1. При выделении облигатных аэробов и факультативных анаэробов изучают культуру, выросшую на скошенном агаре.

а. Прежде всего, накопленную культуру проверяют на чистоту путем микроскопирования приготовленного из нее мазка.

б. Затем проводят серологическую идентификацию культуры до серовара (если это необходимо), с помощью реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.

в. Для изучения биохимических свойств культуру засевают на специальные питательные среды.

г. Определяют также вирулентность культуры (см. ниже раздел «Выявление и оценка вирулентности»).

д. И наконец, в случае необходимости, определяют эпидемиологические маркеры выделенной чистой культуры (такие, как фаготип, колицинотип и др.), включая антибиотикограмму (чувствительность выделенной культуры к антибиотикам).

2. При выделении строгих и аэротолерантных анаэробов изучают культуру, выросшую на среде Китта-Тароцци.

а. Прежде всего, как и при выделении аэробов, накопленную культуру проверяют на чистоту путем микроскопирования приготовленного из нее мазка.

б. Затем проводят серологическую идентификацию культуры до серовара (если это необходимо), с помощью реакции агглютинации с моновалентными сыворотками. В случае выделения клостридий серовар определяют по типу белкового токсина в реакции нейтрализации (этот метод разбирается в курсе иммунологии, а также – в применении именно к клостридиям – в курсе медицинской бактериологии).

в. Для изучения биохимических свойств культуру засевают на специальные питательные среды.

г. Определяют также вирулентность культуры (см. ниже раздел «Выявление и оценка вирулентности»). Особенно это важно в случае выделения клостридий, которые идентифицируются именно по одному из факторов вирулентности – белковому токсину.

д. И, наконец, при необходимости, определяют эпидемиологические маркеры выделенной чистой культуры, включая антибиотикограмму (чувствительность выделенной культуры к антибиотикам).

Д. Многие современные лаборатории оснащены приборами автоматической идентификации бактериальных культур, такими, как гемокультиватор BACTEC (Рис. 9-6 и 9-7), микробиологический анализатор PHOENIX (Рис. 9-8 и 9-9). В этом случае работа врача-бактериолога значительно облегчается, он освобождается от проведения многих однообразных и требующих больших временных затрат процедур, а его рабочее место больше напоминает рабочее место современного менеджера (Рис. 9-10 и 9-11). Однако и в этом случае принцип проведения культурального метода исследования полностью совпадает с изложенным в этом разделе, лишь второй и третий этапы осуществляются без участия человека – они практически полностью автоматизированы. Но при этом следует помнить, что компьютер может работать только с той информацией, которую в него «вложил» человек, поэтому если какой-либо вид микроорганизма по той или иной причине не внесен в программу автоматического анализатора, работа по его выделению и идентификации проводится по изложенному в этом разделе классическому алгоритму.

9.2. Культуральные признаки бактерий

Культуральные признаки – это вторая, вслед за морфологическими, группа признаков, используемых для описания и, соответственно, идентификации бактериальной культуры.

А. Питательные потребности описываются, прежде всего, как простые (способность к росту на простых натуральных питательных средах) или сложные (необходимость использования для культивирования культуры сложной натуральной питательной среды). Кроме того, при характеристике сложных питательных потребностей приводят список тех сред, к росту на которых способна данная бактериальная культура.

Б. Оптимальная питательная среда – эта среда, наиболее подходящая для культивирования данного вида бактерий. Даже для культивирования бактерий с простыми питательными потребностями могут быть разработаны сложные питательные среды, на которых данный вид растет лучше, чем на простых средах.

В. Температура культивирования – оптимальная температура для более быстрого роста данного вида.

Г. Условия аэрации – состав газовой смеси, наиболее полно отвечающей физиологическим потребностям данной культуры. Такая атмосфера культивирования позволяет получить более быстрый рост культуры (см. раздел 8.4).

Д. Скорость роста – время появления видимого роста (налета, колоний, мути – в зависимости от консистенции питательной среды и концентрации инокулята) после посева бактериальной культуры. Зависит от времени, затрачиваемой бактериальной клеткой на одно деление (например, у кишечной палочки – примерно 20 минут, у туберкулезной палочки – примерно 18 часов), которая, в свою очередь, является производным и качества питательной среды и условий культивирования. При характеристике вида дается его скорость роста на оптимальной питательной среде в оптимальных условиях культивирования.

Е. Характер роста на жидких и плотных питательных средах – очень важный культуральный признак, о нем говорилось выше (раздел 8.5).