, эфиры.

Возбудителем гомоферментативного брожения являются:

• Streptococcus lactis, имеющие вид овальных кокков диаметром 0,5 – 1,0 мкм. Располагаются кокки в культуре попарно (диплококки) или короткими цепочками (стрептококки), реже - одиночными клетками;

• Streptococcus cremoris – клетки расположены более длинными цепочками;

• Lactobacterium bulgaricum (болгарская палочка) – крупная грамположительная бактерия (длиной 4 – 5 мкм), неподвижная, располагается в виде отдельных клеток и коротких цепочек (стрептобактерия). Оптимальная температура ее развития 40 - 45˚С;

• Lactobacterium acidopfilum (ацидофильная палочка) по морфологии близка к болгарской, но имеет другой температурный оптимум развития - 37˚С;

• Lactobacterium cucumeris (огуречная палочка) короткая грамположительная бактерия, неподвижная. Располагается парами или цепочкой. Опт. температура ее развития 20-25˚С.

Микроорганизмы гомоферментативного брожения чаще встречаются в заквашенных овощах и силосе. К ним относятся Lactobacterium brassicae fermentatae (капустная палочка), Betabacterium breve, Leuconostoc mesenteroides и др.

Ход работы:

Задание: 1. Приготовить фиксированные и окрашенные микропрепараты микроорганизмов:

1. Микрофлора кефира.

2. Микрофлора простокваши.

3. Микрофлора капустного рассола.

Рассмотреть микропрепараты при увеличении микроскопа МИ-90^х, определить виды, сделать рисунки с обозначениями.

1. Провести качественную реакцию на молочную кислоту:

к 2 мл фильтрата добавить 5 мл конц. Н₂SO₄ и 10 капель насыщ. р-ра CuSO₄. Нагревать при потряхивании на водяной бане при 100˚С в течение 5 минут. После охлаждения добавить 3-5 капель 0,2% спиртового р-ра тиофена. В присутствии молочной кислоты возникает вишнево-красное окрашивание.