Постановка непрямой реакции агглютинации (по Кумбсу)

Вначале ставят реакцию прямой агглютинации и после 1 часа инкубации в термостате эритроциты отмывают физио­логическим раствором. После каждого добавления физиологи­ческого раствора эритроциты встряхивают и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 минут.

К отмытым эритроцитам добавляют одну каплю рабочего раствора антиглобулиновой сыворотки, содержимое пробирок встряхивают и оставляют на 15 минут при комнатной температуре. Затем пробирки перено­сят в центрифугу, обороты доводят до 1000 об/мин, далее цен­трифугу выключают и проводят чтение реакции так же, как и при прямой реакции агглютинации.

Данные, полученные в реакции в виде символов( букв латинского алфавита) , записывают в соответствующую форму.

Затем проводят анализ сведений с целью установления генотипов исследуемых животных по каждой полиморфной системе.

Установить генотип- это значит определить аллели, унаследованные потомком от отца и матери.

Методические указания по выполнению заданий

Задание 1. Изучить методику определения антигенного со­става эритроцитов у крупного рогатого скота, свиней, лошадей.

Задание 2. Определить антигенный состав эритроцитов у лошадей, полученные данные записать в таблицу 3.

Задание 3. На основании нижеприведенных данных устано­вить антигенный состав эритроцитов крови лошадей литовской тяжеловозной породы (табл.4).

Таблица 3 - Серологический тест реакции агглютинации и гемолиза

Дата

1. Чтение через часов

Поставлено через часов

2. Чтение через часов

3. Чтение через часов

Тестировано сывороткой

А а

А d

D а

Db

Dc

Dd

D е

Dm

D g

Dh

Dk

Df

К a

Qa

Кличка, индивидуальный номер животного

Таблица 4 – Серологический тест реакции аглютинации

Кличка, инди­видуальный номер живот­ного

Тестировано сывороткой

Антигены систем

Аа

Ad

Da

Db

Dc

Dd

Dе

Dm

Dg

Dh

Dк

Df

Ка

Qа

А

D

К

Q

1. Вояж

2. Глуоснис

3. Дукат

4. Жаслас

5. Жаргон

6. Курмис

7. Лангуст

8. Сункумус

9. Ажурная 41

10. Айва 8

11. Алгебра 13

] 2. Альвеола 34

13. Анжела 22

14. Астра 69

15. Жаклин 6

16. Жасминка 21

17. Женева 15

18. Жисла 16

19. Жужука 58

20. Жюстина 35

21. Шаланда 58

22. Шалунья 49

23. Шашка 34

24. Шахиня 81

25. Шелковая 6

26. Шутка 12

27. Ширше 18

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГРУПП КРОВИ ДЛЯ КОНТРОЛЯ

ДОСТОВЕРНОСТИ ПРОИСХОЖДЕНИЯ

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ животных

Общие принципы установления происхождения

В племенной работе большое значение имеет точность дан­ных о происхождении. Лишь при соблюдении этого условия можно правильно оценить племенную ценность животных. В этом случае контроль происхождения исключает возмож­ность использования на племя животных с ошибочно учтенным происхождением, предупреждая тем самым стихийное родст­венное и неродственное разведение, повышает достоверность оценки производителей и сохраняет генофонд отдельных пород.

Контроль происхождения по группам крови основывается на их широком наследственном разнообразии, кодоминантном наследовании и неизменяемости в онтогенезе. Типы крови по­томков формируются только из тех аллелей, которые имеют их родители. Выявление у потомков антигенов или аллелей, отсутст­вующих у одного или у обоих родителей, служит основанием для исключения правильности племенной записи такого животного.

Проверка достоверности происхождения осуществляется сопоставлением фенотипов (состава антигенов) или генотипов по группам крови между потомками и их родителями. Исклю­чение ложного отцовства (материнства) по антигенам проводит­ся в случаях, когда по каким-либо причинам нельзя установить генотипы родителей. Состав антигенов у потомков и родителей выявляют серологическими тестами, а полученные данные со­поставляют при семейном анализе, при этом используют метод исключения, когда из факторов крови потомков производителя исключают факторы их матерей, а по оставшимся факторам устанавливают возможность отцовства. Несоответствие антиге­нов в любой из систем групп крови является доказательством ошибочной записи происхождения.

Для личного определения происхождения по отдельным ан­тигенам необходимо:

1. различие антигенов у предполагаемых родителей, то есть у одного из родителей должен быть антиген, которого нет у другого;

2. отсутствие данных антигенов у матери, если определяет­ся отцовство, или у отца, если определяется материнство;

3. наличие у потомка только тех антигенов, которые имеют­ся у предполагаемых родителей.