Постановка реакции гемолиза

В вертикальные ряды лунок согласно обозначенной' симво­лике пипеткой вносят по 2 капли соответствующего реагента, а в последний ряд - 2 капли физиологического раствора. В гори­зонтальные ряды лунок вносят по 2 капли 2,5 %-ной суспензии эритроцитов.

Спустя 15-20 минут в каждую лунку пластины вносят по 1 капле кроличьего комплемента( при работе с кровью овец для осуществления контроля комплимента в каждую лунку капают по три капли физиологического раствора и одну каплю суспензии эритроцитов).

Путем легкого, но достаточно энергичного постукивания ладо­нью о край пластины систему встряхивают и ставят на 2 часа в термостат при температурах 28-30° С (для крупного рогатого скота, лошадей, овец), 37° С (для свиней). В течение этого срока содержимое пластины дважды встряхивают (через 30 и 60 минут инкубирования).

После двухчасовой выдержки в термостате проводят пер­вое чтение реакции (крупный рогатый скот, свиньи, овцы), а еще через 1 час второе чтение.

В реакции с эритроцитами лошадей первое чтение прово­дят через 30 минут инкубирования системы в термостате, вто­рое- через 1,5 часа после первого, третье – через 2 часа после второго чтения. Степень реакции определяют визуально и отмечают точкой или цифрой.

0. Баллов - обозначает отсутствие реакции гемолиза. Эритроциты находятся на дне лунки, надосадочная жидкость не окрашена;

1. балл - слабо заметное покраснение жидкости в виде ободка. Эритроциты лежат плотным осадком;

2. балла - жидкость умеренно окрашена, осадок эритроци­тов несколько уменьшен;

3. балла - жидкость красная, на дне лунки видно небольшое количество эритроцитов, при взбалтывании жидкость, мутнеет;

4. балла - жидкость умеренно окрашена, прозрачна, эритроцитов нет.

Баллы 3 и 4 означают положительную, а баллы 1 и 2 сомни­тельную реакцию, которая требует перепроверки. Последняя необходима в том случае, если при первом чтении реакции не было ( оценка «точка»), при втором - реакция наблюдалась ( балл 4), а также в тех случаях, когда в лунке контрольного ряда произошел гемолиз эритроцитов.

Постановка реакции агглютинации

В каждую пробирку вносят по 2 капли агглютинирующей сы­воротки и одну каплю 2,5%-ной суспензии эритроцитов. В послед­ний ряд (контрольный) вносят по 2 капли физиологического раствора и одну каплю суспензии. При работе с эритроцитами свиней через 1 час инкубирования содержимое лунок встряхива­ют, а спустя 1 час после встряхивания проводят чтение реакции.

При работе с эритроцитами овец читку проводят 2 раза- спустя 30 минут и через 2 часа с момента постановки реакции.

При работе с эритроцитами лошадей чтение реакции про­водят через 3 часа.

Реакцию читают визуально с помощью вогнутого зеркала. Выражен­ность реакции определяют по 5-ти балльной системе:

0. - отсутствие реакции;

1. - очень слабо выраженная агглютинация, которая не на­рушается при встряхивании;

2. - реакция слабая, но легко видимая, при которой эритро­циты склеиваются в очень мелкие комочки;

3. - все эритроциты соединяются в комочки разной величи­ны, раствор, в котором они плавают, непрозрачен;

4. - полная агглютинация, эритроциты склеиваются в один комочек, жидкость прозрачная.

Реакция читается перед источником рассеянного света( свет проникающий через матовое стекло) или в отраженном свете от вогнутого зеркала.