Выполнение работы.

7. Используемое оборудование и материалы.

1. Колориметр фотоэлектрический КФК-2.

2. Источники света: осветитель эндоскопический ОС-150 со световодным кабелем; светодиодная матрица с набором светодиодов, излучающих в красной области спектра; коллимированный источник света на базе лампы накаливания, используемый в микроскопии и для экспериментов на оптической скамье.

3. Люксметр (любой из выпускаемых промышленно, имеющий диапазон измерения освещенностей до 10⁵ лк).

4. Микроскоп лабораторный с увеличением порядка 400-500 (безыммерсионный).

5. Штатив для установки образцов в процессе облучения или оптический столик из комплекта оптической скамьи.

6. Прямоугольные кюветы, пробирки, пипетки, протирочный материал (тонкая ткань, вата), спирт.

7. Физиологический раствор.

8. Фотосенсибилизаторы (ФОТОГЕМ, ФОТОСЕНС).

9. Ингибитор: гипосульфит (тиосульфат) натрия, в кристаллах.

10. Образцы крови (предлагаются преподавателем для исследования на основании лабораторных анализов поликлиники).

11. Дистиллированная вода.

Примечание: для исследования преподавателем может быть предложен новый тип ФС или ингибитора, а также различные образцы крови.

Приложение к работе содержит, кроме описания и математической модели, правила порядка эксплуатации приборов и оборудования и методику работы с биологическими препаратами.

8. Порядок выполнения работы.

1. Изучить описание методики измерений, проанализировать схему эксперимента и порядок работы с измерительной аппаратурой (колориметр, люксметр, микроскоп, источник излучения).

2. Подготовить ответы на контрольные вопросы.

3. Приготовить растворы ФС в дистиллированной воде, снять необходимые характеристики пропускания растворов с помощью колориметра (Т = 6070%). Поместить заготовленные растворы в темноту.

4. Приготовить суспензию эритроцитов нужной концентрации путем разбавления предложенного образца крови физраствором (Т = 2030%). Предпочтительнее использовать кровь с введенными консервантами (гепарин и др.) для повышения стабильности ее оптических характеристик. Снять спектральную характеристику пропускания приготовленной суспензии и выделить оптимальную длину волны для наблюдения ожидаемого ФДЭ.

5. Приготовить с каждым из ФС не менее 3 проб (контрольная – темновая, 2 пробы ФС + эритроциты (одна проба облучается сразу, другая после инкубации), ФС + эритроциты + ингибитор). Зафиксировать время приготовления одной из проб ФС+эритроциты для дальнейшего подсчёта времени инкубации. Инкубация проводится для накопления ФС в клетке. Время инкубации ФС ФОТОГЕМ должно составлять не менее получаса ФС ФОТОСЕНС - около часа. Поместить все образцы в темное место (лабораторный шкаф).

6. Измерить начальную плотность всех проб с помощью колориметра.

7. Произвести визуальный контроль всех проб с помощью микроскопа. Зарисовать результаты наблюдений с указанием характерных размеров эритроцитов и других наблюдаемых микрообъектов.

8. Измерить плотность потока выбранного источника излучения. Начать облучение одного из образцов ФС + эритроциты, выбрав время облучения перед первым измерением не более 0,5 минут. Производить измерения оптической плотности и пропускания образцов после каждого облучения, постоянно держа необлучаемые в данный момент образцы в темноте. При каждом измерении производить визуальный контроль состояния эритроцитов через микроскоп. Каждое измерение должно быть выполнено не менее 5 раз для расчёта среднего значения и среднеквадратичной ошибки измерения. При появлении эффекта (изменении оптической плотности образца) измерения вести каждую минуту. После окончания серии измерений (выхода на плато оптической плотности) произвести повторный контроль освещенности. Данные измерений занести в таблицу.

9. Сравнить полученные экспериментальные результаты с теоретической зависимостью, рассчитанной по формуле (5). Построить графики всех полученных экспериментальных кривых.

10. Выполнить пункты 4 - 8 с каждым из предложенных преподавателем ФС. Оценить по данным измерений дозу облучения, полученную каждым из облученных образцов.

11. Составить описание проделанных согласно п.3-10 действий и анализ полученных результатов.