- •Отбор образцов крови
- •Подготовка комплемента к работе
- •Постановка реакции гемолиза
- •Постановка реакции агглютинации
- •Постановка непрямой реакции агглютинации (по Кумбсу)
- •Методические указания по выполнению заданий
- •Определение достоверности происхождения крупного рогатого скота
- •Определение достоверности происхождения свиней
- •Метод иммуногенетического контроля достоверности происхождения лошадей
- •Определение генотипа выбывших родителей на основе генотипов оставшихся родителей и потомков
- •Основные понятии и категории
Подготовка комплемента к работе
В реакции с эритроцитами крупного рогатого скота, лошадей и овец используют кроличий комплемент. Его размораживают при комнатной темпе-
Таблица 2- Приготовление сывороток рабочей концентрации
Титр сыворотки |
Расход капель реагента и физиологического раствора |
||||||||
1/2 |
12+12 |
25+25 |
38+38 |
50+50 |
60+60 |
70+70 |
80+80 |
L90+90 |
110+110 |
1/3 |
8+16 |
16+33 |
25+50 |
33+66 |
40+80 |
46+93 |
53+106 |
60+120 |
73+146 |
1/4 |
6+18 |
13+37 |
19+56 |
25+75 |
30+90 |
35+105 |
40+120 |
45+135 |
55+165 |
1/5 |
5+20 |
10+40 |
15+60 |
20+80 |
24+96 |
28+112 |
32+128 |
36+144 |
44+176 |
1/6 |
4+20 |
8+41 |
13+62 |
17+83 |
20+100 |
23+116 |
27+133 |
30+150 |
37+183 |
1/8 |
3+21 |
6+43 |
. 9+65 |
13+87 |
15+105 |
18+122 |
20+140 |
23+167 |
28+196 |
1/10 |
3+23 |
5+45 |
8+68 |
10+90 |
12+108 |
4+126 |
16+144 |
18+162 |
22+198 |
1/12 |
2+22 |
4+45 |
6+68 |
8+91 |
10+110 |
12+128 |
13+146 |
15+165 |
18+201 |
1/14 |
2+23 |
4+46 |
5+69 |
7+92 |
9+111 |
10+130 |
11+148 |
13+167 |
16+204 |
1/16 |
2+23 |
3+46 |
5+70 |
6+93 |
8+112 |
9+131 |
10+150 |
11+168 |
14+206 |
1/32 |
1+24 |
2+48 |
3+72 |
3+96 |
4+116 |
4+135 |
5+155 |
6+174 |
7+213 |
1/64 |
1+24 |
1+49 |
2+73 |
2+98 |
2+118 |
3+137 |
3+167 |
3+177 |
3+216 |
п |
10 |
20 |
30 |
40 |
50 |
60 |
70 |
80 |
100 |
Примечание: первая цифра колонки - количество капель реагента, вторая - количество капель физиологического раствора; п - число животных, которое можно тестировать рабочим раствором реагента.
ратуре и перед употреблением взбалтывают.
При постановке реакции гемолиза с эритроцитами свиней используют сухой комплемент морской свинки, растворенный физиологическим раствором в соотношении 1:20 или1:10 (для этой цели пригодны и нативные сыворотки морской свинки и кроликов).
Комплемент используют в течение дня, остаток утилизируют в связи с резким снижением его титра.
Маркировка пластин и штативов
На верхней стороне пластины с лунками слева направо пишут символы используемых реагентов. На левой стороне пластины сверху вниз напротив каждого ряда лунок (пробирок) обозначают порядковые номера суспензии эритроцитов исследуемых животных.
Символы реагентов записывают в следующем порядке.
При тестировании крупного рогатого скота: A1A2’Z’; B1B2G1G2; I1I2KO1O2P1P2QT1Y2A1’B’E2’E3’D’G’F2’I’I2’K’O’P’QY’B’’G’’; C1C2ER1 ; X1X2C’H’ ; FV; I; L ; M ; S1UH1U’’H’’ ; Z.
При тестировании свиней: Ac ; Bb ; Ca ; Da ; Db ; Ea ; Ed; Eb; Ee ; Ef ;Eg; Fa; Fb; Ga; Gb ; Ha ; Hb; Ia ; Jb; Ka; Kb; La ; Lb; Lc ; Lg; Ld ; Lf ; Lh ; Li ; Lm; Na; Nb; Oa ; Ob.
При тестировании лошадей :Aa ; Ab; Ac; Ad; Ae; Af; Ca; Da; Db; Dc; Dd; De; Df; Dg; Dh; Dk; Dl; Ka; Pa ;Pb; Qa; Qb; Qc; Ua.
При тестировании овец : Aa ;Ab ; Bb ;Bd; Bс;Bd; Be ; Bf ; Bg; Bh; Bi ;Ca ; Na; Da.
Для постановки реакции обычно используют не одну, а несколько пластин, которые группируют в ряды.
На левой стороне пластины пишут номер ряда по вертикали, на верхнем бортике- номер горизонтального ряда пластины.