3 Экспериментальная часть

3.1 Материалы и методы

3.1.1 Объекты исследования

Объектами исследования являлись следующие образцы: трава пустырника (Leonurus L.) (НПК «БИОТЕСТ», Республика Беларусь), лабораторная настойка травы пустырника и настойка травы пустырника (НП ЧУП «Диалект», Республика Беларусь).

На рисунке 3.1 представлена схема эксперимента.

3.1.8	Спектрофотометрическое исследование фракций флаоноидов
3.1.6	Определение сухого остатка

Трава пустырника (НПК «БИОТЕСТ», Республика Беларусь)

Настойка травы пустырника (НП ЧУП «Диалект», Республика Беларусь)

Лабораторная настойка травы пустырника

3.1.4 3.1.5	Количественное определение суммы флавоноидов
3.1.6	Гель-хроматографическое разделение флавоноидов
3.1.7	ТСХ флавоноидов

Рисунок 3.1 – Схема эксперимента

3.1.2 Материалы и реактивы

Этиловый спирт (70 %). В мерную колбу вместимостью 1000,0 мл наливали 760,0 мл 92 % этилового спирта, дистиллированной водой доводили объем раствора до метки.

Алюминия хлорид (1 %). В мерную колбу вместимостью 25,0 мл помещали 0,45 г AlCl₃×6H₂О, 95 % этиловым спиртом доводили объем раствора до метки.

Алюминия хлорид (5 %). В мерную колбу вместимостью 10,0 мл помещали 0,37 г AlCl₃×6H₂О, 95 % этиловым спиртом доводили объем раствора до метки.

Раствор Государственного стандартного образца (ГСО) рутина. 0,02 г (точная навеска) ГСО рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 ⁰С в течение 3 ч, растворяли в 85,0 мл 95 % этилового спирта в колбе вместимостью 100,0 мл при нагревании на водяной бане, охлаждали, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 100,0 мл, доводили объем раствора 95 % этиловым спиртом до метки.

3.1.3 Получение лабораторной настойки травы пустырника

Принцип метода. Спиртовое извлечение веществ с помощью…

Ход работы. Измельчали траву пустырника (НПК «БИОТЕСТ», Республика Беларусь), взвешивали (18,90 ± 0,5) г, помещали в экстрактор, заливали 70 % этиловым спиртом из расчета 15,0 г травы на 200,0 мл спирта, помещали в темное место на 5 суток. После экстракции настойку отфильтровывали.

3.1.4 Количественное определение суммы флавоноидов в траве пустырника

Принцип метода. Снимаются спектры спиртовых извлечений из образцов сырья в диапазоне длин волн от 360 до 450 нм. Максимум поглощения окрашенного комплекса спиртового извлечения из травы пустырника пятилопастного с раствором алюминия хлорида наблюдался при длине волны 400±2 нм. Аналогичный максимум поглощения отмечен для комплекса ГСО рутина с алюминия хлоридом. Это дает возможность использовать длину волны 400 нм в качестве аналитической. Стабильность комплекса определяемой cуммы флавоноидов травы пустырника пятилопастного и ГСО рутина достигается после 40 мин, устойчивость комплекса сохраняется в течение 20-30 мин.

Ход работы. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1,0 мм. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 100,0 мл, прибавляли 50,0 мл 70 % этилового спирта. Колбу взвешивали с погрешностью ±0,01 г, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивали и доводили до первоначальной массы 70 % этиловым спиртом. Содержимое колбы фильтровали через воронку с вложенным ватным фильтром, отбрасывая первые 20,0 мл фильтрата.

В мерную колбу вместимостью 25,0 мл помещали 2,0 мл профильтрованного извлечения, добавляли 2,0 мл 1,0 % раствора алюминия хлорида в 95 % этиловом спирте и доводили объем раствора 95 % этиловым спиртом до метки. Для приготовления раствора сравнения в другую колбу вместимостью 25,0 мл помещали 2,0 мл фильтрата и доводили до метки 95 % этиловым спиртом. Измерение оптической плотности проводили через 40 мин на спектрофотометре «Specord M40» (CarlZeiss, ГДР) при дине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора ГСО рутина. Для этого 2,0 мл 0,02 % раствора стандарта помещали в мерную колбу вместимостью 25,0 мл, прибавляли 2,0 мл 1 % раствора алюминия хлорида и доводили объем до метки 95 % этиловым спиртом.

С

(3.1)

уммарное содержание флавоноидов в сухом сырье ( , г) в пересчете на стандарт и абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле:

где – оптическая плотность испытуемого раствора;

– оптическая плотность раствора ГСО стандарта;

– масса сырья, г;

– масса ГСО стандарта, г;

– потеря в массе при высушивании сырья, % [3].