Иммунобиологические препараты, используемые с диагностическими целями
Препараты для серологической диагностики
Диагностикумы (антигенные)
Представляют собой инактивированные нагреванием либо воздействием формалина цельные микробные клетки (корпускулярные АГ) или выделенные тем или иным способом и очищенные антигенные субстанции микробов (молекулярные АГ), сорбированные на частицах нейтрального носителя (эритроциты, латекс, целлюлоза и др.).
Используются при постановке серологических реакций (прямых либо непрямых). Предназначены для обнаружения антител к возбудителям инфекционных заболеваний в пробах сыворотки крови больных.
Брюшнотифозный ОН – диагностикум
Взвесь бактерий S. Typhi, убитых обработкой формалином. Применяется для серодиагоностики брюшного тифа в развернутой реакции агглютинации (РА) Видаля. Реакция основана на обнаружении в сыворотке крови больных людей антител-агглютининов, которые появляются в конце 1-й – начале 2-й недели заболевания. Позволяет оценивать динамику нарастания и длительность сохранения антител. Диагностическим титром реакции Видаля считается разведение сыворотки больного не ниже 1 : 200.
Сальмонеллезный О – диагностикум.
Взвесь сальмонелл, убитых нагреванием (+90оС). Применяется для ретроспективной серодиагностики сальмонеллезов в развернутой реакции агглютинации (РА) типа Видаля. Реакция основана на обнаружении в сыворотке крови больных людей антител-агглютининов к соматическому О-антигену сальмонелл, которые появляются в конце 1-й недели заболевания. Диагностическим титром реакции считается разведение сыворотки больного не ниже 1 : 200.
Диагностикум бруцеллезный
Единый бруцеллезный диагностикум представляет собой взвесь бруцелл, убитых фенолом и подкрашенных метиленовым синим (для лучшей визуализации реакции). Применяется для серодиагностики бруцеллеза в развернутой реакции агглютинации Райта и реакции агглютинации на стекле Хеддлсона.
Реакция Райта с бруцеллезным диагностикумом ставится по типу реакции Видаля. Положительные результаты отмечаются спустя 1–2 недели после начала заболевания и сохраняются у переболевших многие годы. Диагностическим считается титр антител к бруцеллам 1 : 200 и выше.
Реакция Хеддлсона (пластинчатая РА) применяется для ускоренной серодиагностики. РА ставится на стекле с неразведенной сывороткой больного и с концентрированным бруцеллезным диагностикумом. Реакция положительна при наличии агглютинации на ++ (два плюса) в дозах сыворотки 0,02–0,01 мл.
Диагностикум эритроцитарный (из шигелл Зонне, Флекснера).
Выделенный из Sh. sonnei либо Sh. flexneri с помощью водно-фенольной экстракции на холоду липополисахаридный соматический О-антиген адсорбируют на стабилизированных формалином эритроцитах барана. Применяются в реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации – РНГА (РПГА) для ретроспективного обоснования диагноза дизентерии при стертых формах, а также для уточнения вида возбудителя. Диагностическим титром при дизентерии, вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение исследуемой сыворотки больного не ниже 1 : 200, а шигеллами Зонне – 1 : 100.
Сывороточные препараты
Диагностические иммунные сыворотки
Диагностические иммунные сыворотки получают путем иммунизации (гипериммунизации) лабораторных животных (кроликов) взвесью убитых нагреванием или обработкой формалином микробов соответствующего вида и серологической группы либо серологического варианта. Иммунизацию могут проводить с помощью выделенных из микробов и очищенных антигенов (О, Н, К, Vi и др.). Если требуется получить антитоксическую сыворотку (антитоксин), то иммунизацию осуществляют соответствующим анатоксином.
Полученная после иммунизации животных цельная сыворотка содержит антитела ко всем антигенным субстанциям микроба и носит название «нативная» или «неадсорбированная». Для освобождения нативной сыворотки от балластных, перекрестно-реагирующих антител, а также с целью получения монорецепторных (моновалентных, моноспецифичных) сывороток проводят адсорбцию по Кастеллани.
Адсорбированная моновалентная сыворотка содержит антитела только к одному типу антигена либо к отдельной антигенной детерминанте. Адсорбированная поливалентная сыворотка содержит смесь антител к нескольким антигенам либо антигенным детерминантам.
Применяются для идентификации микроорганизмов по антигенному составу (серотипирование), определения токсигенности микроорганизмов и типа микробного токсина, выявления и идентификации вирусов. Используются в различных серологических реакциях: реакция агглютинации (РА), реакция преципитации (РП), реакция нейтрализации (РН), реакция вирусной нейтрализации (РВН), реакции связывания комплемента (РСК), реакция торможения гемагглютинации (РТГА) и др.
Агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная О – сыворотка
Получают путем иммунизации кроликов взвесью сальмонелл соответствующей серологической группы, убитых нагреванием. Адсорбируют по Кастеллани.
Используют при постановке реакции агглютинации на стекле с целью определения видовой и групповой принадлежности выделенной культуры сальмонелл.
Ботулиническая диагностическая сыворотка (типов А, В, Е, F)
Получают из крови лошадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксинами разных серологических типов. Очищают и концентрируют методом «Диаферм-3».
Моновалентные сыворотки типов А, В, Е, F используются при диагностике ботулизма, для определения серологического типа токсина в исследуемом материале (фильтрат пищевого продукта) в реакции нейтрализации на белых мышах.
Диагностикумы антительные (иммуноглобулиновые)
Представляют собой высокоспецифичные диагностические препараты, основу которых составляют выделенные из иммунных сывороток иммуноглобулины (IgG) к антигенам возбудителей инфекционных болезней. Иммуноглобулины адсорбируют на эритроцитах барана, стабилизированных глютаровым альдегидом и обработанных раствором танина (либо хлорида хрома).
Используются при постановке непрямых серологических реакций – реакция обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА). Предназначены для обнаружения возбудителей инфекционных болезней (в т.ч. особо-опасных) либо их антигенов в патологическом материале, в сырье животного происхождения, продуктах питания, объектах внешней среды.
Диагностикум эритроцитарный антительный (иммуноглобулиновый) сибиреязвенный
Вакцинный штамм СТИ (бескапсульный авирулентный штамм сибиреязвенной бациллы) применяют для иммунизации лабораторных животных с целью получения высокоактивной иммунной сыворотки. Очищенный сибиреязвенный иммуноглобулин G адсорбируют на эритроцитах с использованием химических конъюгирующих агентов (глютаровый альдегид, танин).
Применяют при экспресс-диагностике сибирской язвы путем выявления возбудителя либо его термостабильного антигена в реакции обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА) в патологическом материале, в сырье животного происхождения, продуктах питания, объектах внешней среды.
Комплемент сухой
Диагностический препарат представляющий собой сыворотку крови морских свинок, стабилизированную сернокислым магнием и высушенную методом лиофилизации.
Сухой комплемент предназначен для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (РСК), используемой в диагностике различных инфекционных болезней: сифилиса, хронической гонореи, риккетсиозов и др.
Рабочее разведение комплемента определяют в предварительном опыте – реакции гемолиза.
Препараты для аллергодиагностики
Представляют собой выделенные из микробных культур и очищенные иммунологически активные компоненты микробных клеток либо продукты микробного метаболизма. Являются гаптенами, способны инициировать гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). Поскольку инфекционная аллергия высокоспецифична и имеет общие клеточные механизмы с формирующимся иммунитетом, использование кожных аллергических реакций с диагностическими аллергенами позволяет: подтвердить факт инфицирования обследуемого человека, оценить состояние иммунитета после инфицирования либо вакцинации.
Очищенный туберкулин
В нашей стране применяется сухой очищенный туберкулин, полученный в 1965 г. М.А. Линниковой, – туберкулин ППД-Л (PPD – очищенный белковый дериват). Представляет собой экстракт белковых фракций микобактерий. Используется для постановки кожной аллергической пробы (реакция Манту). Туберкулиновые пробы основаны на определении туберкулиновой аллергии – повышенной чувствительности организма к туберкулину, возникшей вследствие заражения микобактериями туберкулеза или иммунизации вакциной БЦЖ (BCG). Туберкулиновая аллергия является иммунологически специфичной и относится к аллергическим реакциям замедленного типа. Основные цели постановки реакции: определение инфицированности, оценка течения туберкулезного процесса, определение эффективности вакцинации и отбор контингентов для ревакцинации против туберкулеза.
Туберкулин вводят внутрикожно в средней трети предплечья в строго определенной дозировке (2 ТЕ). Учитывают реакцию через 24-72 часа по образованию гиперемии и папулы.
Бруцеллин
Применяется при постановке кожно-аллергической пробы (реакция Бюрне). Проба Бюрне определяет способность организма специфически отвечать местной реакцией кожи на внутрикожное введение бруцеллина - фильтрата бульонной культуры бруцелл. Реакция становится положительной па 3-4-й неделе от начала болезни, в дальнейшем сохраняется на протяжении длительного периода (иногда до нескольких лет) даже после полного клинического выздоровления.
На ладонной поверхности предплечья внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6–8 часов могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 часа. Реакция чувствительна и появляется не только у больных и переболевших, но и у вакцинированных людей, в связи с чем необходим обязательный учет анамнестических данных обследуемых людей.