Лабораторная работа № 15.3

Определение группы крови человека с использованием цоликлонов анти-А и анти-В

Групповую принадлежность крови человека определяет совокупность генетически детерминированных эритроцитарных агглютиногенов и плазменных агглютининов. В основе разделения крови людей на четыре группы в системе АВ0 лежит наличие или отсутствие в мембране эритроцитов агглютиногенов А и В, а в плазме крови агглютининов α и β. При взаимодействии одноименных агглютиногенов и агглютининов происходит реакция изогемагглютинации, т.е. склеивание эритроцитов.

В настоящее время для определения групп крови человека широко используют синтетические цоликлоны – растворы с аналогами агглютининов α и β. Этот метод надежен и прост: агглютинация происходит между одноименными агглютиногенами исследуемой крови и агглютининами цоликлонов (анти-А и анти-В). Цоликлоны являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразуюших В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы.

Цель: определить группу крови человека в системе АВ0.

Объект исследования: человек.

Оборудование и материалы: игла-скарификатор, тарелка с маркировкой «анти-А» и «анти-В», предметное стекло, цоликлоны анти-А и анти-В, растворитель для цоликлонов, спирт, настойка йода, вата, почкообразный тазик.

Порядок выполнения. Поместить цоликлоны на тарелку (по 0,1 мл). Проколоть палец, получить каплю крови. Одним уголком покровного стекла внести небольшое количество крови в цоликлон анти-А, другим уголком – в цоликлон анти-В. Перемешать, покачивая тарелку. Агглютинация обычно наступает через 3–5 с. Наблюдение следует вести 2–3 мин ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А и В. При неотчетливой реакции 2–3 мин подержать тарелку под настольной лампой, нагревая реагирующие компоненты.

Результаты. Оценить реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В по Таблице 15.2.

Таблица 15.2.

Определение группы крови по реакции исследуемых эритроцитов

Реакция эритроцитов с цоликлонами		Группа крови
анти-А	анти-В
–	–	0 (I)
+	–	A (II)
–	+	B (III)
+	+	AB (IV)

Выводы. Указать группу крови человека в системе АВ0 и обосновать свое заключение.

Лабораторная работа № 15.4 Определение резус-фактора крови экспресс-методом

Кроме агглютиногенов, определяющих группы крови в системе АВО, эритроциты могут содержать в разных комбинациях и многие другие агглютиногены. Среди них особое значение имеет резус-фактор. Rh-агглютиноген не имеет в плазме «врожденных» агглютининов. Они могут вырабатываться иммунной системой резус-отрицательного реципиента при переливании ему резус-положительной крови или в организме резус-отрицательной матери, беременной резус-положительным плодом. В первом случае повторное переливание резус-несовместимой крови может привести к аутоиммунному гемолизу, т.к. резус-антитела являются сильнейшими гемолитическими ядами. Во втором случае иммунная система матери вырабатывает резус-антитела к эритроцитарным антигенам плода, что может привести к частичному, а при высоком титре антител, к полному гемолизу эритроцитов и внутриутробной гибели плода.

Цель: определить группу крови человека по системе Rh (резус-фактор).

Объект исследования: человек.

Оборудование и материалы: игла-скарификатор, вата, тарелка, стеклянная палочка, спирт, йод, цоликлон анти-D Супер.

Порядок выполнения: На тарелку нанести каплю (0,1 мл) цоликлона анти-D Супер. Проколоть палец иглой-скарификатором и рядом с реагентом поместить одну каплю (0,01–0,05 мл) исследуемой крови. Стеклянной палочкой смешать кровь с реагентом. Тарелку рекомендуется покачивать не сразу, а через 20–30 с после смешивания реагента с кровью. Наблюдать за реакцией. Если исследуемая кровь резус-положительная (Rh+), то в пробе через 10–15 с начинает развиваться реакция агглютинации. Четко выраженная агглютинация наступает через 30–60 с. Если кровь резус-отрицательная (Rh–), агглютинация отсутствует. Результаты реакции учитывать через 3 мин.

Результаты. Указать, наступила или нет реакция агглютинации в пробе.

Выводы. Указать Rh-принадлежность исследованной крови и обосновать свое заключение.